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公开(公告)号：CN106893700B
公开(公告)日：2020-07-07
申请号：CN201710256871.3
申请日：2017-04-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种人工设计自活化前导肽序列提高胰蛋白酶酶活的方法，属于基因工程领域。本发明构建的毕赤酵母工程菌，表达N端融合人工自活化前导肽序列TPAPPSDDLGTFDDDDK的胰蛋白酶。本发明得到的酵母工程菌GS115‑Sedeif的胰蛋白酶酶活(即胰蛋白酶酰胺酶酶活)达156U·mL‑1，酯酶酶活为15015.8U·mL‑1(以BAEE为底物)。是改造前的菌株胰蛋白酶酶活的1.82倍和3.29倍。该发明解决了胰蛋白酶异源表达量低的关键问题。应用该发明中的重组菌株生产胰蛋白酶，具产量高、发酵工艺简化、便于工业化应用的优点。
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公开(公告)号：CN104328102B
公开(公告)日：2017-01-25
申请号：CN201410612164.X
申请日：2014-11-04
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的胰蛋白酶突变体及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明的突变体是在序列SEQ ID NO.2所示的氨基酸的基础上，将第1位的酪氨酸突变成了苯丙氨酸，同时将第123位的精氨酸突变成了异亮氨酸。本发明得到的突变体在毕赤酵母中表达，3L罐发酵酰胺酶(BAPNA)酶活为85.3U/mL,酯酶(BAEE)酶活为5954U/mL，相比突变前的菌株，酶活分别提高了3.3倍、2.7倍，解决了胰蛋白酶胞外酶活低的问题。应用该发明中的突变体生产胰蛋白酶，产量高、工艺简化、便于工业化应用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104328103A
公开(公告)日：2015-02-04
申请号：CN201410614186.X
申请日：2014-11-04
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/6427 , C12Y304/21004
Abstract: 本发明公开了一种高产胰蛋白酶的酵母工程菌及其构建方法，属于基因工程领域。本发明构建的酵母工程菌，表达前端融合了硫氧还蛋白的胰蛋白酶，且在硫氧还蛋白与胰蛋白酶之间插入四个天冬氨酸和赖氨酸(D4K)。本发明的酵母工程菌，其胰蛋白酶酰胺酶酶活(BAPNA)47.4U/mL、酯酶酶活(BAEE)2667U/mL，解决了胰蛋白酶原活化、产量低的问题。应用该菌种生产胰蛋白酶，具有产量高、工艺简化、便于工业化应用的优点。
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公开(公告)号：CN104328102A
公开(公告)日：2015-02-04
申请号：CN201410612164.X
申请日：2014-11-04
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/6427 , C12Y304/21004
Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的胰蛋白酶突变体及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明的突变体是在序列SEQ ID NO.2所示的氨基酸的基础上，将第1位的酪氨酸突变成了苯丙氨酸，同时将第123位的精氨酸突变成了异亮氨酸。本发明得到的突变体在毕赤酵母中表达，3L罐发酵酰胺酶(BAPNA)酶活为85.3U/mL,酯酶(BAEE)酶活为5954U/mL，相比突变前的菌株，酶活分别提高了3.3倍、2.7倍，解决了胰蛋白酶胞外酶活低的问题。应用该发明中的突变体生产胰蛋白酶，产量高、工艺简化、便于工业化应用。
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公开(公告)号：CN106893700A
公开(公告)日：2017-06-27
申请号：CN201710256871.3
申请日：2017-04-19
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/6427 , C07K2319/02 , C12N15/625 , C12N15/815 , C12Y304/21004
Abstract: 本发明公开了一种人工设计自活化前导肽序列提高胰蛋白酶酶活的方法，属于基因工程领域。本发明构建的毕赤酵母工程菌，表达N端融合人工自活化前导肽序列TPAPPSDDLGTFDDDDK的胰蛋白酶。本发明得到的酵母工程菌GS115‑Sedeif的胰蛋白酶酶活(即胰蛋白酶酰胺酶酶活)达156U·mL‑1，酯酶酶活为15015.8U·mL‑1(以BAEE为底物)。是改造前的菌株胰蛋白酶酶活的1.82倍和3.29倍。该发明解决了胰蛋白酶异源表达量低的关键问题。应用该发明中的重组菌株生产胰蛋白酶，具产量高、发酵工艺简化、便于工业化应用的优点。
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公开(公告)号：CN104312933B
公开(公告)日：2017-03-29
申请号：CN201410555749.2
申请日：2014-10-17
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种优化信号肽提高胰蛋白酶胞外分泌表达的方法，属于基因工程技术领域。本发明通过与胰蛋白酶融合表达8种毕赤酵母胞外分泌信号肽，甲醇诱导启动子(pAOX)在Pichia pastoris GS115染色体上表达重组胰蛋白酶。本发明的αmf信号肽与原始的α-factor信号肽相比，胰蛋白酶酶活提高了2.75倍，解决了胰蛋白酶胞外分泌量低的问题。应用本发明方法生产胰蛋白酶，产量高、工艺简化、便于工业化应用。
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公开(公告)号：CN104312933A
公开(公告)日：2015-01-28
申请号：CN201410555749.2
申请日：2014-10-17
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/6427 , C12N15/81 , C12Y304/21004
Abstract: 本发明公开了一种优化信号肽提高胰蛋白酶胞外分泌表达的方法，属于基因工程技术领域。本发明通过与胰蛋白酶融合表达8种毕赤酵母胞外分泌信号肽，甲醇诱导启动子(pAOX)在Pichia pastoris GS115染色体上表达重组胰蛋白酶。本发明的αmf信号肽与原始的α-factor信号肽相比，胰蛋白酶酶活提高了2.75倍，解决了胰蛋白酶胞外分泌量低的问题。应用本发明方法生产胰蛋白酶，产量高、工艺简化、便于工业化应用。
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