公开(公告)号：CN107118269A

公开(公告)日：2017-09-01

申请号：CN201710414629.4

申请日：2017-06-05

Applicant: 北京交通大学

Inventor： 江红 ,  马群风 ,  郑晓飞 ,  张耀 ,  王俊峰 ,  张驰 ,  史亦南 ,  葛建林 ,  化计磊

IPC: C07K14/54 ,  C07K1/107 ,  A61K38/20 ,  A61K47/60 ,  A61P35/00

Abstract: 本发明公开了一种重组人IL‑24蛋白(rhIL‑24)的PEG修饰方法,包括：a.构建人IL‑24的重组原核表达载体，诱导表达，得到包涵体；b.选择变性剂对所述包涵体进行变性，得到变性后的蛋白；c.确定复性条件，对所述变性后的蛋白进行复性，得到复性后的蛋白；d.在对所述复性后的蛋白添加SDS的条件下，进行凝胶过滤纯化，得到纯化后的目的蛋白；e.对所述纯化后的目的蛋白用PEG修饰剂进行定点修饰，得到终产品。该方法在制备高纯度重组人IL‑24蛋白的基础上，利用聚乙二醇进行定点修饰，在修饰蛋白的周围产生空间屏障，减少蛋白的酶解，延长了半衰期，且不影响其体外抑瘤活性，利用率增加，提高了稳定性和生物学活性。

公开(公告)号：CN107118269B

公开(公告)日：2020-12-01

申请号：CN201710414629.4

申请日：2017-06-05

Applicant: 北京交通大学

Inventor： 江红 ,  马群风 ,  郑晓飞 ,  张耀 ,  王俊峰 ,  张驰 ,  史亦南 ,  葛建林 ,  化计磊

IPC: C07K14/54 ,  C07K1/107 ,  A61K38/20 ,  A61K47/60 ,  A61P35/00

Abstract: 本发明公开了一种重组人IL‑24蛋白(rhIL‑24)的PEG修饰方法,包括：a.构建人IL‑24的重组原核表达载体，诱导表达，得到包涵体；b.选择变性剂对所述包涵体进行变性，得到变性后的蛋白；c.确定复性条件，对所述变性后的蛋白进行复性，得到复性后的蛋白；d.在对所述复性后的蛋白添加SDS的条件下，进行凝胶过滤纯化，得到纯化后的目的蛋白；e.对所述纯化后的目的蛋白用PEG修饰剂进行定点修饰，得到终产品。该方法在制备高纯度重组人IL‑24蛋白的基础上，利用聚乙二醇进行定点修饰，在修饰蛋白的周围产生空间屏障，减少蛋白的酶解，延长了半衰期，且不影响其体外抑瘤活性，利用率增加，提高了稳定性和生物学活性。

公开(公告)号：CN103710311A

公开(公告)日：2014-04-09

申请号：CN201310741314.2

申请日：2013-12-27

Applicant: 中国人民解放军军事医学科学院附属医院 ,  北京交通大学

Inventor： 马群风 ,  江红 ,  郑晓飞 ,  金邦明 ,  张耀 ,  史亦南 ,  曹宇 ,  宋何煜 ,  张驰 ,  邓学峰 ,  王字玲

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/63 ,  A61K35/54 ,  A61K38/20 ,  A61P35/00 ,  C07K14/54

Abstract: 本发明公开了属于基因工程技术领域的一种稳定分泌表达IL-24重组蛋白的细胞株及其构建和应用。本发明的细胞株构建方法为：首先将IL-24基因的CDS区序列亚克隆至Flp-In定点整合系统的pcDNA5/FRT质粒中，然后和质粒pOG44共转染至Flp-In-CHO细胞中，通过抗生素Hygromycin B筛选稳定表达的细胞株。然后，利用亲和层析对细胞株培养上清中的重组蛋白进行纯化；最后，通过体内外活性实验证明此重组蛋白具有抑制食管癌细胞和黑色素瘤细胞增殖的作用，并诱导其凋亡，可以开发出有效的治疗肿瘤的新药。