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公开(公告)号：CN107118269A
公开(公告)日：2017-09-01
申请号：CN201710414629.4
申请日：2017-06-05
Applicant: 北京交通大学
Abstract: 本发明公开了一种重组人IL‑24蛋白(rhIL‑24)的PEG修饰方法,包括：a.构建人IL‑24的重组原核表达载体，诱导表达，得到包涵体；b.选择变性剂对所述包涵体进行变性，得到变性后的蛋白；c.确定复性条件，对所述变性后的蛋白进行复性，得到复性后的蛋白；d.在对所述复性后的蛋白添加SDS的条件下，进行凝胶过滤纯化，得到纯化后的目的蛋白；e.对所述纯化后的目的蛋白用PEG修饰剂进行定点修饰，得到终产品。该方法在制备高纯度重组人IL‑24蛋白的基础上，利用聚乙二醇进行定点修饰，在修饰蛋白的周围产生空间屏障，减少蛋白的酶解，延长了半衰期，且不影响其体外抑瘤活性，利用率增加，提高了稳定性和生物学活性。
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公开(公告)号：CN107118269B
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN201710414629.4
申请日：2017-06-05
Applicant: 北京交通大学
Abstract: 本发明公开了一种重组人IL‑24蛋白(rhIL‑24)的PEG修饰方法,包括：a.构建人IL‑24的重组原核表达载体，诱导表达，得到包涵体；b.选择变性剂对所述包涵体进行变性，得到变性后的蛋白；c.确定复性条件，对所述变性后的蛋白进行复性，得到复性后的蛋白；d.在对所述复性后的蛋白添加SDS的条件下，进行凝胶过滤纯化，得到纯化后的目的蛋白；e.对所述纯化后的目的蛋白用PEG修饰剂进行定点修饰，得到终产品。该方法在制备高纯度重组人IL‑24蛋白的基础上，利用聚乙二醇进行定点修饰，在修饰蛋白的周围产生空间屏障，减少蛋白的酶解，延长了半衰期，且不影响其体外抑瘤活性，利用率增加，提高了稳定性和生物学活性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103710311A
公开(公告)日：2014-04-09
申请号：CN201310741314.2
申请日：2013-12-27
Applicant: 中国人民解放军军事医学科学院附属医院 , 北京交通大学
Abstract: 本发明公开了属于基因工程技术领域的一种稳定分泌表达IL-24重组蛋白的细胞株及其构建和应用。本发明的细胞株构建方法为：首先将IL-24基因的CDS区序列亚克隆至Flp-In定点整合系统的pcDNA5/FRT质粒中，然后和质粒pOG44共转染至Flp-In-CHO细胞中，通过抗生素Hygromycin B筛选稳定表达的细胞株。然后，利用亲和层析对细胞株培养上清中的重组蛋白进行纯化；最后，通过体内外活性实验证明此重组蛋白具有抑制食管癌细胞和黑色素瘤细胞增殖的作用，并诱导其凋亡，可以开发出有效的治疗肿瘤的新药。
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公开(公告)号：CN113337473A
公开(公告)日：2021-09-03
申请号：CN202110411663.2
申请日：2021-04-16
Applicant: 北京交通大学
IPC: C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种工程细胞株FCHO/IL‑24的无血清悬浮培养驯化方法，包括以下步骤：(1)通过梯度降低血清浓度，驯化工程细胞株FCHO/IL‑24能够在0.5％血清贴壁条件下培养；(2)将步骤(1)得到的工程细胞株FCHO/IL‑24直接从0.5％血清贴壁培养驯化为0.5％血清悬浮培养；(3)将步骤(2)得到的工程细胞株FCHO/IL‑24在无血清培养基中悬浮培养。本申请通过梯度降低血清浓度，先驯化工程细胞株FCHO/IL‑24能够在0.5％血清贴壁条件上培养，再进行悬浮培养，最后使其能够在无血清培养基中悬浮培养，不仅能保持较高的细胞密度，同时还能稳定分泌表达rhIL‑24，为后续的悬浮培养条件和无血清培养基成份的优化奠定了基础。
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公开(公告)号：CN111233996A
公开(公告)日：2020-06-05
申请号：CN202010064919.2
申请日：2020-01-20
Applicant: 北京交通大学
Abstract: 本发明提供了一种将丁酸钠用于促进工程细胞株分泌表达rhIL-24的方法，属于基因表达技术领域，在对分泌表达rhIL-24的定点整合工程细胞株FCHO/IL-24进行10％血清贴壁、0.5％血清贴壁和0.5％血清悬浮培养的基础上，用不同终浓度(0、0.125、0.25、0.5、1和2mmol/L)丁酸钠处理细胞株。本发明中，NaBu可以提高CHO细胞分泌表达外源蛋白的水平，促进工程细胞分泌表达rhIL-24的水平，促使工程细胞发生G0/G1期阻滞，并可改变贴壁培养条件下细胞的代谢活力；将NaBu作为细胞株无血清培养基的添加剂，在高密度的悬浮培养中，提高了细胞株分泌表达rhIL-24的水平，不仅为FCHO/IL-24细胞的大规模培养提供实验数据，同时也可为用哺乳动物细胞表达其他基因工程蛋白提供借鉴。
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公开(公告)号：CN102603887B
公开(公告)日：2013-08-21
申请号：CN201210102549.2
申请日：2012-04-09
Applicant: 北京交通大学
Abstract: 本发明公开了属于肿瘤生物治疗技术领域的一种具有抗瘤活性的IL-24多肽及其应用。该多肽的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。本发明利用分子模建的方法设计多肽并人工合成，通过体外增殖实验表明此多肽能有效抑制黑色素瘤和食管癌增殖，为开发出有效的治疗肿瘤的新药奠定了基础。
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公开(公告)号：CN102603887A
公开(公告)日：2012-07-25
申请号：CN201210102549.2
申请日：2012-04-09
Applicant: 北京交通大学
Abstract: 本发明公开了属于肿瘤生物治疗技术领域的一种具有抗瘤活性的IL-24多肽及其应用。该多肽的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。本发明利用分子模建的方法设计多肽并人工合成，通过体外增殖实验表明此多肽能有效抑制黑色素瘤和食管癌增殖，为开发出有效的治疗肿瘤的新药奠定了基础。
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