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公开(公告)号：CN105198978B
公开(公告)日：2019-04-26
申请号：CN201510612796.0
申请日：2015-09-24
Applicant: 中国海洋大学
IPC: C07K14/435 , C12N15/12 , C12N15/70 , C12N1/21 , A61K38/17 , A61P15/00 , A23K20/147 , A23K50/80 , C12R1/19
Abstract: 本发明的目的是提供一种牙鲆神经肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1；本发明克隆得到牙鲆神经肽的编码序列，并建立和筛选出能有效地进行神经肽重组表达的载体及工程菌，实现了牙鲆神经肽在原核生物体内的融合表达，与传统的多肽合成方法及从天然资源提取多肽的方法相比，本发明的制备方法使得神经肽大批量、低成本的规模化生产成为可能。本发明得到的工程菌可以直接作为饲料添加剂使用，并利用鱼类自身的肠激酶作用释放神经肽发挥其功能，因此可应用于海洋养殖鱼类、养殖禽畜类的饲料添加剂和兽药，解决了养殖业长期存在的难以安全有效地人工控制养殖品种性成熟过程的问题，并以高科技带动了养殖业及养殖饲料工业的行业技术进步。
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公开(公告)号：CN108823289A
公开(公告)日：2018-11-16
申请号：CN201810589606.1
申请日：2018-06-08
Applicant: 中国海洋大学
IPC: C12Q1/6841
Abstract: 本发明公开了一种不依赖荧光检测杂交信号的鱼类染色体原位杂交液，由去离子甲酰胺，2xSSC缓冲液,聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯,酵母总RNA，封闭试剂，乙二胺四乙酸,硫酸葡聚糖，柠檬酸三钠，磷酸氢二钠,焦碳酸二乙酯处理后的水，变性后的探针与去离子甲酰胺混合液按一定比例配置成的。应用本发明的杂交液可以使染色体原位杂交技术不依赖于荧光检测，使用普通显微镜就可以观察到荧光信号,而且试剂配制和存放便捷，杂交结果观察、拍照方便，杂交材料可以长期存放，实验过程更加简单易于操作，极大的扩大了鱼类染色体原位杂交的应用范围。
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公开(公告)号：CN108728466A
公开(公告)日：2018-11-02
申请号：CN201810587974.2
申请日：2018-06-08
Applicant: 中国海洋大学
Abstract: 本发明提供了一种在牙鲆鱼中实现高效稳定转染的表达载体，本发明载体采用Tol2转座子，结合编码合成转座酶的质粒pCS-TP共转染能够显著提高牙鲆鱼细胞整合外源基因的能力。发明载体添加了新霉素抗性筛选标记，从而实现了仅仅依靠传统的脂质体转染加抗性筛选的方式，即可获得较多的重组细胞，极大的提高了牙鲆鱼细胞筛选的到稳转细胞系的效率。发明载体添加了EGFP荧光标签，能够方便的示踪转入细胞系的外源基因的表达情况。更重要的，本发明载体采用优化后的牙鲆β-actin启动子替代传统哺乳动物表达载体中常用的CMV启动子，创造性的获得了一种更适应牙鲆鱼细胞系外源基因表达的载体，从而实现外源基因在牙鲆鱼的各种细胞系中都能够高效稳定的表达。
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公开(公告)号：CN105255827B
公开(公告)日：2018-07-17
申请号：CN201510869478.2
申请日：2015-12-02
Applicant: 中国海洋大学
IPC: C12N5/078
Abstract: 本发明提供一种鲆鲽鱼类淋巴细胞增殖培养基，是在基础培养基中添加刀豆蛋白A、细菌脂多糖、植物血球凝集素、美洲商陆凝集素、鲆鲽鱼血清、胎牛血清、混合脱氧单核苷酸、L‑谷氨酰胺和碳酸氢钠制成的。本发明提供的培养基含有鲆鲽鱼血清及各种促进淋巴细胞增殖的有丝分裂原，通过各成分的有效配比，能够使淋巴细胞高效快速增殖，淋巴细胞活力指数高，平均增殖活力高达85.33％，同时该培养基具有良好的稳定性，可以完全满足鱼类分子免疫学和细胞遗传学培养淋巴细胞的需求。
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公开(公告)号：CN106399370A
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201610819451.7
申请日：2016-09-12
Applicant: 中国海洋大学
Abstract: 本发明提供一种建立稳定转基因的牙鲆胚胎细胞株方法，是把牙鲆广泛表达的β-actin启动子启动的增强型绿色荧光蛋白且能表达G418抗性蛋白的质粒转染牙鲆胚胎细胞。24h后,荧光显微镜下观察EGFP表达，并通过G418筛选得到稳定遗传表达的胚胎细胞。本发明方法可将在牙鲆中广泛表达的β‐actin启动的外源基因有效转入牙鲆胚胎细胞，并且可以在牙鲆胚胎细胞中稳定遗传表达，为鲆鲽鱼类基因研究提供了一种新的方法，解决了因鲆鲽鱼类细胞瞬时转染效率低而难以进行细胞水平基因功能分析研究的问题，为鲆鲽鱼类分子水平遗传育种工作提供了新的技术手段，提供了用于使海水鱼类细胞系稳定遗传转基因方法。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102181554B
公开(公告)日：2016-01-20
申请号：CN201110100873.6
申请日：2011-04-21
Applicant: 中国海洋大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种半滑舌鳎雌性特异的基因组DNA片段及其应用。半滑舌鳎雌性特异的基因组DNA片段，其特征在于所述的DNA片段为：(a)、具有序列为SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2的DNA片段；(b)、分别与(a)中所述DNA片段经过一个或多个核苷酸的取代、缺失或添加而形成的DNA片段，且为半滑舌鳎雌性特异的基因组DNA序列。本发明获得的半滑舌鳎雌性特异性的DNA片段作为分子标记能够有效的辨别半滑舌鳎的雌性个体，并且本发明的方法可以一次性鉴定大量个体，鉴定时间不超过90分钟，适合大规模地进行半滑舌鳎的遗传性别鉴定，能够在半滑舌鳎工厂化养殖中进行大规模的推广。
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公开(公告)号：CN104710529B
公开(公告)日：2015-10-07
申请号：CN201510178476.9
申请日：2015-04-15
Applicant: 中国海洋大学
Abstract: 本发明公开了一种抗鱼类病毒性出血性败血症病毒的单链抗体及其制备方法和应用，以及编码该单链抗体的基因、含有该基因的载体和宿主细胞等。该抗鱼类病毒性出血性败血症病毒的单链抗体，是由抗体重链可变区和轻链可变区通过接头肽连接而成，并可通过原核表达系统进行高效表达。单链抗体ScFv-VS1的分子量约为28kD，能够特异识别鱼类病毒性出血性败血症病毒，阻断病毒与天然血清的结合，可进一步用于该病毒的诊断、治疗制剂的开发和抗原表位研究。
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公开(公告)号：CN104710529A
公开(公告)日：2015-06-17
申请号：CN201510178476.9
申请日：2015-04-15
Applicant: 中国海洋大学
Abstract: 本发明公开了一种抗鱼类病毒性出血性败血症病毒的单链抗体及其制备方法和应用，以及编码该单链抗体的基因、含有该基因的载体和宿主细胞等。该抗鱼类病毒性出血性败血症病毒的单链抗体，是由抗体重链可变区和轻链可变区通过接头肽连接而成，并可通过原核表达系统进行高效表达。单链抗体ScFv-VS1的分子量约为28kD，能够特异识别鱼类病毒性出血性败血症病毒，阻断病毒与天然血清的结合，可进一步用于该病毒的诊断、治疗制剂的开发和抗原表位研究。
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公开(公告)号：CN103267665A
公开(公告)日：2013-08-28
申请号：CN201310191707.0
申请日：2013-05-22
Applicant: 中国海洋大学
IPC: G01N1/28
Abstract: 本发明一种制备鲆鲽鱼类单个胚胎染色体的方法，属于生物技术中的海洋动物细胞遗传学领域。使用鲆鲽鱼类的胚胎为材料，先以注射器为工具，采用物理加压的方法对胚胎材料卵膜的破除，将处于尾牙期至出膜期之间的胚胎连同海水一起置于针筒中，然后推动注射器活塞将胚胎自针头处挤压出，胚胎即可破膜，且组织保存较完整。破膜后的胚胎使用常规染色体制备方法进行染色体的制备，用秋水仙素处理2小时，然后置于低渗液中处理30分钟，最后用卡诺固定液固定三次，每次20分钟。本发明获得的鲆鲽鱼类染色体分裂相非常多，效果也很好，尤其是可以制备单个胚胎的染色体，不浪费材料，且可以针对单个个体进行后续的遗传学分析。
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公开(公告)号：CN102242138A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201110100678.3
申请日：2011-04-21
Applicant: 中国海洋大学
Abstract: 本发明涉及一种半滑舌鳎抗菌肽hepcidin的重组表达及其应用，所述的表达载体中插入了用于重组表达序列为SEQ ID NO：1的半滑舌鳎抗菌肽hepcidin的核苷酸片段，并在宿主菌中表达半滑舌鳎抗菌肽hepcidin的重组蛋白，并摸索出一种纯化重组蛋白的简单有效的方法，蛋白表达出的蛋白应用在抗病菌类产品上。本发明筛建立和筛选出能有效地进行抗菌肽重组表达的载体及宿主菌，实现了半滑舌鳎抗菌肽在原核生物体内的融合表达及简单有效的纯化，与传统的多肽合成方法及从天然资源提取多肽的方法相比，本发明的制备方法使得大批量、低成本的规模化生产成为可能，可应用于海洋养殖鱼类、养殖禽畜类的饲料添加剂和细菌性疾病的防治。
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