公开(公告)号：CN113215141A

公开(公告)日：2021-08-06

申请号：CN202110204762.3

申请日：2021-02-23

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 连新磊 ,  冯晓茵 ,  李梦圆 ,  孙坚 ,  刘雅红

IPC: C12N15/10 ,  C12Q1/6806 ,  C12Q1/6869 ,  C40B50/06

Abstract: 本发明公开了细菌HI‑C基因组及质粒构象捕获方法，包括以下捕获步骤：细菌培养、交联反应、验证样品完整性、细菌裂解、消化染色质、生物素填补、连接反应、反向交联、文库提取、去除生物素、酚氯仿提取DNA、二代建库。通过甲醛处理将DNA与蛋白质交联在一起从而固定DNA的构象，并进行酶切、生物素引入、酶连和提取，然后对处理好的核酸进行文库构建和高通量测序，最终通过对测序数据进行分析即可揭示细菌染色质片段之间及其与质粒间的交互信息，可以应用于基因组组装、基因表达调控研究等。

公开(公告)号：CN115161388A

公开(公告)日：2022-10-11

申请号：CN202210574725.6

申请日：2022-05-24

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 连新磊 ,  温嘉瑜 ,  李梦圆 ,  廖晓萍 ,  孙坚 ,  刘雅红

IPC: C12Q1/6869 ,  C12N15/10 ,  C40B50/06

Abstract: 本发明公开了一种基于细菌的CUT&Tag测序建库方法，包括以下操作步骤：步骤S1，载体构建，将荧光基因克隆到中拷贝质粒中，设计酶切位点利用一步克隆法进行酶切，从而构建一个含有荧光基因、HIS标签、目的蛋白所对应基因序列的质粒载体，并将该质粒转化到受测菌株的感受态细胞；步骤S2，利用CUT&Tag技术起始样品处理；步骤S3，利用CUT&Tag技术试剂盒进行试验。本技术转座酶原位激活产生片段，分辨率高，背景信号低，信噪比高；步骤简单，省去了超声破碎和免疫共沉淀，节省了时间；将转座体产生的片段与测序接头整合，进行了pcr富集；程序高度灵敏，需要的起始材料量较少。