一种TRV载体介导病毒诱导梅花花芽基因沉默的方法

    公开(公告)号:CN116904499A

    公开(公告)日:2023-10-20

    申请号:CN202310973152.9

    申请日:2023-08-04

    Abstract: 本发明属于基因工程技术领域,具体涉及一种TRV载体介导病毒诱导基因沉默的方法,采用含有特定目标基因片段的TRV2载体与TRV1载体分别转化到农杆菌感受态中,并将含有这两种载体的单克隆菌体混合,利用侵染液重悬得到混合侵染液,在抽真空状态下侵染梅花花芽,实现对梅花花芽目标基因的沉默。本发明深入探究了提高目标基因沉默效率的关键因素,筛选出了侵染梅花花芽时TRV1和TRV2最佳的混合比例、含有菌体的侵染液的OD600值、侵染时间以及侵染后花芽的培养温度。实施例结果表明,利用本发明提供的方法对梅花花芽进行侵染,可使梅花花芽的目标基因沉默40%以上。

    一种腺毛委陵菜的组织培养方法

    公开(公告)号:CN114711145A

    公开(公告)日:2022-07-08

    申请号:CN202210505299.0

    申请日:2022-05-10

    Abstract: 本发明提供一种腺毛委陵菜的组织培养方法,其特征在于,包括如下步骤:以幼嫩叶片为外植体,表面灭菌后接种于愈伤组织诱导培养基诱导出愈伤组织,诱导出的愈伤组织接种于不定芽分化培养基分化出不定芽,其中,所述的愈伤组织诱导培养基为MS+NAA0.1~05mg/L+TDZ0.1~1.0mg/L,所述的不定芽分化培养基为MS+NAA0.5mg/L+TDZ0.1~1.0mg/L。本发明首次在委陵菜属植物的组织培养的愈伤组织诱导阶段应用NAA+TDZ的激素组合,该诱导方法能使腺毛委陵菜叶片愈伤组织诱导率达到90.00%以上,且愈伤组织生长状态良好,培养后期表面可见明显芽点。使用本发明的愈伤组织分化培养基,可使分化率达到46.67%,且不定芽生长健壮,能够为腺毛委陵菜组培成功奠定良好基础。

    百合叶肉原生质体的制备方法

    公开(公告)号:CN109136167B

    公开(公告)日:2022-03-08

    申请号:CN201810762876.8

    申请日:2018-07-12

    Abstract: 本发明公开了百合叶肉原生质体的制备方法,包括步骤:(1)取带有未开放花蕾的百合植株,进行暗处理;(2)取植株的叶片,清洗、消毒;(3)向叶肉材料中加入酶解溶液,于暗处真空抽提,然后暗处静置酶解数小时,得到含有叶肉原生质体的酶解液;(4)所得酶解液用W5溶液稀释,网筛过滤,所得滤液经低速离心,弃上清,用W5溶液重悬原生质体沉淀,低速离心,弃上清,重复洗一次;用MMG溶液重悬原生质体沉淀。本发明克服了百合叶肉原生质体分离效率低的问题,有效建立了百合叶肉原生质体制备的方法。

    一种紫薇原生质体的制备方法

    公开(公告)号:CN113652390A

    公开(公告)日:2021-11-16

    申请号:CN202111108086.6

    申请日:2021-09-22

    Abstract: 本发明涉及植物原生质体技术领域,具体涉及一种紫薇原生质体的制备方法。本发明针对紫薇提供原生质体的制备方法,该方法以紫薇叶片为材料,将紫薇叶片去除下表皮,将去除下表皮的叶片在酶解液中酶解处理,得到酶解溶液,将所述酶解溶液经分离得到叶肉酶解产物,经洗涤后分离得到叶肉原生质体。该方法能够高效地从紫薇叶片中提取获得原生质体,制备的原生质体具有较高的完整性和活性,为紫薇的分子育种提供了基础。

    一种高效诱导多倍体花粉培育芍药多倍体的方法

    公开(公告)号:CN112075339A

    公开(公告)日:2020-12-15

    申请号:CN202011061629.9

    申请日:2020-09-30

    Abstract: 本发明提供了一种高效诱导多倍体花粉培育芍药多倍体的方法,包括如下步骤:1)确定诱导时期;2)秋水仙素溶液配置;3)注射秋水仙素溶液;4)花粉采收;5)多倍体花粉的鉴定;6)杂交授粉;7)种子采收与播种;8)多倍体子代鉴定。本发明方法简单易行,多倍体花粉诱导率高,达47.4%,与现有方法相比,本发明不需组培及无菌的操作环境,成本低,直接可获得多倍体种子,有效避免了多倍体离体诱导等技术过程中容易污染、操作条件严格、产生嵌合体和过程繁琐等问题,便于推广,可以作为芍药多倍体新种质创造的一种重要手段,应用前景十分可观。

    一种快速鉴定真梅/杏梅品系的分子检测方法

    公开(公告)号:CN110698550A

    公开(公告)日:2020-01-17

    申请号:CN201911096082.3

    申请日:2019-11-11

    Abstract: 本发明涉及植物基因工程与分子生物学技术领域,具体涉及一种快速鉴定真梅/杏梅品系的分子检测方法。本发明提供梅花PmEIL蛋白,其序列如SEQ ID NO.1所示。PmEIL蛋白参与梅花响应季节性气候变化,在真梅和杏梅品系中受温度、日照等季节性气候变化的调控方式存在明显差异,可用于鉴定真梅/杏梅品系,实现在梅花的幼苗期快速、准确地鉴定梅花品系,缩短了育种周期,极大地减少了育种工作量。本发明还提供与PmEIL基因相关且与梅花茎色相关的SNP分子标记,为梅花茎色性状的鉴定和真梅/杏梅品系的鉴定提供了基础和分子工具。

    TRV-based病毒诱导的报春花属植物基因沉默的方法

    公开(公告)号:CN110499325A

    公开(公告)日:2019-11-26

    申请号:CN201910630368.9

    申请日:2019-07-12

    Abstract: 本发明提供一种TRV-based病毒诱导的报春花属植物基因沉默的方法。包括:A、根据报春花属植物目标基因,设计引物并扩增出该目标基因的DNA片段;B、将DNA片段连接到pTRV2载体上,得到重组载体;C、将pTRV1、重组载体分别转化农杆菌,所得转化子共同侵染植株。本发明首次证明TRV可成功应用于小报春基因沉默和功能验证,为报春花属植物的基因功能验证奠定了基础。本发明方法简单、研究周期短、无需基因全长和转化体系,获得目的表型效率高,可实现大量基因的快速功能验证。与现有的VIGS体系相比,本发明表型持续时间长,且在植株的不同部位均出现表型变化,对报春花属异型自交不亲和的遗传学研究具有重要意义。

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