公开(公告)号：CN115825020A

公开(公告)日：2023-03-21

申请号：CN202211070807.3

申请日：2022-09-01

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 林金星 ,  钱虹萍 ,  崔亚宁 ,  张原

IPC: G01N21/64 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明提供了一种Halo‑tag标记和3D超分辨成像观察植物活细胞核蛋白的方法，属于分子标记技术和显微成像技术领域。本发明提供的观察植物活细胞核蛋白的方法，包括如下步骤：步骤一：获取Halo‑tag转基因植株；步骤二：制备和培养植物原生质体细胞；步骤三：Halo‑tag荧光染料的孵育和漂洗；步骤四：3D‑SIM超分辨成像观察；步骤五：利用软件分析图像和统计相关参数。本发明方法可以长时间的、特异性的标记植物细胞核内蛋白质，抗猝灭和漂白能力大大提高，并且标记过程非常十分简单和快速，能够实现植物细胞核内的目标分子的长时间追踪和精细定位观察。

公开(公告)号：CN111323284A

公开(公告)日：2020-06-23

申请号：CN202010036704.X

申请日：2020-01-14

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 林金星 ,  郑文清 ,  张原 ,  杜亮 ,  冯圣年

IPC: G01N1/30 ,  G01N1/34 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明涉及一种烟草叶片和原生质体的线粒体荧光标记方法，该方法包括以下步骤：步骤一、配制含有Mitotracker Red CMXRos染料的工作液；步骤二、分离烟草叶片和原生质体，将烟草叶片和原生质体在含有Mitotracker Red CMXRos染料的工作液中染色；步骤三、采用缓冲液对已染色的烟草叶片和原生质体进行清洗；步骤四、采用激光共聚焦显微镜对经过步骤三种清洗好的烟草叶片和原生质体观察拍照，其中激发波长为559nm，发射波长为600-630nm。本发明提供一种操作简单、节约时间、染色效果好的烟草叶片和原生质体的线粒体荧光标记方法。

公开(公告)号：CN115165827A

公开(公告)日：2022-10-11

申请号：CN202210747118.5

申请日：2022-06-28

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 林金星 ,  鄂一岚 ,  李瑞丽 ,  张原

IPC: G01N21/64 ,  G01N1/28 ,  G01N1/30 ,  G01N1/40

Abstract: 本发明属于生物技术领域，提供了一种利用SIM超高分辨成像技术观测细胞壁纤维素微纤丝的方法。本发明通过植物原生质体的制备及细胞壁再生培养；再生细胞壁细胞染色后，使用SIM显微镜进行成像观察，得到图像。本发明方法对细胞的光毒性伤害小，能够在活体状态下、单细胞水平上长时程观察纤维素微纤丝，真实地反映原生质体表面纤维素微纤丝的状态，实现了由原生质体再生的初生细胞壁纤维素微纤丝结构的超高分辨成像，为进一步对纤维素微纤丝定性定量研究奠定基础。

公开(公告)号：CN112322646A

公开(公告)日：2021-02-05

申请号：CN202011279881.7

申请日：2020-11-16

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 李晓娟 ,  张原 ,  鲁雨晴 ,  边佳辉 ,  姚晓敏 ,  张耿 ,  苏晓 ,  刘佩佩

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12N15/62 ,  C12N15/29 ,  C12P21/02 ,  C07K14/415 ,  C07K1/22

Abstract: 本发明公开了植物膜结合转录因子原核表达纯化的方法，包括如下步骤，步骤1：设计引物构建原核表达载体；步骤2：原核系统中蛋白的表达；步骤3：蛋白纯化。本发明在传统原核表达纯化的基础上，根据膜结合蛋白的蛋白结构与性质，优化了其纯化方法，并筛选了相应的诱导表达条件与纯化缓冲液配置方法，实现了对膜结合蛋白的原核高浓度纯化表达。