包载miRNA-204-5p的外泌体及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN109837306A

    公开(公告)日:2019-06-04

    申请号:CN201910211056.4

    申请日:2019-03-20

    Abstract: 本发明公开了一种包载miRNA-204-5p的外泌体及其制备方法和应用,涉及生物医药技术领域,通过构建稳定过表达抑癌基因miRNA-204-5p的稳转株细胞,分离及富集包载miRNA-204-5p的外泌体,以外泌体作为miRNA-204-5p的药物传递系统,发挥其对肿瘤的治疗作用。本发明提供的包载miRNA-204-5p的外泌体,显著提高与肿瘤细胞的相容性,能够高效将miRNA-204-5p释放进入肿瘤细胞内,增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,显著抑制肿瘤细胞的增殖。通过模拟体内情况,优选操作过程中使用的试剂种类、质量或者浓度等参数,在细胞内将miRNA-204-5p自然装载到外泌体中,显著提高miRNA-204-5p与外泌体在细胞内的包载效率,降低包载过程中的风险,制备的外泌体更具有稳定性、安全性和高效性。

    一种利用纤维素固定化CBD-EndoS融合酶的方法

    公开(公告)号:CN108623696A

    公开(公告)日:2018-10-09

    申请号:CN201810358946.3

    申请日:2018-04-20

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种利用纤维素固定化CBD-EndoS融合酶的方法,属于固定化酶技术领域。本发明利用CBD-EndoS的CBD标签将融合蛋白特异性固定于纤维素微球上,不同于传统固定化酶“先纯化后固定”,实现了一步固定纯化,将粗酶中的CBD-EndoS蛋白固定在纤维素载体上,操作简单,方便快速,大大简化了固定化步骤。应用本发明的方法制备的固定化酶反复使用5次后,酶活仍保持在初始酶活88%以上;固定化酶于4℃条件下保存30天后,酶活仍保持在初始酶活90%以上。本发明有望实现工业化,有助于EndoS酶在抗体修饰研究领域的广泛应用。

    一种索马鲁肽融合蛋白及其在发酵生产索马鲁肽前体中的应用

    公开(公告)号:CN118271456A

    公开(公告)日:2024-07-02

    申请号:CN202410268282.7

    申请日:2024-03-09

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种索马鲁肽融合蛋白及其在发酵生产索马鲁肽前体中的应用。本发明将索马鲁肽片段与融合蛋白标签、酶切位点融合串联表达,得到融合蛋白为:融合蛋白标签‑DDDDK‑GLP‑1(11‑37),即蛋白序列为融合蛋白标签序列、酶切位点序列和多肽序列。所述融合蛋白标签为CBD标签(纤维素结合域)、GST(谷胱甘肽巯基转移酶)标签或MBP(麦芽糖结合蛋白)标签。将该融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)感受态中异源表达,构建工程菌株,后利用摇瓶进行发酵表达后进行重组工程菌株高密度发酵,极大的提高了菌体发酵密度,提高了目的蛋白表达量,具有良好的产业应用前景。融合蛋白进一步可以被商业化的肠激酶成功识别并切割释放出索马鲁肽前体。

    用于检测肿瘤标志物PD-L1的高灵敏度量子点探针、制备方法及应用

    公开(公告)号:CN113777295B

    公开(公告)日:2024-03-19

    申请号:CN202111083304.5

    申请日:2021-09-15

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种检测细胞表面肿瘤标志物PD‑L1的量子点荧光探针、制备方法及应用,该探针荧光强度高,提高了相关检测的灵敏度。包括步骤:1)识别PD‑L1的纳米抗体重组蛋白的设计、识别PD‑L1的纳米抗体重组蛋白的原核表达和纯化;2)含有生物素基团多肽的制备;3)识别PD‑L1的纳米抗体重组蛋白与生物素化多肽的体外酶法融合;生物素化的识别PD‑L1的纳米抗体重组蛋白的纯化;4)生物素化的识别PD‑L1的纳米抗体重组蛋白与链霉亲和素标记量子点的偶联探针制备。本发明的探针荧光强度高,结合流式细胞术、免疫荧光、酶联免疫吸附技术能有效检测细胞表面肿瘤标志物PD‑L1的表达,方法简便,检测灵敏度高。

    一种募集HBV抗体用于肿瘤免疫治疗的方法和应用

    公开(公告)号:CN116813792A

    公开(公告)日:2023-09-29

    申请号:CN202310247302.8

    申请日:2023-03-15

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种募集HBV抗体用于肿瘤免疫治疗的方法。所述抗体耦合物或抗体融合蛋白由纳米抗体与衍生于乙肝表面抗原(HBsAg)的多肽或片段相连所得,具备两种功能域,分别行使靶向肿瘤特异性抗原或相关性抗原和募集相应特异性HBV抗体的功能。本发明通过温和简便的方法将募集HBV特定抗体的抗原多肽或片段修饰在抗体分子上,所获得的抗体耦合物或融合蛋白不仅保留了原有抗体的优良亲和水平,还可以招募相应疫苗预免疫后所产生的特异性抗HBV抗体至肿瘤细胞上,通过抗体补体依赖的细胞毒性作用(CDC)对靶细胞进行杀伤。

    一种半抗原多价修饰的天然多糖偶联物及其在免疫治疗的应用

    公开(公告)号:CN113304258A

    公开(公告)日:2021-08-27

    申请号:CN202110161043.8

    申请日:2021-02-05

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种半抗原多价修饰的天然多糖及其在免疫治疗的应用,其中所述半抗原结构包括α‑Gal、Rha和DNP,所述天然多糖为对包括肿瘤、细菌、病毒在内的细胞具有靶向性的天然多糖,包括透明质酸。所述天然多糖如透明质酸上至少化学偶联修饰两个半抗原结构如DNP,所得的DNP多价修饰的透明质酸偶联物能够靶向高表达CD44的癌细胞,同时募集体内天然存在的抗DNP抗体,然后通过存在于免疫效应细胞或蛋白质上的Fc受体识别抗体的Fc结构域,激活先天免疫反应消除靶细胞,例如补体依赖性细胞毒性(CDC),抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和抗体依赖性吞噬作用(ADCP)。

    一种利用纤维素固定化CBD-EndoS融合酶的方法

    公开(公告)号:CN108623696B

    公开(公告)日:2021-05-28

    申请号:CN201810358946.3

    申请日:2018-04-20

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种利用纤维素固定化CBD‑EndoS融合酶的方法,属于固定化酶技术领域。本发明利用CBD‑EndoS的CBD标签将融合蛋白特异性固定于纤维素微球上,不同于传统固定化酶“先纯化后固定”,实现了一步固定纯化,将粗酶中的CBD‑EndoS蛋白固定在纤维素载体上,操作简单,方便快速,大大简化了固定化步骤。应用本发明的方法制备的固定化酶反复使用5次后,酶活仍保持在初始酶活88%以上;固定化酶于4℃条件下保存30天后,酶活仍保持在初始酶活90%以上。本发明有望实现工业化,有助于EndoS酶在抗体修饰研究领域的广泛应用。

    一种基于靶向配基细胞偶联技术的抗肿瘤免疫细胞及其制备方法与应用

    公开(公告)号:CN112675202A

    公开(公告)日:2021-04-20

    申请号:CN202011578778.2

    申请日:2020-12-28

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种基于靶向配基细胞偶联技术的抗肿瘤免疫细胞制备及其应用,将修饰有生物正交反应基团的非天然糖添加到免疫细胞如NK细胞的培养基中,以获得修饰有生物正交反应基团的免疫细胞;然后将一端为可与上述生物正交反应基团匹配产生连接反应的生物正交反应配对基团的靶向配基如纳米抗体在生理条件下通过生物正交反应修饰到免疫细胞表面,连接方式为转肽酶SrtA介导的化学酶法,靶向配基具有高特异性识别并结合到肿瘤细胞表面高表达受体的特性。本发明公开的靶向配基修饰的免疫细胞可特异性的靶向结合于癌细胞,进而修饰后的免疫细胞产生分泌大量的细胞因子使癌细胞表面发生穿膜孔洞或吞噬裂解癌细胞的效应,具有特异性杀伤癌细胞的作用。

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