公开(公告)号：CN118240954A

公开(公告)日：2024-06-25

申请号：CN202410486016.1

申请日：2024-04-22

Applicant: 上海市重大传染病和生物安全研究院

Inventor： 程训佳 ,  荆雯雯 ,  张童 ,  隋国栋 ,  冯萌 ,  李鑫 ,  刘春草

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  B01L3/00 ,  C12R1/35

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas12b‑LAMP的离心式微流控一体化的肺炎支原体检测试剂盒及其应用，试剂盒包括检测用组合物和预包埋试剂的离心式微流控芯片；检测用组合物包括针对肺炎支原体MP5设计的LAMP扩增引物、靶向肺炎支原体MP5基因的sgRNA、AapCas12b蛋白、荧光探针、Bst 2.0聚合酶、dNTP试剂和混合缓冲液；LAMP扩增引物F3、B3、FIP、BIP、FLP、BLP的核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑6所示；sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。本发明的试剂盒，基于CRISPR/Cas12b系统结合LAMP等温扩增，通过实时荧光检测与离心式微流控芯片技术相结合的方法，实现肺炎支原体的一步法自动化检测，检测时间短、具有良好的灵敏度和特异性，并通过大量临床样本验证了方法在临床应用中的可行性，为临床肺炎支原体感染的高效检测奠定了基础。