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公开(公告)号：CN117264986A
公开(公告)日：2023-12-22
申请号：CN202310894143.0
申请日：2023-07-20
Applicant: 安徽医科大学 , 中国医学科学院药用植物研究所
Abstract: 本发明公开了类胡萝卜素裂解双加氧酶基因可溶性表达体系的构建方法。具体步骤如下：将类胡萝卜素裂解双加氧酶基因克隆到pET28a‑MBP·Tag载体中，形成重组表达载体，转化到大肠杆菌菌株中，筛选后，0.1～2.0mM IPTG，16℃诱导20～30h；4～10℃，8000～12000rpm，离心5～10min，从菌体中分离可溶性蛋白。本发明通过构建不同类型的原核表达载体，结合不同诱导温度及诱导剂浓度等探索最优表达体系；探索出一种适用于难溶性CCD基因的可溶性表达技术体系，为CCD基因功能验证及CCD蛋白三维结构解析奠定基础。
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公开(公告)号：CN113088498B
公开(公告)日：2022-08-02
申请号：CN202010017042.1
申请日：2020-01-08
Applicant: 中国医学科学院药用植物研究所
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，涉及与挥发性成分形成密切相关的类胡萝卜素裂解双加氧酶LjCCD1b及其编码基因与功能。本发明公开了类胡萝卜素裂解双加氧酶LjCCD1b基因的开放阅读框序列以及其编码的氨基酸序列。基于金银花基因组和转录组数据，本发明筛选获得LjCCD1b基因，通过构建pET32a‑LjCCD1b原核表达载体，以β‑胡萝卜素、10′‑Apo‑β‑胡萝卜素醛和叶黄素为底物，体外鉴定LjCCD1b的催化功能。结果显示，LjCCD1b能够裂解β‑胡萝卜素和10′‑Apo‑β‑胡萝卜素醛生成β‑紫罗兰酮；催化叶黄素生成3‑羟基‑β‑紫罗兰酮和3‑羟基‑α‑紫罗兰酮。本发明揭示金银花中挥发性成分形成的内在分子机制，为金银花的香气成分调控及分子育种研究奠定基础。
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公开(公告)号：CN112239764A
公开(公告)日：2021-01-19
申请号：CN201910639359.6
申请日：2019-07-16
Applicant: 中国医学科学院药用植物研究所
Abstract: 本发明涉及了与金银花花色密切相关的类胡萝卜素裂解双加氧酶LjCCD4及其编码基因与功能。本发明属于基因工程技术领域。本发明公开了金银花类胡萝卜素裂解双加氧酶LjCCD4基因的开放阅读框序列以及其编码的氨基酸序列。本发明基于金银花基因组和转录组数据筛选获得LjCCD4基因，通过构建pET32a‑LjCCD4原核表达载体，以β‑胡萝卜素和叶黄素为底物在体外鉴定LjCCD4的催化机制。LjCCD4能够催化β‑胡萝卜素和叶黄素分别生成10’‑Apo‑β‑胡萝卜素醛、β‑紫罗兰酮和3‑羟基‑10’‑Apo‑β‑胡萝卜素醛、3‑OH‑10’‑Apo‑α‑胡萝卜素醛、3‑羟基‑β‑紫罗兰酮、3‑羟基‑α‑紫罗兰酮。本发明揭示金银花中类胡萝卜素类色素降解及其花色变化的内在分子机制，为金银花的花期调控及分子育种等奠定基础。
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公开(公告)号：CN117925490B
公开(公告)日：2025-04-11
申请号：CN202410059069.5
申请日：2024-01-16
Applicant: 安徽医科大学 , 中国医学科学院药用植物研究所
Abstract: 本发明公开了一种产五种类型西红花苷的大肠杆菌工程菌及其应用。属于细胞工程技术领域。工程菌的保藏编号为CGMCC：NO.29364，并提供了相关基因、应用。本发明能够实现葡萄糖至五种类型西红花苷的生物合成，其中包括从植物中难以提取或植物含量很低的西红花苷III，西红花苷IV和西红花苷V，将为五种类型西红花苷的获取提供支撑，推动五种西红花苷的新药研发进展。
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公开(公告)号：CN113088498A
公开(公告)日：2021-07-09
申请号：CN202010017042.1
申请日：2020-01-08
Applicant: 中国医学科学院药用植物研究所
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，涉及与挥发性成分形成密切相关的类胡萝卜素裂解双加氧酶LjCCD1b及其编码基因与功能。本发明公开了类胡萝卜素裂解双加氧酶LjCCD1b基因的开放阅读框序列以及其编码的氨基酸序列。基于金银花基因组和转录组数据，本发明筛选获得LjCCD1b基因，通过构建pET32a‑LjCCD1b原核表达载体，以β‑胡萝卜素、10′‑Apo‑β‑胡萝卜素醛和叶黄素为底物，体外鉴定LjCCD1b的催化功能。结果显示，LjCCD1b能够裂解β‑胡萝卜素和10′‑Apo‑β‑胡萝卜素醛生成β‑紫罗兰酮；催化叶黄素生成3‑羟基‑β‑紫罗兰酮和3‑羟基‑α‑紫罗兰酮。本发明揭示金银花中挥发性成分形成的内在分子机制，为金银花的香气成分调控及分子育种研究奠定基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112239764B
公开(公告)日：2022-07-29
申请号：CN201910639359.6
申请日：2019-07-16
Applicant: 中国医学科学院药用植物研究所
Abstract: 本发明涉及了与金银花花色密切相关的类胡萝卜素裂解双加氧酶LjCCD4及其编码基因与功能。本发明属于基因工程技术领域。本发明公开了金银花类胡萝卜素裂解双加氧酶LjCCD4基因的开放阅读框序列以及其编码的氨基酸序列。本发明基于金银花基因组和转录组数据筛选获得LjCCD4基因，通过构建pET32a‑LjCCD4原核表达载体，以β‑胡萝卜素和叶黄素为底物在体外鉴定LjCCD4的催化机制。LjCCD4能够催化β‑胡萝卜素和叶黄素分别生成10’‑Apo‑β‑胡萝卜素醛、β‑紫罗兰酮和3‑羟基‑10’‑Apo‑β‑胡萝卜素醛、3‑OH‑10’‑Apo‑α‑胡萝卜素醛、3‑羟基‑β‑紫罗兰酮、3‑羟基‑α‑紫罗兰酮。本发明揭示金银花中类胡萝卜素类色素降解及其花色变化的内在分子机制，为金银花的花期调控及分子育种等奠定基础。
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公开(公告)号：CN110791512A
公开(公告)日：2020-02-14
申请号：CN201810867889.1
申请日：2018-08-02
Applicant: 中国医学科学院药用植物研究所
IPC: C12N15/54 , C12N9/10 , C12Q1/48 , C12Q1/6895
Abstract: 本发明涉及了栀子中催化西红花酸生成西红花苷的两个糖基转移酶UGTs(GjUGT94E13和GjUGT74F8)、及其二者的编码基因与功能。属于基因工程技术领域。本发明公开了栀子糖基转移酶GjUGT94E13和GjUGT74F8基因的开放阅读框序列以及其编码的氨基酸序列。本发明基于栀子基因组和转录组数据筛选获得GjUGT94E13和GjUGT74F8基因，通过构建pET32a-UGTs原核表达载体，以西红花酸为底物在体外验证GjUGT94E13和GjUGT74F8的糖基化功能。结果证明GjUGT94E13和GjUGT74F8具有催化西红花酸生成西红花苷的功能，为具有重要药用价值的西红花苷的合成生物学研究奠定基础。
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公开(公告)号：CN110791510A
公开(公告)日：2020-02-14
申请号：CN201810867888.7
申请日：2018-08-02
Applicant: 中国医学科学院药用植物研究所
Abstract: 本发明涉及了参与栀子西红花苷生物合成途径中西红花酸合成的乙醛脱氢酶GjALDH2C3、其编码基因及其功能。属于基因工程技术领域。本发明公开了栀子乙醛脱氢酶GjALDH2C3基因的开放阅读框序列以及其编码的氨基酸序列。本发明基于栀子基因组、转录组数据筛选获得GjALDH2C3基因，通过构建pCold-GjALDH2C3原核表达载体并诱导表达，以西红花酸二醛为底物验证GjALDH2C3蛋白的催化功能。结果证明GjALDH2C3能够高效地催化西红花酸二醛产生西红花酸，为药用活性成分西红花酸及西红花苷的生物合成途径以及合成生物学研究奠定基础。
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公开(公告)号：CN117925490A
公开(公告)日：2024-04-26
申请号：CN202410059069.5
申请日：2024-01-16
Applicant: 安徽医科大学 , 中国医学科学院药用植物研究所
Abstract: 本发明公开了一种产五种类型西红花苷的大肠杆菌工程菌及其应用。属于细胞工程技术领域。工程菌的保藏编号为CGMCC：NO.29364，并提供了相关基因、应用。本发明能够实现葡萄糖至五种类型西红花苷的生物合成，其中包括从植物中难以提取或植物含量很低的西红花苷III，西红花苷IV和西红花苷V，将为五种类型西红花苷的获取提供支撑，推动五种西红花苷的新药研发进展。
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公开(公告)号：CN110791512B
公开(公告)日：2022-05-17
申请号：CN201810867889.1
申请日：2018-08-02
Applicant: 中国医学科学院药用植物研究所
IPC: C12N15/54 , C12N9/10 , C12Q1/48 , C12Q1/6895
Abstract: 本发明涉及了栀子中催化西红花酸生成西红花苷的两个糖基转移酶UGTs(GjUGT94E13和GjUGT74F8)、及其二者的编码基因与功能。属于基因工程技术领域。本发明公开了栀子糖基转移酶GjUGT94E13和GjUGT74F8基因的开放阅读框序列以及其编码的氨基酸序列。本发明基于栀子基因组和转录组数据筛选获得GjUGT94E13和GjUGT74F8基因，通过构建pET32a‑UGTs原核表达载体，以西红花酸为底物在体外验证GjUGT94E13和GjUGT74F8的糖基化功能。结果证明GjUGT94E13和GjUGT74F8具有催化西红花酸生成西红花苷的功能，为具有重要药用价值的西红花苷的合成生物学研究奠定基础。
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