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公开(公告)号：CN112079904A
公开(公告)日：2020-12-15
申请号：CN202011000015.X
申请日：2020-09-22
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K14/11 , C12N15/62 , C12N15/866 , A61K39/145 , A61P31/16
Abstract: 本发明公开了一种重组的H7N9亚型禽流感病毒样颗粒及其制备方法和应用，基于重组杆状病毒昆虫细胞培养系统，分别构建了表达H7N9高致病性禽流感病毒HA蛋白、NA蛋白、M1蛋白的重组杆状病毒。将三株重组杆状病毒共感染悬浮的昆虫细胞，可收获到在细胞内自行组装的H7N9亚型禽流感病毒样颗粒。经超滤管与不同梯度浓度蔗糖浓缩纯化后，与佐剂混和乳化制备疫苗。制备的疫苗免疫鸡可诱导机体产生特异性抗体，具有免疫原性强、安全性好、遗传稳定性高等优点。以致死剂量的H7N9亚型高致病性禽流感病毒攻击后，能够提供完全的临床保护且显著抑制鸡的排毒。本发明为预防H7N9亚型禽流感病毒感染提供了一种新的方法，也为流感病毒新型疫苗的开发奠定了基础。
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公开(公告)号：CN111850175A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010806504.8
申请日：2020-08-12
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明提供了一种用于H1和H3亚型猪流感病毒检测与分型的双重荧光定量RT-PCR的引物、探针及试剂盒。所述引物和探针包括：(1)序列如SEQ ID NO.1-3所示的检测H1亚型猪流感病毒的引物和探针；(2)序列如SEQ ID NO.4-6所示的检测H3亚型猪流感病毒的引物和探针。本发明还提供了包括上述引物和探针的试剂盒。本发明用于H1和H3亚型猪流感病毒检测与分型，具有快速、特异性强、灵敏度高等特点，不仅可以在临床流行病学调查中对猪的鼻腔拭子和肺脏、气管等组织样品以及鸡胚尿囊液进行检测，而且也适用于病毒体内感染性实验的定量测定。
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公开(公告)号：CN109970851A
公开(公告)日：2019-07-05
申请号：CN201910257290.0
申请日：2019-04-01
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K16/10 , G01N33/569 , G01N33/558 , G01N33/52
Abstract: 本发明涉及一种CCV病毒M蛋白的单抗及其制备方法、免疫胶体金试纸条的制备方法，具体涉及CCV病毒M蛋白的单抗，包括CCV M蛋白特异单克隆抗体2H11、2G3。其制备方法；以分离纯化的CCV灭活病毒为免疫抗原，用单克隆抗体技术制备出CCV单抗；经western‑blot试验鉴定单抗针对M蛋白，再用重组酶ExnaseTM II技术对CCV病毒M蛋白的基因克隆进线性化的pCDNA3.1载体，转染293T细胞进行M蛋白表达，IFA试验验证，获得2株CCV病毒M蛋白特异单抗2H11、2G3。本发明还公开了犬冠状病毒胶体金检测试纸条的制备方法。本发明特异性强、敏感性高、操作简单、成本低，适用于临床及田间检测，用于CCV病原学诊断、流行病学调查和动物医院快速诊断。
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公开(公告)号：CN107449912B
公开(公告)日：2019-06-18
申请号：CN201710757257.5
申请日：2017-08-29
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K14/11 , G01N33/569
Abstract: 本发明提供了抗H7N9亚型禽流感病毒单克隆抗体抗原表位及其筛选方法和应用，属于免疫检测技术领域。所述筛选方法是将野生型H7N9亚型禽流感病毒液与具有中和特性的相应单克隆抗体混合孵育，接种至SPF鸡胚，得到血凝效价为阳性的尿囊液；将所述阳性尿囊液进行梯度稀释，再次与单克隆抗体混合孵育接种至SPF鸡胚中，选择血凝效价为阳性的尿囊液为抗原测定单克隆抗体的血凝抑制效价，当所述尿囊液测定的血凝抑制效价比野生型病毒测定的血凝抑制效价低8log2时，判定为H7N9亚型禽流感病毒突变逃逸株，测定其HA基因序列，确定单克隆抗体所识别的抗原表位。所述方法明确筛选出针对特定抗原表位，方法简单准确，筛选周期短。
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公开(公告)号：CN106479983B
公开(公告)日：2019-05-07
申请号：CN201610994452.5
申请日：2016-11-11
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体地涉及稳定表达人源TIGAR基因的MDCK细胞系。该细胞系是稳定表达人源TIGAR基因的MDCK细胞系TG‑418‑E5，其含有TIGAR编码基因序列，它的保藏号是CGMCC NO：12983。通过在MDCK细胞中稳定表达TIGAR基因，提高了细胞的抗凋亡能力，延长了重组细胞的存活时间。该方法不仅为研究MDCK的无血清全悬浮培养用于大规模生产细胞培养疫苗的应用奠定了基础，同时提高禽流感疫苗株的繁殖滴度节约了生产工艺成本。此外，TG‑418‑E5细胞系在抗禽流感病毒药物筛选、疫苗株筛选以及细胞培养疫苗的生产方面都展示出较好的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109207522A
公开(公告)日：2019-01-15
申请号：CN201810912585.2
申请日：2018-08-12
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/866 , C12N15/66
Abstract: 本发明属于疫苗制造技术领域。本发明公开了一种表达猪圆环病毒3型截短Cap基因的重组杆状病毒rBac-ΔCap，保藏号为CGMCC No.15691。本发明还公开了一种用于构建表达猪圆环病毒3型截短Cap基因的重组杆状病毒rBac-ΔCap的引物。本发明又公开了表达猪圆环病毒3型截短Cap基因的重组杆状病毒rBac-ΔCap的构建方法，包括以下步骤：1、构建包含PCV3全基因组的pSK-sPCV3；2、转移载体的构建；3、穿梭质粒的构建；4、重组杆状病毒的获得：将阳性穿梭质粒Bacmid-ΔCap转染Sf9细胞，获得表达猪圆环病毒3型截短Cap基因的重组杆状病毒rBac-ΔCap。本发明可以方便快捷的构建出表达PCV3截短Cap蛋白的重组杆状病毒，而且可以确定表达的截短Cap蛋白具有良好的生物学活性，免疫小鼠发现具有良好的免疫原性。
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公开(公告)号：CN104830811B
公开(公告)日：2018-01-09
申请号：CN201510307375.7
申请日：2015-06-05
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及H9N2亚型禽流感病毒NS1基因缺失减毒活疫苗候选株rTX‑NS1‑128构建方法及应用。所述H9N2亚型禽流感病毒NS1基因缺失减毒活疫苗候选株rTX‑NS1‑128，是以A/chicken/Taixing/10/2010TX株为母本，对NS1基因的长度进行缺失，使得NS1蛋白只保留如SEQ ID NO.15所示的128个氨基酸。该疫苗候选株仅能在气管中复制，不发生接触传播，安全性好。该疫苗候选株既可单独使用，成为H9亚型禽流感防控的有效工具，亦可与灭活疫苗联合使用，提供更为确实的免疫保护作用。将在H9亚型禽流感防控中发挥极为重要的作用。
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公开(公告)号：CN107449912A
公开(公告)日：2017-12-08
申请号：CN201710757257.5
申请日：2017-08-29
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/577
CPC classification number: G01N33/56983 , G01N33/577
Abstract: 本发明提供了抗H7N9亚型禽流感病毒单克隆抗体抗原表位及其筛选方法和应用，属于免疫检测技术领域。所述筛选方法是将野生型H7N9亚型禽流感病毒液与具有中和特性的相应单克隆抗体混合孵育，接种至SPF鸡胚，得到血凝效价为阳性的尿囊液；将所述阳性尿囊液进行梯度稀释，再次与单克隆抗体混合孵育接种至SPF鸡胚中，选择血凝效价为阳性的尿囊液为抗原测定单克隆抗体的血凝抑制效价，当所述尿囊液测定的血凝抑制效价比野生型病毒测定的血凝抑制效价低8log2时，判定为H7N9亚型禽流感病毒突变逃逸株，测定其HA基因序列，确定单克隆抗体所识别的抗原表位。所述方法明确筛选出针对特定抗原表位，方法简单准确，筛选周期短。
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公开(公告)号：CN106811549A
公开(公告)日：2017-06-09
申请号：CN201710094558.4
申请日：2017-02-21
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明提供了一种禽流感病毒NA亚型RT‑PCR单重检测引物组，以及禽流感病毒NA亚型RT‑PCR多重检测引物组与禽流感病毒NA亚型RT‑PCR多重检测试剂盒，其中禽流感病毒NA亚型RT‑PCR多重检测引物组包括3组禽流感病毒NA亚型RT‑PCR检测引物组，每组禽流感病毒NA亚型RT‑PCR检测引物组包括一对特异性引物对和一个荧光基团标记的探针。本发明建立的3个多重探针荧光定量组合RT‑PCR体系，每个体系中的各个成分互不干扰，且都能特异地检测出3个不同NA亚型。本发明只需要同时进行3个体系的荧光定量PCR，根据CT值就能直接判断出NA亚型，实验流程更加省时、方便，实验结果更加直观、可信。
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公开(公告)号：CN106497893A
公开(公告)日：2017-03-15
申请号：CN201610968279.1
申请日：2016-10-28
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/869 , A61K39/145 , A61P31/16 , C12R1/93
CPC classification number: C07K14/005 , A61K39/00 , C12N15/86 , C12N2710/16021 , C12N2710/16043 , C12N2760/16122 , C12N2760/16134
Abstract: 本发明属于分子生物学和生物技术领域的重组病毒载体疫苗，具体涉及一种表达H7N9亚型禽流感病毒嵌合型血凝素蛋白的重组火鸡疱疹病毒株rHMW及构建方法，该重组火鸡疱疹病毒株rHMW，其保藏号CGMCC NO.12984。该重组病毒可用于制备预防H7N9亚型禽流感病毒的疫苗。本发明对于家禽的传染病防控起到了显著作用，同时发挥了巨大的社会效益和经济效益。
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