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公开(公告)号：CN114317593A
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN202111660862.3
申请日：2021-12-31
Applicant: 北京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种单分子超分辨显微技术观察植物原生质体膜蛋白动态的方法，包括步骤一，转基因材料的获得；步骤二，原生质体的提取；步骤三，结构光照明显微镜成像观察；步骤四，参数信息的计算；其中在上述步骤一中，首先通过PCR技术扩增目的基因条带，然后通过双酶切的方法与真核表达载体35S::pCAMBIA2300‑GFP进行连接，通过筛选获得转基因拟南芥植株；使用结构光照明显微镜进行成像，结构光照明显微镜具有时间分辨率高、光毒性和光漂白性小等众多优点，能够在活体状态下，实时观察细胞膜蛋白的动态变化等特征；通过结构光照明显微镜的观察，可以真实地反映植物细胞膜蛋白分子的运动状态，并可以获得膜蛋白运动参数等信息。
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公开(公告)号：CN115825020A
公开(公告)日：2023-03-21
申请号：CN202211070807.3
申请日：2022-09-01
Applicant: 北京林业大学
Abstract: 本发明提供了一种Halo‑tag标记和3D超分辨成像观察植物活细胞核蛋白的方法，属于分子标记技术和显微成像技术领域。本发明提供的观察植物活细胞核蛋白的方法，包括如下步骤：步骤一：获取Halo‑tag转基因植株；步骤二：制备和培养植物原生质体细胞；步骤三：Halo‑tag荧光染料的孵育和漂洗；步骤四：3D‑SIM超分辨成像观察；步骤五：利用软件分析图像和统计相关参数。本发明方法可以长时间的、特异性的标记植物细胞核内蛋白质，抗猝灭和漂白能力大大提高，并且标记过程非常十分简单和快速，能够实现植物细胞核内的目标分子的长时间追踪和精细定位观察。
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公开(公告)号：CN109632431A
公开(公告)日：2019-04-16
申请号：CN201910111417.8
申请日：2019-02-12
Applicant: 北京林业大学
IPC: G01N1/28
CPC classification number: G01N1/28
Abstract: 本发明公开了一种新鲜植物叶片透明的方法，该方法包括以下步骤：1)用直径为1cm的打孔器将新鲜植物叶片打成圆片状；2)将圆片状植物叶片FAA固定液固定；3)使用PBS缓冲液洗涤植物叶片3‑4次；4)使用体积/体积(V/V)百分比浓度为75％的乙醇脱水处理；5)使用体积/体积(V/V)百分比浓度为85％的乙醇溶液脱水处理；6)使用体积/体积(V/V)百分比浓度为95％的乙醇溶液脱水处理；7)使用无水乙醇溶液脱水处理12h；8)使用pH为7.2的PBS缓冲液洗涤植物叶片2次；9)将圆片状植物叶片完全浸入到透明液中，避光处理1‑2天。本发明操作简单，快速易行，效果明显，将在新鲜植物的透明化研究中发挥重要作用，具有较大的实际应用价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112662703B
公开(公告)日：2022-12-20
申请号：CN202011593169.4
申请日：2020-12-29
Applicant: 北京林业大学
Abstract: 本发明涉及生物成像技术领域，具体涉及一种利用荧光漂白恢复技术观察植物细胞核蛋白动态的方法。所述方法包括：步骤一，获得转基因植物；步骤二，共聚焦成像；步骤三，荧光漂白恢复观察；步骤四，参数信息的计算。本发明实现了FRAP技术，在植物细胞核蛋白动态研究中的首次尝试和应用，并且经过条件的摸索，得出了适合植物细胞核荧光漂白后恢复的最佳反应条件和参数。而且本发明中的方法对样品的光毒性伤害小，能够在活体状态下、实时观察细胞核蛋白的动态以及运动特征，同时具有较高的重复性。
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公开(公告)号：CN112730352A
公开(公告)日：2021-04-30
申请号：CN202011443699.0
申请日：2020-12-08
Applicant: 北京林业大学
Abstract: 本发明公开了实时观察植物细胞核蛋白的结构、面积和空间分布的方法，包括步骤一，转基因材料获得；步骤二，成像观察；步骤三，分析处理；步骤四，计算参数信息；其中在上述步骤一中，首先通过PCR技术扩增出目的基因条带，然后通过同源重组的方法将目的基因连接到真核表达载体pCM2300中；ZeissLSM880Airyscan快速超分辨激光共聚焦显微镜的Airyscan模式下成像具有超高分辨率，可以对植物细胞核内蛋白质的结构进行超高分辨率的成像观察；对细胞的光毒性伤害小，能够在活体状态下、原位观察细胞核蛋白的面积和分布等特征；成像速度快，能够真实地反映植物细胞核内蛋白分子的状态，并在单分子水平上对细胞核蛋白的面积异质性进行分析；重复性高。
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公开(公告)号：CN112662703A
公开(公告)日：2021-04-16
申请号：CN202011593169.4
申请日：2020-12-29
Applicant: 北京林业大学
Abstract: 本发明涉及生物成像技术领域，具体涉及一种利用荧光漂白恢复技术观察植物细胞核蛋白动态的方法。所述方法包括：步骤一，获得转基因植物；步骤二，共聚焦成像；步骤三，荧光漂白恢复观察；步骤四，参数信息的计算。本发明实现了FRAP技术，在植物细胞核蛋白动态研究中的首次尝试和应用，并且经过条件的摸索，得出了适合植物细胞核荧光漂白后恢复的最佳反应条件和参数。而且本发明中的方法对样品的光毒性伤害小，能够在活体状态下、实时观察细胞核蛋白的动态以及运动特征，同时具有较高的重复性。
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公开(公告)号：CN114895040A
公开(公告)日：2022-08-12
申请号：CN202210501005.7
申请日：2022-05-09
Applicant: 北京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种快速免疫荧光标记和超分辨成像结合观察核蛋白的方法。属于细胞生物学和光学成像技术领域。包括以下步骤：原生质体制备；快速免疫荧光标记；细胞样品的制片过程；SIM超分辨成像过程；数据分析。本发明通过酶解液消化植物细胞壁获得活性良好的原生质体，再对原生质体的核蛋白进行快速免疫荧光标记，最后使用SIM超高分辨成像系统来进行观察，极大地缩减了实验时长，标记总时间大约3h，同时，可以真实地观察和反映植物细胞核蛋白的结构、面积和空间分布等特征，并对植物不同定位的蛋白质的标记和成像研究提供了重要参考意义。
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