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公开(公告)号：CN113125599B
公开(公告)日：2021-12-14
申请号：CN202110390063.2
申请日：2021-04-12
Applicant: 中国计量科学研究院
Abstract: 本发明公开了一种基于肽段同位素稀释质谱法的IgG抗体定值方法，包括如下步骤：特征肽段选择：根据人源IgG抗体恒定区的氨基酸序列，确定ALPAPIEK，GPSVFPLAPSSK，DSTYSLSSTLTLSK三条人源IgG恒定区肽段为定值的特征肽段；特征肽段纯度的准确测定；特征肽段质谱参数的优化：包括特征肽段质谱分析离子对的确定，定量离子对的各质谱参数的优化；特征肽段线性范围的确定；人源IgG抗体蛋白样本分析前处理，主要步骤有：酶切条件优化、人源IgG抗体蛋白酶切、浓缩样品；样品酶切溶液质谱分析后，根据公式计算人源IgG抗体蛋白样品中特征肽段含量，根据人源IgG抗体蛋白和特征肽段的分子量计算溶液中人源IgG抗体蛋白的浓度作为标准物质的定值结果。
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公开(公告)号：CN112961237B
公开(公告)日：2022-03-22
申请号：CN202110259295.4
申请日：2021-03-10
Applicant: 中国计量科学研究院
IPC: C07K16/10 , C07K1/36 , C07K1/34 , C07K1/22 , C07K1/20 , C07K1/18 , C07K1/16 , G01N27/62 , G01N33/96
Abstract: 本发明公开了一种人源化IgM单克隆抗体标准物质及制备方法，该方法包括如下步骤：针对病毒抗原进行噬菌体抗体库筛选，获得达到亲和力阈值需求的IgG原型抗体；原型IgG抗体亲和力成熟后，将优化后的抗体重链可变区嫁接到人源IgM抗体的恒定区上组成嵌合体重链，Kappa轻链可不变。表达、纯化以获得人源化IgM单克隆抗体标准物质原料；对人源化IgM单克隆抗体标准物质原料进行纯度表征，蛋白质活性表征和结构表征；在纯度充分表征和结构确证与目标抗体序列一致的基础上，经均匀性、稳定性检验，采用基于氨基酸分析的同位素稀释质谱法对人源化IgM单克隆抗体标准物质进行定值。
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公开(公告)号：CN113125599A
公开(公告)日：2021-07-16
申请号：CN202110390063.2
申请日：2021-04-12
Applicant: 中国计量科学研究院
Abstract: 本发明公开了一种基于肽段同位素稀释质谱法的IgG抗体定值方法，包括如下步骤：特征肽段选择：根据人源IgG抗体恒定区的氨基酸序列，确定ALPAPIEK，GPSVFPLAPSSK，DSTYSLSSTLTLSK三条人源IgG恒定区肽段为定值的特征肽段；特征肽段纯度的准确测定；特征肽段质谱参数的优化：包括特征肽段质谱分析离子对的确定，定量离子对的各质谱参数的优化；特征肽段线性范围的确定；人源IgG抗体蛋白样本分析前处理，主要步骤有：酶切条件优化、人源IgG抗体蛋白酶切、浓缩样品；样品酶切溶液质谱分析后，根据公式计算人源IgG抗体蛋白样品中特征肽段含量，根据人源IgG抗体蛋白和特征肽段的分子量计算溶液中人源IgG抗体蛋白的浓度作为标准物质的定值结果。
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公开(公告)号：CN112961237A
公开(公告)日：2021-06-15
申请号：CN202110259295.4
申请日：2021-03-10
Applicant: 中国计量科学研究院
IPC: C07K16/10 , C07K1/36 , C07K1/34 , C07K1/22 , C07K1/20 , C07K1/18 , C07K1/16 , G01N27/62 , G01N33/96
Abstract: 本发明公开了一种人源化IgM单克隆抗体标准物质及制备方法，该方法包括如下步骤：针对病毒抗原进行噬菌体抗体库筛选，获得达到亲和力阈值需求的IgG原型抗体；原型IgG抗体亲和力成熟后，将优化后的抗体重链可变区嫁接到人源IgM抗体的恒定区上组成嵌合体重链，Kappa轻链可不变。表达、纯化以获得人源化IgM单克隆抗体标准物质原料；对人源化IgM单克隆抗体标准物质原料进行纯度表征，蛋白质活性表征和结构表征；在纯度充分表征和结构确证与目标抗体序列一致的基础上，经均匀性、稳定性检验，采用基于氨基酸分析的同位素稀释质谱法对人源化IgM单克隆抗体标准物质进行定值。
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