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公开(公告)号：CN118416207B
公开(公告)日：2025-02-11
申请号：CN202410875784.6
申请日：2024-07-02
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种副结核病亚单位疫苗及其制备方法和应用。所述的疫苗中含有89AP重组抗原，所述的89AP重组抗原是将副结核分枝杆菌（Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis，MAP）的map3527、map1609c和p22基因融合表达后得到的。研究发现，重组抗原89AP不仅能诱导小鼠产生强烈的细胞免疫和体液免疫反应，对MAP感染能够提供良好的保护作用，而且不会干扰结核和副结核的检疫，表明89AP是副结核病理想的亚单位候选疫苗，为副结核病新型疫苗研发提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN113621717A
公开(公告)日：2021-11-09
申请号：CN202110863649.6
申请日：2021-07-29
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/04 , C12R1/46
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas12a的猪链球菌快速可视化RPA检测试剂盒及其应用。所述试剂盒中包含一对用于扩增猪链球菌cps2j基因的特异性引物对、gRNA和荧光报告探针，其中，所述的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:6和7或SEQ ID NO:8和9所示，与所述的gRNA互补的DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:2或3所示。本发明根据猪链球菌的特异性基因Cps2j设计特异性重组酶聚合酶扩增(RPA)引物及CRISPR/Cas12a系统探针，实现了RPA特异性靶基因扩增，以及CRISPR/Cas12a系统对报告基因的切割，建立了猪链球菌的快速可视化检测方法。该方法快速，可视，且特异性好，敏感度高，特别适用于资源贫乏地区猪链球菌的检测。
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公开(公告)号：CN108410785B
公开(公告)日：2021-11-02
申请号：CN201810139232.3
申请日：2018-02-09
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术开发公司
Abstract: 本发明涉及一种制备细菌菌影以及基因工程亚单位疫苗的方法，包括将INP信号序列和外源基因以及裂解盒基因E‑lysis克隆到同一个表达载体，转化细菌，其中INP的信号序列为SEQ ID NO：1表示的序列，裂解盒基因E‑lysis的序列为SEQ ID NO：2表示的序列，以及表达外源基因的重组细菌菌影在制备疫苗中的应用。
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公开(公告)号：CN113528682A
公开(公告)日：2021-10-22
申请号：CN202110731289.4
申请日：2021-06-29
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6851 , C12Q1/06 , C12N15/11 , C12R1/32
Abstract: 本发明公开了一种同时检测三种分枝杆菌的多重TaqMan荧光定量PCR试剂盒及其应用。所述的三种分枝杆菌包括结核分枝杆菌复合群(MTBC)、禽分枝杆菌副结核亚种(MAP)和禽分枝杆菌禽亚种(MAA)。所述的试剂盒中含有分别用于检测MTBC、MAP和MAA的引物以及探针。进一步的，本发明还建立了使用上述试剂盒检测三种分枝杆菌的多重TaqMan荧光定量PCR方法，实验证明，本发明建立的多重TaqMan荧光定量方法与常规PCR的阳性符合率为100.0％(175/175)、阴性符合率为87.0％(220/253)，与分枝杆菌培养的阳性符合率为100.0％(116/116)、阴性符合率为69.6％(220/316)。因此，本发明所建立的多重TaqMan荧光定量方法可用于MTBC、MAP和MAA的定性和定量检测，为有效防控牛结核病和副结核病提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN113462712A
公开(公告)日：2021-10-01
申请号：CN202110796924.7
申请日：2021-07-14
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种温控自剪切单质粒同源重组系统及其在基因编辑中的应用。所述的系统包括用于进行基因编辑的单质粒pKID220，所述的pKID220质粒中含有温控元件、Red重组酶基因、I‑SceI核酸内切酶基因和含有筛选标记的打靶片段区，其中，所述的筛选标记的两侧均带有I‑SceI识别位点和FRT位点。实验证明，本发明的同源重组系统的重组效率优于传统λ‑Red系统的双质粒和阿拉伯糖诱导方法，无需任何化学诱导剂，仅通过改变培养温度，即可实现染色体的高效编辑。而且避免了多次电穿孔过程，极大降低了操作复杂度并节省了时间和成本。本发明的提出为基因编辑提供了一种更加快速、简便、经济的技术手段。
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公开(公告)号：CN110240657A
公开(公告)日：2019-09-17
申请号：CN201910485285.5
申请日：2019-06-05
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/70 , A61K39/102 , A61P31/04
Abstract: 本发明涉及具有免疫保护性的副猪嗜血杆菌融合蛋白AfuA-OppA2以及以其作为有效成分的疫苗。经实验表明，融合蛋白AfuA-OppA2免疫组的保护率为80％，纯化蛋白AfuA和OppA2混合免疫组的保护率为70％。通过融合蛋白的形式，不仅有利于减少生产时的工艺复杂度和降低成本，并且免疫效果更好，可以单独作为疫苗或与其他蛋白一起作为联合疫苗。
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公开(公告)号：CN113528682B
公开(公告)日：2023-03-24
申请号：CN202110731289.4
申请日：2021-06-29
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6851 , C12Q1/06 , C12N15/11 , C12R1/32
Abstract: 本发明公开了一种同时检测三种分枝杆菌的多重TaqMan荧光定量PCR试剂盒及其应用。所述的三种分枝杆菌包括结核分枝杆菌复合群(MTBC)、禽分枝杆菌副结核亚种(MAP)和禽分枝杆菌禽亚种(MAA)。所述的试剂盒中含有分别用于检测MTBC、MAP和MAA的引物以及探针。进一步的，本发明还建立了使用上述试剂盒检测三种分枝杆菌的多重TaqMan荧光定量PCR方法，实验证明，本发明建立的多重TaqMan荧光定量方法与常规PCR的阳性符合率为100.0％(175/175)、阴性符合率为87.0％(220/253)，与分枝杆菌培养的阳性符合率为100.0％(116/116)、阴性符合率为69.6％(220/316)。因此，本发明所建立的多重TaqMan荧光定量方法可用于MTBC、MAP和MAA的定性和定量检测，为有效防控牛结核病和副结核病提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN109303916B
公开(公告)日：2021-11-30
申请号：CN201811178131.3
申请日：2018-10-10
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: A61K38/17 , A61K39/112 , A61P31/04 , C12N15/74 , C12N15/12
Abstract: 本发明公开了焦亡相关蛋白GSDMD在制备菌蜕疫苗中的应用。本发明构建了含有焦亡相关蛋白GSDMD编码基因的溶菌质粒，将其转入肠炎沙门氏菌中，在阿拉伯糖诱导下使细菌裂解，成功获得了沙门氏菌新型菌蜕疫苗。实验证明，GSDMD介导的溶菌具有极长的持续期，裂解率达到99.9985％以上。采用本发明制备得到的新型菌蜕免疫小鼠后，可以刺激机体产生强烈的体液免疫和细胞免疫，诱导了保护性免疫应答并且能够保护实验动物抵抗沙门氏菌感染，说明本发明制备得到的沙门氏菌菌蜕疫苗具有良好的免疫保护效果。
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公开(公告)号：CN111087460A
公开(公告)日：2020-05-01
申请号：CN202010037156.2
申请日：2020-01-14
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种广谱型抗菌肽及其应用，属于医药技术领域。所述的抗菌肽，命名为26M，其含有18个氨基酸残基，分子量2475.16道尔顿，等电点12.03，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示。实验证明，该抗菌肽具有显著抑制多种病原菌生长和繁殖的作用，所述的病原菌包括大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、猪链球菌、金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐万古霉素屎肠球菌。本发明提供的一种新型的具有广谱抗菌作用的抗菌肽，能够替代传统抗生素，且不易产生耐药性，在对抗病原菌引起的感染性疾病中将具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN115161333B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202210724417.7
申请日：2022-06-23
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种猪链球菌的反向筛选标记、含有该反向筛选标记的猪链球菌及其应用。所述的反向筛选标记为突变后的编码猪链球菌苯丙氨酸tRNA合成酶α亚基的pheS基因，突变后的pheS基因导致了编码的猪链球菌苯丙氨酸tRNA合成酶α亚基发生了T261S和A315G双取代突变，PheS突变体通过与菌株自身的野生PheS蛋白竞争，翻译过程中将p‑Cl‑Phe错误地掺入到合成的蛋白质中，从而在p‑Cl‑Phe存在条件下，表达PheS突变体的菌株死亡，不表达PheS突变体的菌株生存。利用这一高效反向筛选标记，本发明还建立了高效的猪链球菌无痕基因操作方法，用于实现猪链球菌的无痕基因缺失、基因融合和基因突变等无痕基因操作，在研究猪链球菌生理和病理机制、制备疫苗株方面具有很好的应用前景。
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