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公开(公告)号：CN110615832A
公开(公告)日：2019-12-27
申请号：CN201910921768.5
申请日：2019-09-27
Applicant: 北京理工大学
Abstract: BmoR是来源于假单胞菌中的转录因子，其信号分子包括多种高级醇，已经被应作生物传感器筛选正丁醇和异丁醇高产菌株。然而天然转录因子对异丁醇和正丁醇的相应范围只有0-40mM，这样无法筛选到真正高产的菌株，从而无法满足工业生产的需求。为了解决上述问题，本发明使用蛋白质工程改造的方法改造BmoR。通过随机突变，结构模拟和定点突变的方式，得到了一个性能优异的BmoR组合突变体F276A/E627N。通过底物正丁醇和异丁醇的浓度梯度外源添加实验，验证其对正丁醇和异丁醇的响应范围提高至0-100mM，并进一步在异丁醇高产菌株中进行了功能验证。本发明通过蛋白质工程的方法对天然转录因子进行了改造，得到性能更加优异的突变体，为转录因子应用于工业生产提供了范例。
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公开(公告)号：CN106318966B
公开(公告)日：2019-08-09
申请号：CN201610851950.4
申请日：2016-09-26
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明提供了一种利用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)工程菌生产3‑O‑葡萄糖基齐墩果酸和纤维二糖齐墩果酸的方法，属于生物工程领域。本发明通过化学法合成经密码子优化的P450细胞色素单加氧酶基因、细胞色素还原酶基因以及UDP‑葡萄糖转移酶基因，结合酿酒酵母启动子和终止子组建相应的基因表达盒，通过DNA大片段组装方法构建基因表达载体，并将表达载体导入能够生产β‑香树脂醇的酿酒酵母中。首次实现了在酿酒酵母中直接合成植物次生代谢产物3‑O‑葡萄糖基齐墩果酸和纤维二糖齐墩果酸，且合成的这两种化合物能够跨过酿酒酵母工程菌的细胞膜，简化下游分离萃取工艺，这为利用酿酒酵母生产低水溶性难跨膜的五环三萜类化合物提供了新思路。该方法工艺简单可用于发酵生产3‑O‑葡萄糖基齐墩果酸和纤维二糖齐墩果酸。
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公开(公告)号：CN106318966A
公开(公告)日：2017-01-11
申请号：CN201610851950.4
申请日：2016-09-26
Applicant: 北京理工大学
CPC classification number: C12N9/0077 , C12N9/0042 , C12N9/1051 , C12P19/56 , C12P33/00 , C12Y106/02004
Abstract: 本发明提供了一种利用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)工程菌生产3-O-葡萄糖基齐墩果酸和纤维二糖齐墩果酸的方法，属于生物工程领域。本发明通过化学法合成经密码子优化的P450细胞色素单加氧酶基因、细胞色素还原酶基因以及UDP-葡萄糖转移酶基因，结合酿酒酵母启动子和终止子组建相应的基因表达盒，通过DNA大片段组装方法构建基因表达载体，并将表达载体导入能够生产β-香树脂醇的酿酒酵母中。首次实现了在酿酒酵母中直接合成植物次生代谢产物3-O-葡萄糖基齐墩果酸和纤维二糖齐墩果酸，且合成的这两种化合物能够跨过酿酒酵母工程菌的细胞膜，简化下游分离萃取工艺，这为利用酿酒酵母生产低水溶性难跨膜的五环三萜类化合物提供了新思路。该方法工艺简单可用于发酵生产3-O-葡萄糖基齐墩果酸和纤维二糖齐墩果酸。
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