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公开(公告)号：CN111518777A
公开(公告)日：2020-08-11
申请号：CN202010426012.6
申请日：2020-05-19
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/34 , C12N15/866 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种表达血清4型禽腺病毒纤突蛋白F1的重组杆状病毒的构建方法，包括以下步骤：（1）构建FAdV‑4‑F1基因重组杆状病毒表达载体；（2）表达重组FAdV‑4蛋白的杆状病毒包装和传代；（3）将携带有FAdV‑4‑F1基因的杆状病毒基因组转染进sf9细胞，27℃培养箱中培养5‑7天，观察细胞病变情况；当细胞病变达到70%时收集细胞裂解液，离心去沉淀，作为种毒保存；进行病毒的传代，传至第3代时，作为种毒扩大培养。本发明所述的血清4型禽腺病毒纤突蛋白F1利用该杆状病毒载体表达，且表达水平高，含有His标签，可以方便后期的纯化步骤，可以制备成禽腺病毒4型亚单位疫苗，也可以作为建立FAdV‑4酶联免疫吸附试剂制备研发中的包被用抗原。
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公开(公告)号：CN111217916A
公开(公告)日：2020-06-02
申请号：CN202010039900.2
申请日：2020-01-15
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/866 , C12N7/01 , A61K39/295 , A61K39/215 , A61K39/225 , A61K39/15 , A61P31/14
Abstract: 本发明涉及猪三种致腹泻病毒中和抗原表位融合蛋白重构体及其制备方法和应用。所述猪三种致腹泻病毒PEDV、TGEV、PoRV的中和抗原表位融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。编码该中和抗原表位融合蛋白的基因序列如SEQ ID NO.1所示。本发明分别选取PEDV、TGEV、PoRV的主要中和抗原表位基因并进行拼接，而后通过重组杆状病毒真核表达系统对串联基因进行融合蛋白表达。将表达串联基因融合蛋白的重组病毒通过腹腔注射的方式免疫小鼠，可诱导机体产生免疫应答，具有较强的免疫原性。本发明为预防PEDV、TGEV、PoRV感染提供了一种新的方法，也为猪腹泻病毒新型疫苗的开发奠定了基础。
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公开(公告)号：CN110684736A
公开(公告)日：2020-01-14
申请号：CN201910754620.7
申请日：2019-08-15
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/10 , C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/90
Abstract: 本发明涉及到一种基于CRISPR-Cas9编辑技术的敲除鸡Shp-2基因的细胞系及其构建方法，本发明的原理和最核心的关键技术是科学合理的构建了靶向鸡Shp-2基因的sgRNA，然后将sgRNA克隆至带有Cas9基因的lentiCRISPR v2质粒并将质粒转染至细胞中，利用CRISPR-Cas9系统达到基因沉默，通过药物筛选和亚克隆的方法最后获得阳性单克隆细胞株，从而获得鸡源Shp-2敲除的细胞系。本发明目的是构建一种基于CRISPR-Cas9靶向敲除鸡Shp-2基因的方法，及其靶向鸡Shp-2基因的sgRNA，以期获得鸡源Shp-2基因敲除的细胞模型，用于相关疾病的研究。本发明基于CRISPR-Cas9靶向敲除鸡Shp-2基因的细胞系构建在相关领域未见报道，本发明将填补国内外相关技术的空白，具有较大的应用研究价值。
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公开(公告)号：CN110483637A
公开(公告)日：2019-11-22
申请号：CN201910659588.4
申请日：2019-07-22
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K16/10 , C07K16/40 , C12N15/13 , A61K39/42 , A61P31/16 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种抗禽流感病毒神经氨酸酶N2单克隆抗体、编码基因及其应用，属于生物医学技术领域。抗禽流感病毒神经氨酸酶N2单克隆抗体特异性地识别禽流感病毒神经氨酸酶蛋白N2，具有抑制神经氨酸酶活性和中和病毒能力。本发明还克隆了抗禽流感病毒神经氨酸酶N2单克隆抗体的轻、重链可变区基因序列和氨基酸序列，确认了基因序列和氨基酸序列的唯一性。本发明涉及的单克隆抗体、可变区基因及氨基酸序列可用于N2的禽流感病毒的诊断和治疗药物研发等，具有广泛的临床应用价值。
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公开(公告)号：CN110423785A
公开(公告)日：2019-11-08
申请号：CN201910455249.4
申请日：2019-05-29
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及到一种利用CRISPR-Cas9特异性靶向获得敲除鸡KPNA3基因的细胞系及其构建方法，本发明的原理和最核心的关键技术是科学合理的构建了靶向鸡KPNA3基因的sgRNA，之后转染带有sgRNA和Cas9基因的lentiCRISPR v2质粒，利用CRISPR-Cas9系统达到基因沉默，通过药物筛选杀死阴性细胞，随后通过亚克隆的方法获得单个细胞株，从而获得鸡源KPNA3敲除的细胞系。通过本发明，本发明基于CRISPR-Cas9靶向敲除鸡KPNA3基因的细胞系构建在相关领域未见报道，本发明将填补国内外相关技术的空白，具有较大的应用研究价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109856399A
公开(公告)日：2019-06-07
申请号：CN201910220035.9
申请日：2019-03-22
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/574 , G01N33/68 , G01N33/577 , G01N33/558
Abstract: 本发明涉及一种J亚群禽白血病病毒抗体快速检测试纸条、制备方法及其应用，利用ALV-J囊膜蛋白gp85特异性表位作为抗原来检测血清中ALV-J特异性抗体。将特异性多肽表位作为抗原喷绘于NC膜，制作试纸条的检测线，选择小鼠抗鸡IgG单抗作为金标抗体，将制备的胶体金-抗体偶联复合物，喷涂于试纸条的金标垫上。该试纸条可以检测出人工感染ALV-J病毒鸡血清中的抗体。该试纸条可用于评价鸡群是否存在ALV-J感染。试纸条制备简便，成本低廉，应用广泛，经济效益高。
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公开(公告)号：CN109836478A
公开(公告)日：2019-06-04
申请号：CN201910208025.3
申请日：2019-03-19
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K14/01 , C07K16/08 , C07K16/06 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了非洲猪瘟病毒P11.5蛋白特异性多克隆抗体的制备方法及应用，该方法利用P11.5多肽表位免疫实验动物如小鼠、兔等制备特异性多克隆抗体。该方法抗原纯度高，制备的抗体特异性强，亲和力高，使用的抗原量少，操作简便。所述的多克隆抗体的制备方法包括ASFV P11.5的特异性抗原表位的选择，多肽抗原的合成，动物免疫，抗体的测定等步骤。与常规方法比较，具有简便快速，抗原纯度高，制备的抗体特异性强，抗原使用量少的优点。该多克隆抗体可以用于非洲猪瘟病毒P11.5蛋白检测，为我国非洲猪瘟的防控提供重要的技术方法。
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公开(公告)号：CN109295012A
公开(公告)日：2019-02-01
申请号：CN201811212808.0
申请日：2018-10-18
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种构建表达ALV-K囊膜蛋白的重组病毒方法，具体为：设计PCR扩增ALV-J传染性克隆线性化表达载体引物以及PCR扩增ALV-K-env基因引物序列；PCR扩增ALV-K囊膜蛋白基因片段和ALV-J传染性克隆线性化载体，构建重组传染性克隆质粒，并将重组质粒转染DF-1细胞拯救出表达ALV-K囊膜蛋白的重组病毒。本发明利用ALV-J传染性克隆，构建了高效复制及表达ALV-K囊膜蛋白的重组病毒。这一重组病毒的获得不仅为研究ALV-K囊膜蛋白功能受体及其致病性打下了基础，更能够为临床检测ALV-K的中和抗体提供靶向病毒。
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公开(公告)号：CN108872570A
公开(公告)日：2018-11-23
申请号：CN201811100860.7
申请日：2018-09-20
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/543 , G01N33/569 , G01N33/577
Abstract: 本发明涉及基于Fiber1蛋白的FAdV‑4病毒检测用杂交瘤细胞株、抗体及试剂盒，属于生物技术检测技术领域。本发明提供的基于Fiber1蛋白的FAdV‑4病毒检测用杂交瘤细胞株，包括杂交瘤细胞株FAdV‑4‑F1‑3B5和杂交瘤细胞株FAdV‑4‑F1‑6H9。本发明所述杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体能够实现FAdV‑4病毒的双抗夹心高效检测，特异性强且灵敏度高，适用于临床样本中微量抗原的检测。
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公开(公告)号：CN107607717A
公开(公告)日：2018-01-19
申请号：CN201710669646.2
申请日：2017-08-08
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/543 , G01N33/535 , C07K14/075 , C12N15/70
Abstract: 本发明公开了一种基于F2蛋白的检测血清4型禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒，包括包被有纤突蛋白基因F2表达产物的ELISA酶标板，阳性阴性对照，HRP标记的兔抗鸡二抗，样品稀释液、显色液以及洗涤液。本发明建立的FAdV-4抗体的间接ELISA试剂盒能特异性的检测出FAdV-4抗体，而与抗流感病毒血清(AIV)、抗马立克病毒血清(MDV)、抗新城疫病毒血清(NDV)、抗禽网状内皮组织增生症病毒血清(REV)以及SPF鸡血清不反应(图6)。因此，该试剂盒具有良好FAdV-4的特异性，能用于FAdV-4感染及免疫状况流行病学调查。
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