公开(公告)号：CN109680044A

公开(公告)日：2019-04-26

申请号：CN201910052680.4

申请日：2019-01-21

Applicant: 北京大学

Inventor： 赵美萍 ,  陈维 ,  阳彝栋 ,  肖先金 ,  李梦圆

IPC: C12Q1/6806

CPC classification number: C12Q1/6806 ,  C12Q2531/113 ,  C12Q2521/319 ,  C12Q2521/345

Abstract: 本发明公开了一种基于选择性消除野生链背景干扰的基因突变检测方法。通过PCR对待测目标序列进行扩增，并通过Lambda核酸外切酶处理成单链DNA；设计并合成与野生型DNA序列目标区域互补的硫代DNA链以及与非目标区域互补的RNA封闭链，与单链DNA混合并升温退火后加入DNase I进行切割；DNase I在硫代DNA链的引导下选择性地切除野生型DNA链目标区域序列，突变型DNA链由于目标区域内存在错配不能被DNase I切除而得以保留，从而显著提升突变型DNA链的丰度，大幅度降低了目前已有技术检测低丰度基因突变的难度。本发明方法无需复杂昂贵的仪器，容易操作，成本低，1天之内即可给出结果，可为临床肿瘤早筛和术后复发监测提供及时、可靠的基因突变信息。

公开(公告)号：CN109680044B

公开(公告)日：2021-04-30

申请号：CN201910052680.4

申请日：2019-01-21

Applicant: 北京大学

Inventor： 赵美萍 ,  陈维 ,  阳彝栋 ,  肖先金 ,  李梦圆

IPC: C12Q1/6806

Abstract: 本发明公开了一种基于选择性消除野生链背景干扰的基因突变检测方法。通过PCR对待测目标序列进行扩增，并通过Lambda核酸外切酶处理成单链DNA；设计并合成与野生型DNA序列目标区域互补的硫代DNA链以及与非目标区域互补的RNA封闭链，与单链DNA混合并升温退火后加入DNase I进行切割；DNase I在硫代DNA链的引导下选择性地切除野生型DNA链目标区域序列，突变型DNA链由于目标区域内存在错配不能被DNase I切除而得以保留，从而显著提升突变型DNA链的丰度，大幅度降低了目前已有技术检测低丰度基因突变的难度。本发明方法无需复杂昂贵的仪器，容易操作，成本低，1天之内即可给出结果，可为临床肿瘤早筛和术后复发监测提供及时、可靠的基因突变信息。