公开(公告)号：CN118703423A

公开(公告)日：2024-09-27

申请号：CN202410961165.9

申请日：2024-07-17

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)

Inventor： 吴锦艳 ,  何继军 ,  侯俊玲 ,  申超超 ,  兰喜 ,  刘永杰 ,  马维民 ,  党文 ,  田宏 ,  郑海学

IPC: C12N5/071 ,  C12N5/0786 ,  C12N7/00 ,  C12N7/02 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种高效分离非洲猪瘟病毒的PAMs/WSh细胞及其分离方法与应用，本发明在常规分离PAMs细胞并重悬后，依次用不同孔径细胞筛过滤除杂、用不含RNA酶的无核酸酶水在20 s内重悬，然后加入含90%胎牛血清+10%的DMSO的细胞冻存液冻存；复苏细胞时先用含两性双抗和庆大双抗RPMI‑1640培养基混悬细胞，过滤离心后用含两性双抗和庆大双抗、12%胎牛血清的1640培养基重悬后培养6‑8 h，接毒，收毒时间为4‑5 d。通过排除红细胞干扰、去除可能存在的细胞团或碎片、筛选目标细胞大小的单细胞悬液，提高了细胞活力，提升了病毒分离率和拷贝数，同时也克服了细胞冻存周期短的问题，获得的PAMs/WSh细胞为非洲猪瘟病毒的高效分离及病毒感染致病机制研究提供了有利工具。

公开(公告)号：CN118064375A

公开(公告)日：2024-05-24

申请号：CN202410056940.6

申请日：2024-01-15

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)

Inventor： 尚佑军 ,  杜国玉 ,  吴锦艳 ,  田宏 ,  张成 ,  聂帅帅 ,  曹小安 ,  冯倩 ,  何继军

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/08 ,  C07K14/065 ,  C07K1/22 ,  C12N15/39 ,  C12N15/70 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  G01N33/543 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种抗羊口疮病毒(ORFV)B2L蛋白抗体阻断ELISA检测试剂盒及其应用。所述的试剂盒包括HRP标记的抗羊口疮病毒B2L蛋白的单克隆抗体，所述的抗羊口疮病毒B2L蛋白的单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO：C2023353的杂交瘤细胞株分泌产生。本发明所述的抗羊口疮病毒B2L蛋白的单克隆抗体具有效价高、性质稳定、纯度高、特异性强等特点，能够用于建立ORFV抗体阻断ELISA试剂盒，进而用于建立ORFV的免疫学检测方法，具有良好的应用前景。且本发明使用HRP直接标记单抗可减少因酶标二抗间接反应带来的非特异性反应。本发明的试剂盒能够用于大批量样本的检测，成本低、简单快速且灵敏。本发明的提出为羊口疮的防控提供了有效技术手段。