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公开(公告)号：CN105273082A
公开(公告)日：2016-01-27
申请号：CN201510607983.X
申请日：2015-09-22
Applicant: 北京林业大学
IPC: C07K16/18 , G01N33/68 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种GFP蛋白多克隆抗体的制备方法，首先用DNAstar软件对GFP蛋白进行抗原预测分析，选择亲水性强，抗原性指数高的两段区域作为抗原区，然后通过设计引物，用含有GFP核苷酸序列的pCAMBIA1300质粒做模板，进行扩增；把抗原基因片段连接到pET28a载体上，重组质粒转化入BL21中，筛选阳性克隆并PCR鉴定；选用日本大耳白兔，在注射抗原的同时，加入免疫佐剂刺激机体产生较强的免疫反应，对多克隆抗体兔进行双肩皮下两点和双后腿肌肉两点常规免疫；纯化IgG抗体。本发明所制备的抗体具有效价高，灵敏性好，可重复等优点，可以有效弥补现有GFP抗体的缺点和不足；可以有效降低抗体的非特异性。
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