一种用于挖掘新型耐药基因的高库容功能宏基因组文库的构建方法及应用

    公开(公告)号:CN116377600A

    公开(公告)日:2023-07-04

    申请号:CN202310149018.7

    申请日:2023-02-22

    Abstract: 本发明属于生物基因检测技术领域,公开了一种用于挖掘新型耐药基因的高库容功能宏基因组文库的构建方法及应用;针对插入片段钝化后的平末端与载体的平末端连接效率低问题,使用T4多聚核苷酸激酶;针对载体模板残留问题,使用DpnI限制性内切酶进行模板消化;针对载体自我连接问题,用小牛肠碱性磷酸酶(CIP)处理线性载体DNA。本发明方法所得功能基因组文库的平均插入片段大小为7kbp,范围为5至8kbp,总文库大小为10.25Gbp。插入频率范围89%至96%,库容比报道的使用pZE21MCS表达载体的任何功能宏基因组文库大近1个数量级。

    泽泻醇A-24-醋酸酯在提高MRSA对β-内酰胺类抗生素敏感性方面的应用

    公开(公告)号:CN115350197B

    公开(公告)日:2023-06-13

    申请号:CN202210782586.6

    申请日:2022-07-05

    Abstract: 本发明涉及泽泻醇A‑24‑醋酸酯的新用途,具体涉及泽泻醇A‑24‑醋酸酯在提高MRSA对β‑内酰胺类抗生素敏感性方面的应用。本发明提供了泽泻醇A‑24‑醋酸酯在制备提高MRSA对β‑内酰胺类抗生素敏感性方面的增效剂的应用。研究发现泽泻醇A‑24‑醋酸酯与β‑内酰胺类药物(苯唑西林、头孢西丁)在体内和体外均具有很好的协同效果,泽泻醇A‑24‑醋酸酯或β‑内酰胺类抗生素单独作用对MRSA菌株的杀菌效果微乎其微,但两者联用杀菌效果显著提高。泽泻醇A‑24‑醋酸酯与现有抗菌药配伍从而提高其抗菌效果,使其恢复对多重耐药病原菌的敏感性,对临床实现抗生素替代和解决细菌耐药性具有重要意义。

    一种基于细菌的CUT&Tag测序建库方法

    公开(公告)号:CN115161388A

    公开(公告)日:2022-10-11

    申请号:CN202210574725.6

    申请日:2022-05-24

    Abstract: 本发明公开了一种基于细菌的CUT&Tag测序建库方法,包括以下操作步骤:步骤S1,载体构建,将荧光基因克隆到中拷贝质粒中,设计酶切位点利用一步克隆法进行酶切,从而构建一个含有荧光基因、HIS标签、目的蛋白所对应基因序列的质粒载体,并将该质粒转化到受测菌株的感受态细胞;步骤S2,利用CUT&Tag技术起始样品处理;步骤S3,利用CUT&Tag技术试剂盒进行试验。本技术转座酶原位激活产生片段,分辨率高,背景信号低,信噪比高;步骤简单,省去了超声破碎和免疫共沉淀,节省了时间;将转座体产生的片段与测序接头整合,进行了pcr富集;程序高度灵敏,需要的起始材料量较少。

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