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公开(公告)号：CN108728466A
公开(公告)日：2018-11-02
申请号：CN201810587974.2
申请日：2018-06-08
Applicant: 中国海洋大学
Abstract: 本发明提供了一种在牙鲆鱼中实现高效稳定转染的表达载体，本发明载体采用Tol2转座子，结合编码合成转座酶的质粒pCS-TP共转染能够显著提高牙鲆鱼细胞整合外源基因的能力。发明载体添加了新霉素抗性筛选标记，从而实现了仅仅依靠传统的脂质体转染加抗性筛选的方式，即可获得较多的重组细胞，极大的提高了牙鲆鱼细胞筛选的到稳转细胞系的效率。发明载体添加了EGFP荧光标签，能够方便的示踪转入细胞系的外源基因的表达情况。更重要的，本发明载体采用优化后的牙鲆β-actin启动子替代传统哺乳动物表达载体中常用的CMV启动子，创造性的获得了一种更适应牙鲆鱼细胞系外源基因表达的载体，从而实现外源基因在牙鲆鱼的各种细胞系中都能够高效稳定的表达。
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