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公开(公告)号：CN116656642A
公开(公告)日：2023-08-29
申请号：CN202210151411.5
申请日：2022-02-18
Applicant: 中国中医科学院中药研究所
Abstract: 本发明公开了延胡索来源的氧甲基转移酶Cy4’OMT及其应用。本发明所要保护的一个技术方案是蛋白质及其相关的生物材料，所述蛋白质的氨基酸序列可为序列表中序列1或序列1的第166‑514位。实验证明，Cy4’OMT重组酶可以催化(S)‑3’‑hydroxy‑N‑methylcoclaurine的C4’位羟基甲基化，同时、兼具催化1‑BIA型化合物C6、C4’位及原小檗碱型化合物的C3位羟基甲基化的功能，后者在BIA途径中是本发明首次发现的。该酶可应用于四氢巴马汀、(S)‑牛心果碱和/或(S)‑乌药碱的生产，为苄基异喹啉生物碱的生物合成提供元件。
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公开(公告)号：CN118703454A
公开(公告)日：2024-09-27
申请号：CN202410697788.X
申请日：2024-05-31
Applicant: 中国中医科学院中药研究所
IPC: C12N9/02 , C12N15/53 , C12N15/81 , C12N1/19 , C12P17/12 , C12P17/18 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/00 , C12R1/865
Abstract: 本发明公开了来源于粉防己的细胞色素P450酶及其在阿朴菲生物碱化合物生物合成中的应用。本发明首次表征了参与粉防己中阿朴菲生物碱亚甲基二氧桥结构形成的关键P450，为其他物种中阿朴菲生物碱生物合成途径的解析提供了重要参考，也为异源生产多种多样的阿朴菲生物碱奠定基础。本发明筛选获得粉防己中基因组中注释为“CYP719”的P450酶CYP719C3，以不同的阿朴菲类化合物为底物进行酶促反应，利用液质联用仪检测反应结果，发现CYP719C3能够催化阿朴菲生物碱A环上亚甲基二氧桥形成的酶，可应用于阿朴菲生物碱途径的进一步解析和异源生产。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118048328A
公开(公告)日：2024-05-17
申请号：CN202211423901.2
申请日：2022-11-15
Applicant: 中国中医科学院中药研究所
Abstract: 本发明公开了双酶系统联合催化产生R型原小檗碱型化合物的方法。本发明的发明人通过基因筛选、异源表达、酶促反应技术手段筛选得到一个高度立体选择性的可逆酶系统，该系统包括CySDR1和CySDR2两个短链脱氢酶，可逆介导小檗碱型化合物与R型原小檗碱型化合物的相互转化，即催化产生R型原小檗碱型化合物。本发明具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN117106742A
公开(公告)日：2023-11-24
申请号：CN202210528066.2
申请日：2022-05-16
Applicant: 中国中医科学院中药研究所
Abstract: 本发明公开了来源于粉防己的一个甲基转移酶及其在制备异汉防己甲素中的应用。本发明所要保护的一个技术方案是蛋白质相关的生物材料和蛋白质在作为甲基转移酶或在制备双苄基异喹啉生物碱中的应用。所述蛋白质的氨基酸序列可为序列表中序列2或序列3。实验证明，将甲基转移酶BOMT进行克隆和表达载体构建并进行表达和纯化得到重组甲基转移酶BOMT，该酶可以以AdoMet为甲基供体，催化小檗胺(Berbamine)的羟基发生甲基化，生成异汉防己甲素(Isotetrandrine)。该甲基转移酶BOMT可用于BIA工程菌的构建。
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公开(公告)号：CN116606829A
公开(公告)日：2023-08-18
申请号：CN202210120943.2
申请日：2022-02-09
Applicant: 中国中医科学院中药研究所
Abstract: 本发明公开了来源于延胡索的氧甲基转移酶CyS2OMT及其功能。本发明所要保护的一个技术方案是蛋白质相关的生物材料，所述蛋白质的氨基酸序列可序列表中序列1或序列1的第166‑517位；以及该蛋白质在作为氧甲基转移酶在制备苄基异喹啉生物碱中的应用。本发明筛选构建得到的氧甲基转移酶CyS2OMT对原小檗碱型生物碱(S)‑Scoulerine的C2位羟基表现出较强偏好性；对1‑BIA、原小檗碱型生物碱和小檗碱型生物碱三种不同母核结构BIA的特定位置(异喹啉结构的C6位和C7位羟基)都具有较好的甲基化活性，具有开发成普遍适应性的工具酶的潜力。
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公开(公告)号：CN118547022A
公开(公告)日：2024-08-27
申请号：CN202410698052.4
申请日：2024-05-31
Applicant: 中国中医科学院中药研究所
IPC: C12P17/12 , C12P17/18 , C12N9/02 , C12N15/53 , C12N15/81 , C12N1/19 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/00 , C12R1/865
Abstract: 本发明公开了一种阿朴菲生物碱化合物制备方法及其相关催化酶与应用。本发明首次表征了参与粉防己中阿朴菲生物碱亚甲基二氧桥结构形成的关键P450，为其他物种中阿朴菲生物碱生物合成途径的解析提供了重要参考，也为异源生产多种多样的阿朴菲生物碱奠定基础。本发明筛选获得粉防己中基因组中注释为“CYP719”的P450酶CYP719C4，以不同的阿朴菲类化合物为底物进行酶促反应，利用液质联用仪检测反应结果，发现CYP719C4能够催化阿朴菲生物碱D环上亚甲基二氧桥形成的酶，可应用于阿朴菲生物碱途径的进一步解析和异源生产。
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公开(公告)号：CN116622659A
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202210124561.7
申请日：2022-02-10
Applicant: 中国中医科学院中药研究所
Abstract: 本发明公开了氧甲基转移酶Cy6OMT及其在催化苄基异喹啉生物碱化合物中的应用。本发明所保护的一个技术方案是蛋白质相关的生物材料及该蛋白质在作为氧甲基转移酶或制备苄基异喹啉生物碱中的应用。所述蛋白质的氨基酸序列可为序列表中序列1或序列1的第166‑513位。本发明筛选的Cy6OMT具有对1‑BIA底物(S)–去甲乌药碱的C6位羟基甲基化催化特异性强，并同时对(原)小檗碱型化合物的异喹啉结构的C6或C7位羟基具有甲基化催化功能。该Cy6OMT酶具有催化底物骨架广的特点，目前已报道的6OMT一般不具备对小檗碱型化合物的羟基甲基化催化功能或催化能力非常微弱。
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