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公开(公告)号：CN104818265B
公开(公告)日：2018-04-06
申请号：CN201510218597.1
申请日：2015-04-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了本发明涉及一种降解尿素和氨基甲酸乙酯的耐乙醇双功能酶及其应用，属于生物工程技术领域。该酶是来自于地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis 9945A)的脲酶，能够耐受高浓度乙醇的同时高效降解氨基甲酸乙酯。本发明利用大肠杆菌表达系统BL21(DE3)/pRSFDuet‑1，成功实现了具有EC水解酶活力的脲酶基因的高效表达，以EC为底物时酶活达到2.93U/ml，以尿素为底物时酶活达到5.81U/ml。重组酶在20％的乙醇中37℃保留4h，以EC为底物时仍可保留其50％以上的活性。本发明制备的重组酶为实现黄酒中EC及尿素的消除，实现EC水解酶工业化生产奠定了基础，具有巨大的经济及社会效益。
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公开(公告)号：CN104560856B
公开(公告)日：2017-09-15
申请号：CN201510017545.8
申请日：2015-01-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种好氧合成维生素B12的大肠杆菌及其构建与应用，属于代谢工程和微生物发酵领域。本发明大肠杆菌为宿主细胞，使用兼容的表达载体，将来源于类球红细菌和恶臭假单胞菌维生素B12合成途径中大肠杆菌基因组缺失的基因进行模块化组装并表达，构建重组大肠杆菌工程菌株，通过发酵验证，实现了大肠杆菌合成维生素B12。
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公开(公告)号：CN104531597B
公开(公告)日：2017-09-15
申请号：CN201510002644.9
申请日：2015-01-05
Applicant: 江南大学 , 江苏汉光生物工程有限公司
Abstract: 本发明公开了一株产L‑苯丙氨酸的重组谷氨酸棒状杆菌及其构建与应用，属于代谢工程领域。本发明在谷氨酸棒杆菌模式菌株Corynebacterium glutamcium ATCC 13032中，使用谷氨酸棒杆菌与大肠杆菌的两个穿梭表达载体pEC‑XK99E和pXMJ19表达L‑Phe合成途径中八个关键酶基因：aroFfbr，tktA，ppsA，aroL，pheAfbr，aroE，aroA，tyrB，并通过使用两个不同强度的启动子Ptac和Plac对八个基因进行组合表达提高L‑Phe产量，L‑Phe产量最高达到5.59±0.11g/L，莽草酸积累为0.31±0.11g/L。本发明提供了一种通过过量表达L‑Phe合成途径关键酶基因，提高谷氨酸棒杆菌发酵生产L‑Phe的方法。
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公开(公告)号：CN104388372B
公开(公告)日：2017-07-21
申请号：CN201410734915.5
申请日：2014-12-04
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产软骨素的重组枯草芽孢杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明将UDP‑GlcNAc C4异构酶KfoA和软骨素合成酶KfoC编码基因整合于枯草芽孢杆菌基因组上完善了其代谢合成软骨素途径，同时，对枯草芽孢杆菌中UDP‑GlcA和UDP‑GlcNAc合成途径的基因，进行模块化组装表达分析，通过控制不同的UDP‑GlcA和UDP‑GlcNAc浓度，分析了枯草芽孢杆菌产软骨素合成途径上的关键基因及节点。本发明为食品级微生物高效生产制备软骨素奠定了一定的基础，适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN104263666B
公开(公告)日：2017-07-14
申请号：CN201410467076.5
申请日：2014-09-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产小分子透明质酸的重组毕赤酵母及其构建方法，属于生物工程技术领域。本发明采用兽疫链球菌来源的透明质酸合酶hasA和枯草芽孢杆菌来源的UDP‑葡萄糖脱氢酶tuaD，重组Pichia pastoris GS115宿主中表达，实现了透明质酸的生产；同时，采用水蛭来源的透明质酸酶整合至毕赤酵母基因组上，分别置于不同强度的组成型启动子下分泌表达，通过控制透明质酸酶的分泌表达量来制备不同分子量大小的小分子透明质酸产物，制备的产物分子量范围有差异，对于微生物直接生产特定范围的小分子透明质酸具有重要的指导借鉴意义。本发明为高效制备小分子透明质酸奠定了一定的基础，适合于工业化生产应用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106893700A
公开(公告)日：2017-06-27
申请号：CN201710256871.3
申请日：2017-04-19
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/6427 , C07K2319/02 , C12N15/625 , C12N15/815 , C12Y304/21004
Abstract: 本发明公开了一种人工设计自活化前导肽序列提高胰蛋白酶酶活的方法，属于基因工程领域。本发明构建的毕赤酵母工程菌，表达N端融合人工自活化前导肽序列TPAPPSDDLGTFDDDDK的胰蛋白酶。本发明得到的酵母工程菌GS115‑Sedeif的胰蛋白酶酶活(即胰蛋白酶酰胺酶酶活)达156U·mL‑1，酯酶酶活为15015.8U·mL‑1(以BAEE为底物)。是改造前的菌株胰蛋白酶酶活的1.82倍和3.29倍。该发明解决了胰蛋白酶异源表达量低的关键问题。应用该发明中的重组菌株生产胰蛋白酶，具产量高、发酵工艺简化、便于工业化应用的优点。
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公开(公告)号：CN104312933B
公开(公告)日：2017-03-29
申请号：CN201410555749.2
申请日：2014-10-17
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种优化信号肽提高胰蛋白酶胞外分泌表达的方法，属于基因工程技术领域。本发明通过与胰蛋白酶融合表达8种毕赤酵母胞外分泌信号肽，甲醇诱导启动子(pAOX)在Pichia pastoris GS115染色体上表达重组胰蛋白酶。本发明的αmf信号肽与原始的α-factor信号肽相比，胰蛋白酶酶活提高了2.75倍，解决了胰蛋白酶胞外分泌量低的问题。应用本发明方法生产胰蛋白酶，产量高、工艺简化、便于工业化应用。
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公开(公告)号：CN106497845A
公开(公告)日：2017-03-15
申请号：CN201611149169.9
申请日：2016-12-14
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12P19/26 , C12N9/0006 , C12N9/104 , C12N9/1241 , C12N9/90 , C12P19/04 , C12Y207/07009 , C12Y504/02002 , C12Y504/0201
Abstract: 本发明公开了一种高产软骨素的重组枯草芽孢杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过在产软骨素的枯草芽孢杆菌中进行合成途径优化，即共表达UDP-GlcUA途径和UDP-GlcNAc途径中的关键酶基因，提高了软骨素的产量。本发明提供的重组枯草芽孢杆菌可满足医疗卫生和食品安全的要求，无内毒素和病原感染的风险；并可以使软骨素的积累达到最高，为6.06g/L，分子量为78.64kD。本研究为高产软骨素提供了新策略，一方面可应用于其它糖胺聚糖，另一方面为工业化大规模生产软骨素奠定了基础。
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公开(公告)号：CN106367459A
公开(公告)日：2017-02-01
申请号：CN201610878554.0
申请日：2016-09-30
Applicant: 江南大学
IPC: C12P19/26
CPC classification number: C12P19/26
Abstract: 本发明公开了一种制备不同分子量寡聚透明质酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明以产HA的重组枯草芽孢杆菌E168T/pP43-DU-PBMS为出发菌株，在HA发酵过程中添加水蛭来源的透明质酸酶，结合蔗糖补料发酵，实现发酵偶联酶解制备小分子透明质酸及分子量介于1×103-105Da的寡糖，同时提高了小分子HA及其寡糖的产量。本发明为高效制备小分子透明质酸及寡糖奠定了一定的基础，适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN105950613A
公开(公告)日：2016-09-21
申请号：CN201610543258.5
申请日：2016-07-11
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/10
CPC classification number: C12N15/1027 , C12Q2521/101 , C12Q2527/125 , C12Q2521/501
Abstract: 本发明公开了一种体外快速组装非磷酸化DNA片段的方法，属于基因工程技术领域。本发明在需要组装构建的目标片段两末端引入同源臂序列，采用热循环进行变性‑退火‑切割‑连接的方式，实现快速体外DNA组装构建。在1.5h内一次可以实现2‑4个非磷酸化DNA片段的高效快速的无缝组装。本发明可用于常规的DNA重组构建，并实现高通量操作，特别适合于对酶基因和合成途径的体外高效组装上，可引入丰富的组合突变多样性，进行快速定向进化和合成生物学操作。
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