公开(公告)号：CN101149355B

公开(公告)日：2010-07-21

申请号：CN200710144578.4

申请日：2007-11-09

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 姜毓君 ,  刘伟 ,  吕琦 ,  韩希妍 ,  王明娜 ,  闫冰 ,  孙大庆

IPC: G01N27/447 ,  G01N21/00 ,  G01N33/04 ,  C12Q1/02

Abstract: 一种检测牛乳中沙门氏菌的方法，它涉及一种检测牛乳中细菌的方法。它解决了传统的沙门氏菌检验方法存在繁琐、费时费力、特异性低的缺陷及现有的PCR技术或LAMP技术必需预增菌，无法快速检测牛乳的问题。检测方法：一、牛乳脱脂；二、加入EDTA溶液水浴；三、过滤；四、提取样品DNA；五、LAMP扩增；六、鉴定。本发明方法简单、省时，检测操作仅需约3小时，大大的提高了被检牛乳产品的新鲜度和货架期；而且本发明方法不需要预增菌，具有快速灵敏的优点。本发明方法利用沙门氏菌特异性引物，采用优化的LAMP反应系统，成功地以沙门氏菌invA基因为靶基因进行扩增，特异性强，准确率高达99.6％。

公开(公告)号：CN101386884B

公开(公告)日：2011-07-27

申请号：CN200810137442.5

申请日：2008-10-31

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 姜毓君 ,  满朝新 ,  赵宁 ,  吕琦 ,  赵凤 ,  刘伟 ,  韩希妍 ,  毕宇涵 ,  王明娜 ,  张光辉 ,  相丽 ,  闫冰

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04

Abstract: 一种同时检测原料乳中多种致病菌的方法，它涉及了一种检测原料乳中细菌的方法。本发明解决了现有检测原料乳中致病菌的方法中存在不能同时检测多种致病菌、耗时长、费用高或不适用于检测牛乳的问题。本发明同时检测原料乳中多种致病菌的方法按照如下步骤进行：一、将待检测的原料乳去除脂肪；二、将步骤一保温后的样品过滤；三、收集洗脱液；四、进行多重PCR并对凝胶成像系统进行分析；即得到检测结果。本发明的试剂盒由Taq酶溶液、多重PCR反应液、阴性对照液和阳性对照液组成。本发明的方法具有耗时短、费用低、适用于检测牛乳和检测结果准确的优点。本发明的试剂盒使用方便。

公开(公告)号：CN101386884A

公开(公告)日：2009-03-18

申请号：CN200810137442.5

申请日：2008-10-31

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 姜毓君 ,  吕琦 ,  赵凤 ,  刘伟 ,  韩希妍 ,  毕宇涵 ,  王明娜 ,  张光辉 ,  相丽 ,  闫冰

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04

Abstract: 一种同时检测原料乳中多种致病菌的方法及检测试剂盒，它涉及了一种检测原料乳中细菌的方法及检测试剂盒。本发明解决了现有检测原料乳中致病菌的方法中存在不能同时检测多种致病菌、耗时长、费用高或不适用于检测牛乳的问题。本发明同时检测原料乳中多种致病菌的方法按照如下步骤进行：一、将待检测的原料乳去除脂肪；二、将步骤一保温后的样品过滤；三、收集洗脱液；四、进行多重PCR并对凝胶成像系统进行分析；即得到检测结果。本发明的试剂盒由Taq酶溶液、多重PCR反应液、阴性对照液和阳性对照液组成。本发明的方法具有耗时短、费用低、适用于检测牛乳和检测结果准确的优点。本发明的试剂盒使用方便。

公开(公告)号：CN101735994A

公开(公告)日：2010-06-16

申请号：CN200910217470.2

申请日：2009-12-31

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 姜毓君 ,  姚丽燕 ,  曲行光 ,  韩希妍 ,  张光辉 ,  赵凤 ,  周艳秋

IPC: C12N9/76 ,  C12N15/57 ,  C12N15/74

Abstract: 一种在乳酸乳球菌中表达牛胰蛋白酶的方法，它涉及一种表达牛胰蛋白酶的方法。解决了现有牛胰蛋白酶目前还不能在乳酸乳球菌中表达的问题。方法：将野生型牛胰蛋白酶N端的8个密码子和所有编码Leu和Ary的稀有密码子替换为乳酸乳球菌的偏爱密码子，得人工合成牛胰蛋白酶基因，并引入识别序列，然后与pUC57连接转化DH5α，筛选阳性转化子pUC57-trym，再与表达载体pSEC-E7同时双酶切后，回收所需目的片段，连接并构建重组表达载体pSEC-trym，电转化转入乳酸乳球菌NZ9000，厌氧培养后经乳链菌肽Nisin诱导，即完成。本发明使人工合成牛胰蛋白酶成功地在乳酸乳球菌中进行表达，且具有生物学活性。

公开(公告)号：CN101260423A

公开(公告)日：2008-09-10

申请号：CN200810064397.5

申请日：2008-04-28

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 姜毓君 ,  闫冰 ,  韩希妍 ,  曲妍妍 ,  王明娜 ,  相丽 ,  吕琦 ,  毕宇涵

IPC: C12Q1/04 ,  C12Q1/68

Abstract: 一种检测单核细胞增生李斯特活菌的方法，它涉及一种检测李斯特菌的方法。本发明解决了现有检测单增李斯特活菌的方法容易产生假阳性的问题。本发明检测单核细胞增生李斯特菌的方法按如下步骤进行：从待测物品中提取菌泥后提取RNA进行反转录及实时PCR；即得到可以判断待测物品是否含有单增李斯特活菌的图谱。本发明具有灵敏度高，特异性好，操作简便，周期较短的优点，适应食品工业中致病菌快速检测的需求。

公开(公告)号：CN101149355A

公开(公告)日：2008-03-26

申请号：CN200710144578.4

申请日：2007-11-09

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 姜毓君 ,  刘伟 ,  吕琦 ,  韩希妍 ,  王明娜 ,  闫冰 ,  孙大庆

IPC: G01N27/447 ,  G01N21/00 ,  G01N33/04 ,  C12Q1/02

Abstract: 一种检测牛乳中沙门氏菌的方法，它涉及一种检测牛乳中细菌的方法。它解决了传统的沙门氏菌检验方法存在繁琐、费时费力、特异性低的缺陷及现有的PCR技术或LAMP技术必需预增菌，无法快速检测牛乳的问题。检测方法：一、牛乳脱脂；二、加入EDTA溶液水浴；三、过滤；四、提取样品DNA；五、LAMP扩增；六、鉴定。本发明方法简单、省时，检测操作仅需约3小时，大大的提高了被检牛乳产品的新鲜度和货架期；而且本发明方法不需要预增菌，具有快速灵敏的优点。本发明方法利用沙门氏菌特异性引物，采用优化的LAMP反应系统，成功地以沙门氏菌invA基因为靶基因进行扩增，特异性强，准确率高达99.6％。