公开(公告)号：CN118221789A

公开(公告)日：2024-06-21

申请号：CN202410318607.8

申请日：2024-03-20

Applicant: 重庆市畜牧科学院

Inventor： 沈克飞 ,  张素辉 ,  徐登峰 ,  王孝友 ,  付利芝 ,  付文贵

IPC: C07K14/195 ,  C07K1/22 ,  C07K1/14 ,  C12N1/20 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种利用肝素琼脂糖珠从化脓隐秘杆菌中提取PLO的方法。该方法包括：1)化脓隐秘杆菌预处理：采用培养基复苏化脓隐秘杆菌，挑取单菌落接种于培养基中，振摇培养，得到化脓隐秘杆菌培养物；所述化脓隐秘杆菌培养物经离心、洗涤、悬浮，得到预处理的化脓隐秘杆菌；2)采用细菌膜蛋白提取试剂盒对预处理后的化脓隐秘杆菌进行分离提取，得到化脓隐秘杆菌蛋白质；3)将步骤2)制得的化脓隐秘杆菌蛋白质与肝素琼脂糖珠混合孵育，洗涤和洗脱后得到PLO。该方法成功实现了化脓隐秘杆菌中高纯度PLO的提取，利用肝素琼脂糖珠使PLO得到有效富集，PLO纯度高达98％。

公开(公告)号：CN112611864B

公开(公告)日：2024-03-12

申请号：CN202011395742.0

申请日：2020-12-03

Applicant: 重庆市畜牧科学院

Inventor： 沈克飞 ,  许国洋 ,  付利芝 ,  闫志强 ,  张素辉 ,  杨柳 ,  徐登峰

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/58 ,  G01N33/68 ,  G16B5/00 ,  G16B50/30

Abstract: 本发明属于病菌筛分领域，具体涉及一种筛分感染化脓隐秘杆菌或感染伪结核棒状杆菌模型的系统及方法。所述系统包括酶标板、加热器、试剂、数据库、酶标仪、数据对比输出模块；所述酶标板包括聚苯乙烯/聚氯乙烯材料标板，包括96孔或48孔；试剂包括抗原包被液、酶标抗体、显色液、病菌感染模型或免疫模型血清；数据库为健康或感染或免疫的动物模型产生不同的抗体量的吸光度，可导入和可删除；所述酶标仪设置波长为450nm。本发明提供的筛分系统的数据库完善，筛分的结果精确，可以快速筛分出感染病菌模型的病菌类型，简单方便。

公开(公告)号：CN115960845A

公开(公告)日：2023-04-14

申请号：CN202211293210.5

申请日：2022-10-21

Applicant: 重庆市畜牧科学院

Inventor： 余远迪 ,  牟豪 ,  许国洋 ,  杨柳 ,  郑华 ,  张素辉

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/39 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N5/10 ,  A61K39/275 ,  A61K39/295 ,  A61P31/20 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种表达ORFV F1L蛋白的重组山羊痘病毒及其构建方法。该病毒构建方法如下：(1)根据山羊痘病毒基因组序列、羊口疮病毒F1L基因开放阅读框序列，以135基因编码区两侧区域DNA片段为左右重组臂，中间插入羊口疮病毒F1L基因编码区以及标记基因gpt、EGFP、早晚期启动子，并且含有loxp位点，构建同源重组供体质粒；(2)利用步骤(1)所得同源重组供体质粒转染细胞，制得表达ORFV F1L蛋白的重组山羊痘病毒。本发明提供的重组山羊痘病毒不影响山羊痘病毒的体外复制能力，该重组山羊痘病毒所插入的F1L外源基因在机体内随载体病毒的复制而表达，可作为羊痘、羊口疮弱毒疫苗的新方案。

公开(公告)号：CN108610424B

公开(公告)日：2021-07-27

申请号：CN201810434893.9

申请日：2018-05-08

Applicant: 重庆市畜牧科学院

Inventor： 沈克飞 ,  杨柳 ,  付利芝 ,  杨睿 ,  周雪 ,  张素辉

IPC: C07K19/00 ,  C12N15/70 ,  A61K39/12 ,  A61P31/20 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明提供了一种含有猪圆环病毒2型和猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原表位的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明实现了该蛋白的可溶性高效表达，重组蛋白便于纯化，纯化的蛋白纯度高，能以更优的性能应用于疫苗中。

公开(公告)号：CN112611864A

公开(公告)日：2021-04-06

申请号：CN202011395742.0

申请日：2020-12-03

Applicant: 重庆市畜牧科学院

Inventor： 沈克飞 ,  许国洋 ,  付利芝 ,  闫志强 ,  张素辉 ,  杨柳 ,  徐登峰

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/58 ,  G01N33/68 ,  G16B5/00 ,  G16B50/30

Abstract: 本发明属于病菌筛分领域，具体涉及一种筛分感染化脓隐秘杆菌或感染伪结核棒状杆菌模型的系统及方法。所述系统包括酶标板、加热器、试剂、数据库、酶标仪、数据对比输出模块；所述酶标板包括聚苯乙烯/聚氯乙烯材料标板，包括96孔或48孔；试剂包括抗原包被液、酶标抗体、显色液、病菌感染模型或免疫模型血清；数据库为健康或感染或免疫的动物模型产生不同的抗体量的吸光度，可导入和可删除；所述酶标仪设置波长为450nm。本发明提供的筛分系统的数据库完善，筛分的结果精确，可以快速筛分出感染病菌模型的病菌类型，简单方便。

公开(公告)号：CN110642927A

公开(公告)日：2020-01-03

申请号：CN201910980728.8

申请日：2019-10-16

Applicant: 重庆市畜牧科学院

Inventor： 沈克飞 ,  张素辉 ,  闫志强 ,  徐登峰 ,  许国洋 ,  付利芝

IPC: C07K14/195 ,  C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  G01N33/68 ,  A61K39/02 ,  A61P31/04

Abstract: 本发明属于兽用生物制品领域，公布了化脓隐秘杆菌的一种抗原蛋白及其制备、疫苗应用、抗体检测方法。本发明将高度保守的化脓隐秘杆菌铁ABC转运体底物结合蛋白SBP的基因，克隆至pGEX-4T-1质粒，构建BL21（DE3）重组菌株，使用IPTG诱导表达重组蛋白SBP(GST-SBP)，实现了目的蛋白的可溶性表达，采用Gluthathione-Sepharose 4B层析法亲和纯化重组蛋白。本发明提供的重组SBP(GST-SBP)蛋白具有良好的反应原性和免疫原性，能够与化脓隐秘杆菌免疫或感染的动物（小鼠、山羊）的血清反应，能够刺激动物（小鼠、羊）产生高水平特异抗体，小鼠免疫保护率为90%。本发明为制备预防化脓隐秘杆菌感染的药物提供了新的抗原蛋白。

公开(公告)号：CN103142768B

公开(公告)日：2015-02-18

申请号：CN201310104364.X

申请日：2013-03-28

Applicant: 重庆市畜牧科学院 ,  杨晶旭

Inventor： 杨金龙 ,  杨松全 ,  刘作华 ,  黄勇 ,  张素辉 ,  李大军 ,  殷素会

IPC: A61K36/855 ,  A61K36/804 ,  A61P25/20 ,  A61P39/00 ,  A61K35/742

Abstract: 本发明公开了一种仔猪抗应激合生元中药组合物及其制备方法；该中药组合物的组分及其重量份数为：酸枣仁20~35份，睡莲花15~25份，生地10~20份，大青叶10~20份，产乳酸枯草芽孢杆菌微生物制剂1~2份；该中药组合物的制备方法为：按重量份称取酸枣仁、睡莲花、生地、大青叶和产乳酸枯草芽孢杆菌微生物制剂，粉碎，然后混合均匀，得到所述中药组合物。本发明的仔猪抗应激合生元中药组合物能够促进仔猪镇静安神作用，减少应激反应，并且无毒副作用，无有害残留，不产生耐药性，不污染环境；另外，生产本发明的仔猪抗应激合生元中药组合物的原料来源稳定、价格低廉，生产工艺简单，使用方便。

公开(公告)号：CN103190544B

公开(公告)日：2015-01-21

申请号：CN201310129321.7

申请日：2013-04-12

Applicant: 重庆市畜牧科学院 ,  杨晶旭

Inventor： 杨金龙 ,  彭祥伟 ,  刘作华 ,  黄勇 ,  张素辉 ,  殷素会 ,  周俊

IPC: A23K1/18 ,  A23K1/00 ,  A23K1/16 ,  A23K1/14 ,  A61K36/888 ,  A61P39/00

Abstract: 本发明涉及畜牧饲养领域，特别涉及微生态饲料及其制备方法，雏鸭抗应激合生元中药组合物由微生态合生元饲料添加剂和中草药添加剂组成，微生态合生元饲料添加剂按照重量份计算由以下组分组成：微生态益生菌10-60份，寡糖40-90份，所述微生态合生元饲料添加剂每克中含双歧杆菌活菌数为200-450亿个，所述微生态益生菌为双歧杆菌制剂，所述寡糖为果寡糖、低聚木糖、异麦芽低聚糖和大豆低聚糖中的任一种或多种；所述微生态合生元饲料添加剂占所述雏鸭抗应激合生元中药组合物总重量的1-2％，所述中草药添加剂包括石菖蒲、酸枣仁、睡莲花、落花生的花和大青叶；联合应用能显著提高雏鸭的抗应激能力。

公开(公告)号：CN103114086B

公开(公告)日：2014-09-10

申请号：CN201310052404.0

申请日：2013-02-18

Applicant: 重庆市畜牧科学院 ,  杨晶旭

Inventor： 杨金龙 ,  刘作华 ,  黄勇 ,  张素辉 ,  杨睿 ,  张邑帆 ,  郑华 ,  李成洪 ,  杨晶旭

IPC: C12N15/10 ,  C40B50/06 ,  C40B40/08

Abstract: 本发明公开了一种快速构建差异表达基因文库的方法，包括如下步骤：先提取感染鹅细小病毒和未感染鹅细小病毒鹅法氏囊的总mRNA；利用获得的mRNA合成双链cDNA进行酶切消化，然后分为2管，分别添加不同的接头进行连接；将加有接头的双链cDNA先进行正向消减杂交，然后将正向消减杂交产物进行反向消减杂交，反向消减杂交后再进行第一次PCR扩增，将扩增产物稀释后，以稀释液为模板进行第2次PCR扩增；最后将第2次PCR扩增的产物进行变性梯度凝胶电泳，电泳后进行染色，得鹅细小病毒胁迫法氏囊的差异表达基因文库；利用本发明的方法构建的基因文库无假阳性，并且具有速度快、灵敏度高、特异性强、成本低廉，操作方便等特点。

公开(公告)号：CN103168965B

公开(公告)日：2014-07-16

申请号：CN201310108075.7

申请日：2013-03-29

Applicant: 重庆市畜牧科学院 ,  杨晶旭

Inventor： 杨金龙 ,  刘作华 ,  黄勇 ,  张素辉 ,  殷素会 ,  周俊

IPC: A23K1/18 ,  A23K1/16 ,  A23K1/00 ,  A23K1/14 ,  A61K36/725 ,  A61P39/00 ,  A61K35/02

Abstract: 本发明涉及畜牧饲养领域，特别涉及雏鸡抗应激合生元中药组合物，由微生态合生元饲料添加剂和中草药添加剂组成，微生态合生元饲料添加剂按照重量份计算由以下组分组成：微生态益生菌10-60份，寡糖40-90份，所述微生态合生元饲料添加剂每克中含双歧杆菌活菌数为200-450亿个，所述微生态益生菌为双歧杆菌制剂，所述寡糖为果寡糖、低聚木糖、异麦芽低聚糖和大豆低聚糖中的任一种或多种；所述微生态合生元饲料添加剂占所述雏鸡抗应激合生元中药组合物总重量的1-2％，所述中草药添加剂按重量份计由以下组分组成：五味子3-5份、龙骨10-15份，酸枣仁15-18份；睡莲花10-20份；三叶草25-30份；本发明能提高雏鸡免疫力和抗应激能力，降低发病率。