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公开(公告)号：CN107723313A
公开(公告)日：2018-02-23
申请号：CN201711031012.0
申请日：2017-10-30
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/89
CPC classification number: C12N15/89
Abstract: 本发明公开了一种外源物质导入鸡胚的方法，属于生物技术领域，具体包括如下步骤：（1）对孵育48-58h的13-17 HH早期胚蛋在无菌条件下开口，找到胚胎位置，剥去胚蛋外壳膜，露出胚胎血管；（2）将需要导入的外源物质注入到玻璃注射针中，通过显微注射仪注射到鸡胚血管中；（3）注射后加入青链霉素至注射部位，然后使用医用胶带封口。本发明旨在鸡胚早期（13-17 HH）通过血管注射导入外源物质，为鸡胚注射的广泛应用奠定基础。本方法适用于鸡胚外源基因或细胞导入，转基因鸡和嵌合体制备，操作简便快速，外源物质导入效率高。
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公开(公告)号：CN106834460A
公开(公告)日：2017-06-13
申请号：CN201710049896.6
申请日：2017-01-23
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/6888 , C12Q1/686 , C12Q2600/124 , C12Q2565/125
Abstract: 本发明公开了一种新的鸡胚蛋性别快速鉴定方法：种蛋孵化至16、17或18日龄，通过1ml注射器于胚蛋尖端无菌获取尿囊液（10μL），取样后石蜡封口进行正常孵化；以取得的尿囊液为模板，设计CDH‑W特异性引物进行PCR扩增，通过凝胶电泳检测扩增产物并进行性别鉴定：雄性扩增为双带（600bp和450bp），雌性为单带（450bp）；正常孵化出雏后统计孵化率和死亡率并与对照组进行生物统计学分析；对比性别鉴定的结果和出雏后仔鸡的剖检结果，进行关联分析，统计性别鉴定的准确率（准确率达99%，视为100%有效）。
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公开(公告)号：CN105821116A
公开(公告)日：2016-08-03
申请号：CN201610237236.6
申请日：2016-04-15
Applicant: 扬州大学
CPC classification number: C12Q1/66 , C12Q1/44 , G01N33/68 , G01N2333/47
Abstract: 本发明公开了一种应用CRISPR/Cas9技术对绵羊MSTN基因进行定向敲除，并验证其对骨骼肌卫星细胞分化影响效果的方法，具体内容如下：(1)目的基因克隆；(2)gRNA设计及合成；(3)CRISPR/Cas9基因敲除载体构建；(4)CRISPR/Cas9基因敲除载体外源活性检测；(5)CRISPR/Cas9基因敲除载体内源活性检测；(6)CRISPR/Cas9基因敲除载体敲除效果检测。本发明的优越性在于：1、实验周期较短速；2、方法简单易行，可重复性强，在普通实验室即可进行；3、运用该方法构建的活性载体，毒副作用小，可用于转基因动物的制备与生产；4、该方法非特异剪切较少，显著提高了基因靶向敲除效率高。5、该方法适用性高。
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公开(公告)号：CN104762265A
公开(公告)日：2015-07-08
申请号：CN201510195770.0
申请日：2015-04-22
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种获得山羊诱导性多能干细胞的新方法：本方法首先从山羊睾丸组织、皮肤组织和小肠组织中提取总RNA，反转录获得cDNA片段，并以此为模版克隆获得山羊的Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc多能性转录因子的编码序列。利用胰酶消化法获得山羊及小鼠的胎儿成纤维细胞，并制备饲养层细胞和配制细胞培养液。利用体外转录试验获得的各多能性转录因子的mRNA，经脂质体2000介导，转染山羊胎儿成纤维细胞，以制备山羊iPS细胞。克隆扁平、致密、核质比大、克隆边界清晰和折光性强的细胞集落判定为山羊iPS细胞集落。采用单克隆挑取，分别用胰酶消化，单独接种至新的接种有饲养层的培养孔板中继续培养，以获得山羊iPS细胞系。
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公开(公告)号：CN104745527A
公开(公告)日：2015-07-01
申请号：CN201510193606.6
申请日：2015-04-22
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/073
Abstract: 本发明公开了一种新的快速鸡胚盘的分离方法：首先将鸡胚钝端向上握在手中，用镊子尖头轻轻在受精蛋中部钻出一个小孔后，将镊子一端插入小孔，沿着赤道线方向，依次用镊子夹碎蛋壳，延赤道线分离蛋壳一圈后，轻轻的剥离钝端蛋壳，在此过程中应尽量保持鸡胚水平，防止卵黄随蛋清流出；剥离蛋壳后，用镊子将蛋清从卵黄中分离；使用镊子的侧面拨动卵黄，寻找胚盘；找到胚盘后，尽量将胚盘拨到正中央，用剪刀沿胚盘四周呈正方形剪开，此时，使用镊子夹住将含有胚盘的正方形卵黄膜一角，沿水平方向轻轻拉出来，将此卵黄膜放入37℃的PBS的培养皿中，轻轻晃动培养皿,使卵黄和卵黄膜从胚盘上脱离下来，从而获得了完整的胚盘。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN119061119A
公开(公告)日：2024-12-03
申请号：CN202411227127.7
申请日：2024-09-03
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6809
Abstract: 本发明公开了一种筛选和研究调节鸡性别决定和分化关键因素功能的方法，通过构建E0‑E18.5的转录组文库，进一步分析性别决定和分化的关键因素，以期深入揭示性别决定的复杂机制。从转录水平上系统的阐述鸡性别决定过程中全基因组水平上的表达和转录情况，并结合小分子激活剂和抑制剂处理E18.5d性腺，通过观察性腺组织切片的形态学变化，qRT‑PCR检测性别相关基因的表达，ELISA检测性腺的性激素分泌变化，论证相关因素对于性别控制的影响，为鸡的性别决定机制的相关研究提供有力的参考，也为后续进一步验证能量代谢和表观遗传修饰在鸡性别决定和分化过程中的功能奠定基础。
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公开(公告)号：CN118979088A
公开(公告)日：2024-11-19
申请号：CN202410927510.7
申请日：2024-07-11
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种筛选鸡原始生殖细胞发生过程中泛素化修饰靶蛋白的方法，包括以下步骤：提取蛋白并进行胰酶消化；对胰酶消化中得到的肽段进行亲和富集；通过LC‑MS/MS分析亲和富集得到的修饰肽段并进行数据库搜索；样品重复性检验和蛋白差异修饰分析；泛素化功能及泛素化修饰靶点分析。本发明能够高效筛选鸡PGCs发生过程中泛素化修饰靶蛋白；方法简便高效，成本低廉；为研究鸡PGCs发生过程中泛素化的调控机制提供研究思路和理论基础，以解决体外获取鸡PGCs数量不足的问题，为家禽PGCs高效应用作铺垫；具有推广生产潜能和经济效益。
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公开(公告)号：CN116855444A
公开(公告)日：2023-10-10
申请号：CN202310819378.3
申请日：2023-07-06
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种鸡原始生殖细胞单克隆细胞系建立的方法，属于畜牧学和生物技术领域；通过自制简易口吸管，用FAcs培养基对PGCs进行稀释，用口吸管分选单个PGCs，在5%CO2、饱和湿度的37℃培养箱中进行培养，每三天换一次培养液，建立PGCs的单克隆细胞系；本发明提供的方法可以在普通实验室高效稳定建立鸡PGCs单克隆细胞系，且不需要复杂昂贵的仪器，分选和建系效率高，为研究鸡PGCs生物学特性提供了一种新的途径，为家禽的良种扩繁、基因修饰及修饰后筛选、家禽分子设计育种和种质资源冷冻保存等提供了新的方法、奠定了实验基础。
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公开(公告)号：CN116584478A
公开(公告)日：2023-08-15
申请号：CN202310464169.1
申请日：2023-04-26
Applicant: 扬州大学
IPC: A01N1/02
Abstract: 本发明涉及一种含羟乙基淀粉HES的临床用CEF冷冻保存液及其制备方法，包括以下步骤：（1）准备原料；冷冻保存液以每1000mL体积计，准备的原料包括DMSO 50 mL、6%羟乙基淀粉40ml、胎牛血清400mL，余量为F12/DMEM高糖培养基；（2）胎牛血清、F12/DMEM高糖培养基混合均匀；（3）向所得混合液中依次加入二甲基亚砜DMSO和6%羟乙基淀粉，混合均匀，得到含羟乙基淀粉HES的临床用CEF冷冻保存液。通过本发明，能够有效地解决应用现有的冷冻保存液冻存细胞后导致的复苏后细胞活力较低而无法直接应用的问题。该方法成本低且易操作，HES与DMSO联合应用，能够发挥渗透性和非渗透性两种冻存保护剂的协同作用，并配合添加胎牛血清（为细胞提供营养物质），形成了一个比较稳定的冷冻保护体系。
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公开(公告)号：CN111650327B
公开(公告)日：2023-06-02
申请号：CN202010685235.4
申请日：2020-07-16
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N30/88
Abstract: 本发明涉及一种基于非标定量蛋白质组学技术寻找如皋黄鸡不同细胞或组织间差异表达蛋白的方法，包括以下步骤：（1）鸡不同细胞或组织的组织或细胞蛋白提取；（2）对步骤（1）中得到的不同组的细胞或组织蛋白进行胰酶酶解；（3）酶解后的细胞或组织蛋白进行液相色谱‑质谱联用分析；（4）对分析结果进行数据库搜库和注释分析。通过本发明，本发明的优越性在于：1、本发明能够较快的获得不同组织和细胞之间的差异表达蛋白。2、方法简单可行，可重复性强，结果准确。3、该方法适用于其他物种。
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