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公开(公告)号：CN104531705A
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201410751563.4
申请日：2014-12-09
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/66 , C12N15/89 , A01K67/027
Abstract: 本发明提供了一种利用CRISPR-Cas9系统敲除动物myostatin基因的方法。本发明首先获得针对myostatin第二外显子的sgRNA识别区的DNA序列，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示；接着构建myostatin第二外显子的sgRNA表达结构，并将T7启动子插入sgRNA转录起始位点前，同时构建Cas9蛋白的体外转录载体，以T7启动子调控。利用Cas9和sgRNA的体外转录载体获得Cas9mRNA和sgRNA，可用于生产敲除myostatin基因的动物。
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公开(公告)号：CN104531704A
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201410751079.1
申请日：2014-12-09
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/66 , C12N15/89 , A01K67/027
Abstract: 本发明提供了一种利用CRISPR-Cas9系统敲除动物FGF5基因的方法。本发明首先获得针对FGF5第二外显子的sgRNA识别区的DNA序列，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示；接着构建FGF5第二外显子的sgRNA表达结构，并将T7启动子插入sgRNA转录起始位点前，同时构建Cas9蛋白的体外转录载体，以T7启动子调控。利用Cas9和sgRNA的体外转录载体获得Cas9 mRNA和sgRNA，可用于生产敲除FGF5基因的动物。
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公开(公告)号：CN103757037A
公开(公告)日：2014-04-30
申请号：CN201310692299.7
申请日：2013-12-17
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种诱导表达锌指核酸酶的载体及其应用。该载体含有ColE1ori、Ampr基因，以及四个表达盒；从上游到下游，表达盒1依次包括PCMV？IE、Puror和SV40polyA，表达盒2依次包括PCMV、rtTA-Advanced和SV40polyA，表达盒3依次包括TREmod、PminCMV、DNA片段1和SV40polyA，表达盒4依次包括TREmod、PminCMV、DNA片段2和SV40polyA。实验证明，本发明具有如下优点：本发明所提供载体中带有一个用于药物筛选的基因，在转染效率低的条件下便于筛选和富集阳性细胞；本发明所提供载体将两个ZFN质粒整合到一起，故只要转染单个质粒即可，简化了转染环节；采用可诱导表达ZFNs的方法，控制ZFNs的表达时机，降低ZFNs对细胞的毒性。
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公开(公告)号：CN1208771A
公开(公告)日：1999-02-24
申请号：CN97116676.5
申请日：1997-08-15
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了使外源基因在动物乳腺组织中特异表达的载体pBCD,该载体含有控制外源基因在乳腺组织特异表达的羊BLG基因及其表达控制序列,驱动外源基因高效合成蛋白质的小鼠STAT序列,以及便于将外源基因插入载体的位于羊BLG基因启动子下游和乳球蛋白基因第一个遗传密码子ATG上游的多接头DNA片段。本发明还公开了利用该载体在动物乳腺组织中表达外源基因(如人生长激素)的方法。
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公开(公告)号：CN103695466B
公开(公告)日：2016-04-27
申请号：CN201310692377.3
申请日：2013-12-17
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种诱导动物体外细胞可逆永生化的载体及其应用。本发明所提供的诱导动物体外细胞可逆永生化的载体含有大肠杆菌复制起始区、氨苄青霉素抗性基因，以及表达盒1和表达盒2；所述表达盒1从上游到下游依次包括如下元件：Ptight、hTERT、IVS、IRES、Hygr和SV40polyA；所述表达盒2从上游到下游依次包括如下元件：PCMV、rtTA-Advanced和SV40polyA；所述表达盒1和所述表达盒2方向相反。实验证明，利用本发明所提供的环形载体，可实现对动物细胞寿命的可逆调节，提高体外细胞遗传操作的效率。本发明为动物遗传修饰或医学细胞治疗等应用提供安全的细胞材料具有重要意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103695466A
公开(公告)日：2014-04-02
申请号：CN201310692377.3
申请日：2013-12-17
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种诱导动物体外细胞可逆永生化的载体及其应用。本发明所提供的诱导动物体外细胞可逆永生化的载体含有大肠杆菌复制起始区、氨苄青霉素抗性基因，以及表达盒1和表达盒2；所述表达盒1从上游到下游依次包括如下元件：Ptight、hTERT、IVS、IRES、Hygr和SV40polyA；所述表达盒2从上游到下游依次包括如下元件：PCMV、rtTA-Advanced和SV40polyA；所述表达盒1和所述表达盒2方向相反。实验证明，利用本发明所提供的环形载体，可实现对动物细胞寿命的可逆调节，提高体外细胞遗传操作的效率。本发明为动物遗传修饰或医学细胞治疗等应用提供安全的细胞材料具有重要意义。
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公开(公告)号：CN101134772A
公开(公告)日：2008-03-05
申请号：CN200710119486.0
申请日：2007-07-25
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种哺乳类精子头后部膜蛋白的分离方法及其应用。该方法包括如下步骤：1)制备顶体反应后精子头；2)将步骤1)制备的顶体反应后的精子头在pH为7.2－7.6、浓度为10－20mM的Tris·Cl和100μg/ml PMSF组成的低渗液中冰浴，然后离心回收得到低渗精子头；3)将步骤2)回收的低渗精子头在三去污裂解液中冰浴，然后离心回收上清液即得到精子头后部膜蛋白组分。本发明的精子顶体后部质膜蛋白在受精前后和胚胎发育过程均有特异的作用，无论在科学研究领域还是在避孕等实用领域都具有重要意义。
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公开(公告)号：CN104531704B
公开(公告)日：2019-05-21
申请号：CN201410751079.1
申请日：2014-12-09
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/66 , C12N15/89 , A01K67/027
Abstract: 本发明提供了一种利用CRISPR‑Cas9系统敲除动物FGF5基因的方法。本发明首先获得针对FGF5第二外显子的sgRNA识别区的DNA序列，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示；接着构建FGF5第二外显子的sgRNA表达结构，并将T7启动子插入sgRNA转录起始位点前，同时构建Cas9蛋白的体外转录载体，以T7启动子调控。利用Cas9和sgRNA的体外转录载体获得Cas9 mRNA和sgRNA，可用于生产敲除FGF5基因的动物。
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公开(公告)号：CN103757037B
公开(公告)日：2016-04-27
申请号：CN201310692299.7
申请日：2013-12-17
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种诱导表达锌指核酸酶的载体及其应用。该载体含有ColE1ori、Ampr基因，以及4个表达盒；从上游到下游，表达盒1依次包括PCMV IE、Puror和SV40polyA，表达盒2依次包括PCMV、rtTA-Advanced和SV40polyA，表达盒3依次包括TREmod、PminCMV、DNA片段1和SV40polyA，表达盒4依次包括TREmod、PminCMV、DNA片段2和SV40polyA。实验证明，本发明具有如下优点：本发明所提供载体中带有一个用于药物筛选的基因，在转染效率低的条件下便于筛选和富集阳性细胞；本发明所提供载体将两个ZFN质粒整合到一起，故只要转染单个质粒即可，简化了转染环节；采用可诱导表达ZFNs的方法，控制ZFNs的表达时机，降低ZFNs对细胞的毒性。
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公开(公告)号：CN101134772B
公开(公告)日：2010-10-13
申请号：CN200710119486.0
申请日：2007-07-25
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种哺乳类精子头后部膜蛋白的分离方法及其应用。该方法包括如下步骤：1)制备顶体反应后精子头；2)将步骤1)制备的顶体反应后的精子头在pH为7.2-7.6、浓度为10-20mM的Tris·Cl和100μg/ml PMSF组成的低渗液中冰浴，然后离心回收得到低渗精子头；3)将步骤2)回收的低渗精子头在三去污裂解液中冰浴，然后离心回收上清液即得到精子头后部膜蛋白组分。本发明的精子顶体后部质膜蛋白在受精前后和胚胎发育过程均有特异的作用，无论在科学研究领域还是在避孕等实用领域都具有重要意义。
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