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公开(公告)号：CN113512513B
公开(公告)日：2022-10-25
申请号：CN202110737301.2
申请日：2021-06-30
Applicant: 华东师范大学
Abstract: 本发明公开了一株解淀粉芽孢杆菌及其应用，属于生物技术领域。本发明提供了一株产胞外蛋白能力和淀粉能力强的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BA‑HS；将此菌株接种至发酵培养基中发酵，即可使发酵上清淀粉酶的表达量高达60U/mL；以此菌株为宿主表达编码1,4‑α‑葡聚糖分支酶的基因构建得到的重组菌接种至发酵培养基中发酵，可得发酵上清中1,4‑α‑葡聚糖分支酶的酶活最高达300U/mL。本发明方法在自然界筛选出解淀粉芽孢杆菌，根据特性分析找到淀粉酶和蛋白酶较高的菌株，针对性地探索野生解淀粉芽孢杆菌的电转条件，并对其进行优化，从而提高转化效率并成功表达异源蛋白。
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公开(公告)号：CN114149934A
公开(公告)日：2022-03-08
申请号：CN202010927185.6
申请日：2020-09-07
Applicant: 华东师范大学
Abstract: 一种蛋白质谷氨酰胺酶生产菌株、筛选、及特性分析方法。本发明公开了一种蛋白质谷氨酰胺酶高产菌株，该菌株命名为解朊金黄杆菌Chryseobacterium proteolyticumA4142，于2020年7月10日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.20337。该菌株呈杆状，不产芽孢，革兰氏阴性，其菌落为圆形，菌落状态饱满，边缘光滑，无缺刻，菌落有粘性。将所述解朊金黄杆菌A4142菌株在培养基中发酵培养，产酶量高达2.15U/mL，且所述解朊金黄杆菌A4142是经过食品安全认证的菌株。本发明还公开了一种新型的蛋白质谷氨酰胺酶高产菌株的筛选方法，并对其进行特性分析，确定该菌株为解朊金黄杆菌。本发明在蛋白质谷氨酰胺酶的工业化生产方面具有良好的实施前景。
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公开(公告)号：CN110684703A
公开(公告)日：2020-01-14
申请号：CN201910938663.0
申请日：2019-09-30
Applicant: 华东师范大学
Abstract: 本发明公开了一种胞内外分泌4-α-糖基转移酶(4GT)的基因工程菌(重组大肠杆菌)，属于酶基因工程和酶工程领域。所述基因工程菌通过将来源于嗜热栖热菌HB8的编码4GT的基因通过质粒pET-32a(+)导入到宿主细胞大肠杆菌中得到。本发明构建的基因工程菌株的胞外4GT酶活可达到167.47U/mL。该重组酶的最适温度为60℃，最适pH为7.0，所述4GT具有转苷活性，能使淀粉中支链淀粉的侧链长度延长，适合食品、化妆品和医药等工业应用的需要，能用于高支化淀粉的工业生产。本发明的优点在于以大肠杆菌为宿主，4GT不仅在其胞内进行了表达，而且在其胞外也能高效表达，这不仅减少了杂蛋白对4GT酶活及4GT纯化时的干扰，也可简化生产4GT的流程。
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公开(公告)号：CN118773156B
公开(公告)日：2025-05-06
申请号：CN202310310904.3
申请日：2023-03-28
Applicant: 华东师范大学 , 上海统益生物科技有限公司
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体的，涉及一种微生物来源的淀粉分支酶的突变体及其用途。本发明公开了一种淀粉分支酶(GBE)的突变体，所述淀粉分支酶突变体的氨基酸序列相对于野生型淀粉分支酶的氨基酸序列，其第155位、第280位、第282位、第408位或第536位的氨基酸残基中的一项或多项被突变成适于提高淀粉分支酶热稳定性的氨基酸；所述野生型淀粉分支酶的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：6所示的序列。本发明公开的淀粉分支酶的突变体热稳定性显著提高，有助于解决GBE在实际应用过程中在高温下不稳定而失活的问题。
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公开(公告)号：CN111434770B
公开(公告)日：2022-12-06
申请号：CN201910025466.X
申请日：2019-01-11
Applicant: 华东师范大学 , 泰兴市东圣生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种利用枯草芽孢杆菌生产蛋白质谷氨酰胺酶的方法，属于生物工程技术领域。本发明方法针对枯草芽孢杆菌进行密码子优化，得到适于在枯草芽胞杆菌表达系统表达的蛋白质谷氨酰胺酶前体物(pro‑PG)基因片段，将该基因片段与表达载体pHT43连接，构建重组载体pHT43‑pp，并将其转化入枯草芽孢杆菌中形成重组枯草芽孢杆菌，经乳糖等诱导剂诱导发酵，在自身发酵体系中，不需要添加任何外源蛋白酶的条件下，生成具有活性的成熟蛋白质谷氨酰胺酶即mPG。本发明包括以下优点：开发了利用枯草芽孢杆菌表达pro‑PG的方法；开发了利用枯草芽孢杆菌表达体系对pro‑PG进行自加工的方法，而不需要外源蛋白酶的添加，可以高效快速且定向地产生mPG，且酶活性较高，适宜工业化生产。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113512513A
公开(公告)日：2021-10-19
申请号：CN202110737301.2
申请日：2021-06-30
Applicant: 华东师范大学
Abstract: 本发明公开了一株解淀粉芽孢杆菌及其应用，属于生物技术领域。本发明提供了一株产胞外蛋白能力和淀粉能力强的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BA‑HS；将此菌株接种至发酵培养基中发酵，即可使发酵上清淀粉酶的表达量高达60U/mL；以此菌株为宿主表达编码1,4‑α‑葡聚糖分支酶的基因构建得到的重组菌接种至发酵培养基中发酵，可得发酵上清中1,4‑α‑葡聚糖分支酶的酶活最高达300U/mL。本发明方法在自然界筛选出解淀粉芽孢杆菌，根据特性分析找到淀粉酶和蛋白酶较高的菌株，针对性地探索野生解淀粉芽孢杆菌的电转条件，并对其进行优化，从而提高转化效率并成功表达异源蛋白。
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公开(公告)号：CN111434770A
公开(公告)日：2020-07-21
申请号：CN201910025466.X
申请日：2019-01-11
Applicant: 华东师范大学 , 泰兴市东圣生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种利用枯草芽孢杆菌生产蛋白质谷氨酰胺酶的方法，属于生物工程技术领域。本发明方法针对枯草芽孢杆菌进行密码子优化，得到适于在枯草芽胞杆菌表达系统表达的蛋白质谷氨酰胺酶前体物(pro-PG)基因片段，将该基因片段与表达载体pHT43连接，构建重组载体pHT43-pp，并将其转化入枯草芽孢杆菌中形成重组枯草芽孢杆菌，经乳糖等诱导剂诱导发酵，在自身发酵体系中，不需要添加任何外源蛋白酶的条件下，生成具有活性的成熟蛋白质谷氨酰胺酶即mPG。本发明包括以下优点：开发了利用枯草芽孢杆菌表达pro-PG的方法；开发了利用枯草芽孢杆菌表达体系对pro-PG进行自加工的方法，而不需要外源蛋白酶的添加，可以高效快速且定向地产生mPG，且酶活性较高，适宜工业化生产。
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公开(公告)号：CN118773156A
公开(公告)日：2024-10-15
申请号：CN202310310904.3
申请日：2023-03-28
Applicant: 华东师范大学 , 上海统益生物科技有限公司
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体的，涉及一种微生物来源的淀粉分支酶的突变体及其用途。本发明公开了一种淀粉分支酶(GBE)的突变体，所述淀粉分支酶突变体的氨基酸序列相对于野生型淀粉分支酶的氨基酸序列，其第155位、第280位、第282位、第408位或第536位的氨基酸残基中的一项或多项被突变成适于提高淀粉分支酶热稳定性的氨基酸；所述野生型淀粉分支酶的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：6所示的序列。本发明公开的淀粉分支酶的突变体热稳定性显著提高，有助于解决GBE在实际应用过程中在高温下不稳定而失活的问题。
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公开(公告)号：CN117511897A
公开(公告)日：2024-02-06
申请号：CN202210928843.2
申请日：2022-08-03
Applicant: 华东师范大学 , 上海统益生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了催化活力提高的1,4‑α‑葡聚糖分支酶突变体及其应用，所述1,4‑α‑葡聚糖分支酶突变体由来源于Aquifexaeolicus的1,4‑α‑葡聚糖分支酶的第292位和第426位二个位点突变得到。本发明1,4‑α‑葡聚糖分支酶突变体，与1,4‑α‑葡聚糖分支酶相比，比酶活和催化效率均有明显提高。其中，1,4‑α‑葡聚糖分支酶突变体的比酶活较1,4‑α‑葡聚糖分支酶提高3.4‑7.6倍；所有突变体的催化效率也提高大约2倍。将本发明中的1,4‑α‑葡聚糖分支酶突变体添加至反应体系中进行淀粉改性，与添加1,4‑α‑葡聚糖分支酶相比，添加1,4‑α‑葡聚糖分支酶突变体所获产物的冻融稳定性显著提高。采用本发明提供的高催化活力的1,4‑α‑葡聚糖分支酶突变体，能够减少生产中酶蛋白用量，对于扩大1,4‑α‑葡聚糖分支酶工业化应用具有重要意义。
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公开(公告)号：CN114686500B
公开(公告)日：2023-07-14
申请号：CN202011620279.5
申请日：2020-12-30
Applicant: 华东师范大学
Abstract: 本发明公开了一种1,4‑α‑葡聚糖分支酶(1,4‑α‑glucan branching enzyme；GBE)编码基因及工程菌株与应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明针对具有热稳定性较强的目标GBE，通过基因挖掘得到候选基因；获得的候选基因GBE(SEQ ID NO.1)来源于地衣芽孢杆菌ATCC14580，通过质粒pET32a(+)导入到宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3)中，得到工程菌，并实现GBE的胞内部分可溶性及包涵体表达。该重组酶GBE具优良的热稳定特性、酶学特性，具有分支活性，可用于淀粉改性，适合食品、化妆品和医药等工业应用的需要，具有较大的工业化生产和应用潜力及经济价值。
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