一种共表达伴侣蛋白的米根霉脂肪酶生产菌种

    公开(公告)号:CN102876593A

    公开(公告)日:2013-01-16

    申请号:CN201210234131.7

    申请日:2012-07-09

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 喻晓蔚 徐岩 卢鑫

    Abstract: 本发明公开了一种共表达伴侣蛋白的米根霉脂肪酶生产菌种,本发明运用了分子生物学技术在表达米根霉脂肪酶的毕赤酵母基因工程菌中插入两种伴侣蛋白ERO1和PDI基因。通过在两种伴侣蛋白的协同作用下,加速了外源蛋白的合成速度,从而增加了外源蛋白脂肪酶的分泌速率,其胞外酶活力达到16000U/mL。

    一种耐高温的华根霉脂肪酶突变体

    公开(公告)号:CN102653742A

    公开(公告)日:2012-09-05

    申请号:CN201210145502.4

    申请日:2010-08-13

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 喻晓蔚 徐岩 王睿

    Abstract: 一种耐高温的华根霉脂肪酶突变体,属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了由华根霉(Rhizopuschinensis)CCTCCM201021脂肪酶作为亲本,经分子生物学技术而获得的热稳定性提高的脂肪酶突变体。在各突变体的氨基酸序列中,涉及到的氨基酸突变为Met101Thr、Glu107Gly、Ala129Ser、Ser151Asn、Cys160Leu、Lys161Arg、Pro168Leu、Pro168His、Leu180His、Asp182Tyr、Thr183Ala、Thr218Ser、Lys219Asp、Ala230Phe、Ser234Phe、Val261Gly、His317Pro、Val329Ala、Glu363Arg、Asn366Asp、Ser373Cys中的一种或几种。以在65℃下半衰期t50来表示,这些突变体的热稳定性较亲本华根霉脂肪酶得到了提高。本发明也公开了编码脂肪酶突变体的DNA序列、表达载体、宿主细胞。

    定向进化构建的催化活力提高的脂肪酶突变体

    公开(公告)号:CN102604909A

    公开(公告)日:2012-07-25

    申请号:CN201210083905.0

    申请日:2009-11-11

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 喻晓蔚 徐岩 王睿

    Abstract: 定向进化构建的催化活力提高的脂肪酶突变体,其由华根霉(Rhizopuschinensis)CCTCCM201021脂肪酶基因,其Genbank登录号EF405962,运用易错PCR方法,通过多轮重组和定点突变,经定向进化而获得的脂肪酶突变体,在突变体的氨基酸序列中,包含氨基酸突变Val261Gly;以转换数Kcat表示,脂肪酶突变体的酶活较出发菌株得到了提高。

    高表达量的脂肪酶基因及其分泌表达载体和应用

    公开(公告)号:CN102080092A

    公开(公告)日:2011-06-01

    申请号:CN201010578626.2

    申请日:2010-12-08

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种高表达量的脂肪酶基因及其分泌表达载体,属于遗传工程领域。所述脂肪酶基因DNA序列为SEQIDNO.1或在严格条件下与SEQIDNO.1限定的DNA序列杂交且编码具有脂肪酶活性的蛋白质的DNA分子。本发明还公开了一种应用所述脂肪酶基因生产脂肪酶的方法,构建的工程菌克服了该酶表达量及酶活一直不高的缺陷,摇瓶发酵酶活最高可达123.4U/mL,比出发重组菌提高了约11倍,7L罐发酵甲醇诱导84h酶活约为7062.5U/mL,比摇瓶发酵提高了约56.2倍,具有广阔的应用前景。

    一种高效发酵生产脂肪酶的方法

    公开(公告)号:CN101984053A

    公开(公告)日:2011-03-09

    申请号:CN201010581033.1

    申请日:2010-12-09

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种高效发酵生产脂肪酶的方法,属于发酵工程领域。本发明以含有华根霉(Rhizopuschinensis)CCTCCNo.M201021脂肪酶基因的重组酵母菌株GS115/pPIC9K-proRCL为生产菌株,通过甲醇诱导的分阶段控制,显著提高了脂肪酶的产量。该方法简单易行,适合产业化生产。

    热稳定性提高的脂肪酶突变体

    公开(公告)号:CN101974499A

    公开(公告)日:2011-02-16

    申请号:CN201010254620.X

    申请日:2010-08-13

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 喻晓蔚 徐岩 王睿

    Abstract: 热稳定性提高的脂肪酶突变体,属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了由华根霉(Rhizopus chinensis)CCTCC No.M201021脂肪酶作为亲本,经分子生物学技术而获得的热稳定性提高的脂肪酶突变体。在各突变体的氨基酸序列中,涉及到的氨基酸突变为Met101Thr、Glu107Gly、Ala129Ser、Ser151Asn、Cys160Leu、Lys161Arg、Pro168Leu、Pro168His、Leu180His、Asp182Tyr、Thr183Ala、Thr218Ser、Lys219Asp、Ala230Phe、Ser234Phe、Val261Gly、His317Pro、Val329Ala、Glu363Arg、Asn366Asp、Ser373Cys中的一种或几种。以在65℃下半衰期t50来表示,这些突变体的热稳定性较亲本华根霉脂肪酶得到了提高。本发明也公开了编码脂肪酶突变体的DNA序列、表达载体、宿主细胞。

    一种减弱液泡分选提高里氏木霉纤维素酶产量的方法

    公开(公告)号:CN113862242B

    公开(公告)日:2024-06-25

    申请号:CN202111204677.3

    申请日:2021-10-15

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 喻晓蔚 闫肃 徐岩

    Abstract: 本发明公开了一种减弱液泡分选提高里氏木霉纤维素酶产量的方法,属于生物工程技术领域。本发明通过敲除液泡分选途径相关基因vps10,vps13以及vps21,减弱了纤维素酶分泌过程中向液泡的错误转运,进而提升了里氏木霉中纤维素酶的产量。在纤维素诱导条件下,缺失菌株Δvps10,Δvps13以及Δvps21的胞外蛋白以及纤维素酶酶活都有不同程度的提升,将发酵液用于生物质降解可使葡萄糖得率较亲本获得5.6%,18.5%和17.7%提升,表明Δvps10,Δvps13以及Δvps21生产的纤维素酶能够对生物质进行更好的分解,产生更多的葡萄糖,具有更好的应用价值。

    一种脂肪酶突变体及其在去污方面的应用

    公开(公告)号:CN110904074B

    公开(公告)日:2020-12-01

    申请号:CN201911352639.5

    申请日:2019-05-31

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 王睿 喻晓蔚 徐岩

    Abstract: 本发明公开了一种脂肪酶突变体及其在去污方面的应用,属于酶工程技术领域。本发明脂肪酶突变体的热稳定性好、pH稳定性好、洗涤性能好,因此,本发明的脂肪酶突变体在去污、油脂加工、乳品加工、面食加工、肉类加工、药物合成、柴油合成、高分子合成、手性化合物合成、皮革生产、制备洗涤剂和造纸等方面均有很重要的应用。

    一种酶活及位置选择性提高的脂肪酶突变体及其应用

    公开(公告)号:CN108642025B

    公开(公告)日:2020-08-14

    申请号:CN201810472002.9

    申请日:2018-05-17

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 喻晓蔚 徐岩

    Abstract: 本发明公开了一种酶活及位置选择性提高的脂肪酶突变体及其应用,属于基因工程技术领域。本发明对野生型脂肪酶进行突变,突变体M8A,L10A,D11A,L12A,P17G的比酶活较野生型酶活提高了1.1‑2.4倍,突变体M8A、L10A、T9A的1,3‑位置选择性较野生型提高了4.75‑5倍。酶活及位置选择性是脂肪酶在结构脂质催化应用中的重要参数,本发明将突变体在人乳脂替代品的催化反应中进行了应用,取得了显著的效果。

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