对鲍氏志贺氏菌15型、痢疾志贺氏菌2型和大肠杆菌0112的O-抗原特异的核苷酸

    公开(公告)号:CN1438230A

    公开(公告)日:2003-08-27

    申请号:CN03100538.1

    申请日:2003-01-20

    Applicant: 南开大学

    Inventor: 王磊 郭宏杰 冯露

    Abstract: 本发明提供一种对鲍氏志贺氏菌15型、痢疾志贺氏菌2型和大肠杆菌0112的O-抗原特异的核苷酸,它是鲍氏志贺氏菌15型(Shigella boydii 15)中控制O-抗原合成的基因簇的核苷酸全序列;还包括O-抗原基因簇的结构以及源于鲍氏志贺氏菌15型的O-抗原基因簇中的糖基转移酶基因和寡糖单位处理基因(包括wzx基因或与wzx有相似功能的基因、wzy基因或与wzy有相似功能的基因)的寡核苷酸,并且包括获得细菌O-抗原基因簇的方法;本发明通过PCR证实它们对鲍氏志贺氏菌15型、痢疾志贺氏菌2型和大肠杆菌0112的O-抗原都有高度的特异性;本发明还公开了用本发明的寡核苷酸检测和鉴定人体及环境中的鲍氏志贺氏菌15型,痢疾志贺氏菌2型和大肠杆菌0112的方法。

    对痢疾志贺氏菌8型的O-抗原特异的核苷酸

    公开(公告)号:CN1429833A

    公开(公告)日:2003-07-16

    申请号:CN03100539.X

    申请日:2003-01-20

    Applicant: 南开大学

    Inventor: 王磊 郭宏杰 冯露

    CPC classification number: Y02A50/451

    Abstract: 本发明提供一种对痢疾志贺氏菌8型(Shigelladysenteriae 8)的O-抗原特异的核苷酸,它是痢疾志贺氏菌8型中控制O-抗原合成的基因簇的核苷酸全序列,如SEQ IDNO:1所示的分离的核苷酸,全长9227个碱基;或者具有一个或多个插入、缺失或取代的碱基,同时保持所述分离的核苷酸功能的SEQ ID NO:1的核苷酸;还包括源于痢疾志贺氏菌8型的O-抗原基因簇中的糖基转移酶基因和寡糖单位处理基因的寡核苷酸;本发明通过PCR证实寡核苷酸对痢疾志贺氏菌8型的O-抗原都有高度的特异性;本发明还公开了用本发明的寡核苷酸检测和鉴定人体及环境中的痢疾志贺氏菌8型的方法。

    一组肠道外致病大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的基因工程大肠杆菌的构建及应用

    公开(公告)号:CN112501096B

    公开(公告)日:2023-12-29

    申请号:CN202011421568.2

    申请日:2020-12-08

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 本发明公开了一组肠道外致病大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的基因工程大肠杆菌的构建及应用。基于CRISPR‑cas9删除E.coli K‑12 MG1655菌株中zwf、pfkB、lacZ、manA和pykA基因,构建能够协同利用葡萄糖和甘油的菌株,分别用于合成O抗原多糖和维持细菌生理代谢;进一步删除waaL、肠杆科共有抗原(ECA)和O16基因簇,构建底盘细胞为OSLA。分别导入O5和O7抗原合成基因簇,同时导入表达糖基转移酶以及载体蛋白,合成各血清型糖蛋白结合疫苗。纯化的糖蛋白经过动物免疫实验证实能够刺激小鼠产生具有保护性作用的抗体,保护率可以达到90%以上。本发明构建的重组大肠杆菌糖蛋白结合疫苗为抗肠道外致病大肠杆菌感染的免疫治疗提供了新的选择。

    对类志贺邻单胞菌8种O抗原分型的基因液相芯片及检测方法

    公开(公告)号:CN105331693B

    公开(公告)日:2019-05-14

    申请号:CN201510735337.1

    申请日:2015-11-03

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 本发明涉及一种对8种类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides,P.S)的O抗原进行分型的液相芯片及其制备方法。本发明还涉及利用所述的基因液相芯片进行O抗原分型的方法。本发明以类志贺邻单胞菌O抗原基因簇内的特异基因,包括Wzx,Wzy等为靶基因,建立了对8种类志贺邻单胞菌的O抗原分型液相芯片和分型方法,为肠道及水环境中类志贺邻单胞菌的O抗原分型提供一条可信的途径。利用本发明的基因芯片检测肠道及水环境中的类志贺邻单胞菌,并且对其进行O抗原分型,具有特异性强、灵敏度高、重复性好等诸多优点。

    对河流弧菌O2,O4,O13,O15和O18特异的核苷酸及其应用

    公开(公告)号:CN103898108B

    公开(公告)日:2016-09-28

    申请号:CN201410158813.3

    申请日:2014-04-21

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 本发明涉及对河流弧菌O2,O4,O13,O15和O18血清型特异的核苷酸及其应用,所述核苷酸包括1)SEQ ID NO:1‑14所示的核苷酸中的至少一种;2)与SEQ ID NO:1‑14所示的核苷酸互补的核苷酸中的至少一种。这些核苷酸可用于制备检测河流弧菌用PCR试剂盒和基因芯片。本发明的对河流弧菌O2,O4,O13,O15和O18血清型特异的核苷酸及包含该核苷酸的PCR试剂盒、基因芯片的实用性强,PCR试剂盒配制方法简便,检测周期短、速度快,可操作性强,易于产业化生产,而检测成本却相对较低;准确性高;灵敏度高。

    制备特异性沙门氏菌H:6诊断血清的工程菌株及构建方法

    公开(公告)号:CN103468626B

    公开(公告)日:2016-05-11

    申请号:CN201310446593.X

    申请日:2013-09-27

    Applicant: 南开大学

    Inventor: 冯露 蒋新蕾 王磊

    Abstract: 本发明公开了一种能够制备特异性沙门氏菌H:6诊断血清的工程菌株及其构建方法,它是利用现代分子生物学技术对传统的多克隆抗体制备体系进行改造,构建表面鞭毛抗原合成基因缺失的宿主菌;将不同病原微生物的表面鞭毛抗原合成基因克隆到适合表达的载体中,并转入抗原基因缺失的宿主菌中,得到一系列具有相同遗传背景,含有不同病原微生物特异性表面鞭毛抗原基因的工程菌株。利用上述技术体系能够构建一个包含若干种沙门氏菌的特异抗体库。该抗体库可补充现有抗血清种类,同时也可为其他免疫学技术的应用提供基础。

    10种常见致病军团菌的基因分型芯片及检测用试剂盒

    公开(公告)号:CN103160587B

    公开(公告)日:2015-04-22

    申请号:CN201310112294.2

    申请日:2013-04-02

    Applicant: 南开大学

    CPC classification number: Y02A50/451

    Abstract: 本发明提供了一种针对10种常见致病军团菌(Legionella)的基因分型芯片及检测用试剂盒,其主要针对嗜肺军团菌,安氏军团菌,博滋曼军团菌,杜莫夫军团菌,费菲军团菌,戈尔曼军团菌,乔丹河军团菌,长滩军团菌,米氏军团菌,迈氏军团菌等10种军团菌。该基因芯片包括固相载体和固定在该固相载体上的寡聚核苷酸探针,上述寡聚核苷酸探针包含从16s-23s间区序列(ITS)上选取的DNA片段或其互补的DNA片段。利用设计的引物将待检测样品基因组DNA扩增并标记后,用上述基因芯片进行杂交,根据杂交信号,可检测出不同种类的军团菌。利用本发明的基因芯片可达到检测常见致病军团菌的目的,操作简便,准确性高,重复性强,并且可更准确的指导医疗用药。

    对河流弧菌O2,O4,O13,O15和O18特异的核苷酸及其应用

    公开(公告)号:CN103898108A

    公开(公告)日:2014-07-02

    申请号:CN201410158813.3

    申请日:2014-04-21

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 本发明涉及对河流弧菌O2,O4,O13,O15和O18血清型特异的核苷酸及其应用,所述核苷酸包括1)SEQIDNO:1-14所示的核苷酸中的至少一种;2)与SEQIDNO:1-14所示的核苷酸互补的核苷酸中的至少一种。这些核苷酸可用于制备检测河流弧菌用PCR试剂盒和基因芯片。本发明的对河流弧菌O2,O4,O13,O15和O18血清型特异的核苷酸及包含该核苷酸的PCR试剂盒、基因芯片的实用性强,PCR试剂盒配制方法简便,检测周期短、速度快,可操作性强,易于产业化生产,而检测成本却相对较低;准确性高;灵敏度高。

    一种特异性沙门氏菌系列诊断血清工程菌株的构建方法

    公开(公告)号:CN103484416A

    公开(公告)日:2014-01-01

    申请号:CN201310446555.4

    申请日:2013-09-27

    Applicant: 南开大学

    Inventor: 冯露 蒋新蕾 王磊

    Abstract: 本发明公开了一种特异性沙门氏菌系列诊断血清工程菌株的构建方法,它是利用现代分子生物学技术对传统的多克隆抗体制备体系进行改造,构建表面鞭毛抗原合成基因缺失的宿主菌;将不同病原微生物的表面鞭毛抗原合成基因克隆到适合表达的载体中,并转入抗原基因缺失的宿主菌中,得到一系列具有相同遗传背景,含有不同病原微生物特异性表面鞭毛抗原基因的工程菌株。利用上述技术体系能够构建一个包含若干种沙门氏菌的特异抗体库。该抗体库可补充现有抗血清种类,同时也可为其他免疫学技术的应用提供基础。

    10种常见致病军团菌的基因分型芯片及检测用试剂盒

    公开(公告)号:CN103160587A

    公开(公告)日:2013-06-19

    申请号:CN201310112294.2

    申请日:2013-04-02

    Applicant: 南开大学

    CPC classification number: Y02A50/451

    Abstract: 本发明提供了一种针对10种常见致病军团菌(Legionella)的基因分型芯片及检测用试剂盒,其主要针对嗜肺军团菌,安氏军团菌,博滋曼军团菌,杜莫夫军团菌,费菲军团菌,戈尔曼军团菌,乔丹河军团菌,长滩军团菌,米氏军团菌,迈氏军团菌等10种军团菌。该基因芯片包括固相载体和固定在该固相载体上的寡聚核苷酸探针,上述寡聚核苷酸探针包含从16s-23s间区序列(ITS)上选取的DNA片段或其互补的DNA片段。利用设计的引物将待检测样品基因组DNA扩增并标记后,用上述基因芯片进行杂交,根据杂交信号,可检测出不同种类的军团菌。利用本发明的基因芯片可达到检测常见致病军团菌的目的,操作简便,准确性高,重复性强,并且可更准确的指导医疗用药。

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