公开(公告)号：CN119162264A

公开(公告)日：2024-12-20

申请号：CN202411436744.8

申请日：2024-10-15

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  周俊平 ,  张政 ,  张博 ,  黄良刚 ,  郑裕国

IPC: C12P13/02 ,  C12N1/21 ,  C12N15/52 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及微生物发酵技术领域，公开了一种发酵生产D‑泛醇的方法。本申请通过对改造菌株DFC01菌株进行发酵生产D‑泛醇，并基于DFC01菌株，设计了适合其大规模发酵生产D‑泛醇的多阶段控制发酵工艺，通过发酵中期12～24小时期间，控制发酵液中葡萄糖的浓度处于0.5～2g/L范围，以及，通过发酵后期24小时至发酵结束期间，控制发酵液中溶氧浓度处于28％～40％范围，使得降低发酵过程中副产物积累的同时，提高D‑泛醇产量以及糖酸转化率。

公开(公告)号：CN118531032A

公开(公告)日：2024-08-23

申请号：CN202410775092.4

申请日：2024-06-17

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  黄良刚 ,  陈媛媛 ,  周俊平 ,  逄爱萍 ,  张博 ,  郑裕国

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N15/52 ,  C12N15/53 ,  C12N15/60 ,  C12N15/31 ,  C12N1/21 ,  C12P13/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及微生物代谢工程技术领域，尤其涉及一种高效生产O‑乙酰‑L‑高丝氨酸的重组大肠杆菌、其构建方法及应用，并将其应用于发酵生产O‑乙酰‑L‑高丝氨酸，以克服现有技术中存在的O‑乙酰‑L‑高丝氨酸生产菌株在发酵生产O‑乙酰‑L‑高丝氨酸中的产量较低的问题。通过在菌株Escherichia coli HSC2的基因组中，利用过表达、敲除、回补等手段构建可高效生产O‑乙酰‑L‑高丝氨酸的重组大肠杆菌，使经过改造后得到的性能最优的菌株在发酵生产O‑乙酰‑L‑高丝氨酸方面的水平相比于出发菌HSC2有明显提升，菌株摇瓶水平从0g/L提高到12.66g/L。因此，本发明提供的重组大肠杆菌具有重要的工业应用价值。

公开(公告)号：CN117551595A

公开(公告)日：2024-02-13

申请号：CN202311509415.7

申请日：2023-11-14

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  黄良刚 ,  随兰多 ,  姚远 ,  逄爱萍 ,  周俊平 ,  张博 ,  郑裕国

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/31 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种高产D‑泛酸的基因工程菌、构建方法及应用。本发明通过质粒表达全局转录调控因子筛选出发酵效果较好的IhfAB和cra；对IhfAB和cra第二密码子进行优化，并使用质粒表达进一步的验证优化结果，分解代谢阻遏剂/活化剂(cra)改造后的发酵菌株在摇瓶发酵中生产D‑泛酸的水平相比于出发菌Dpan16S携带未改造质粒摇瓶发酵水平从2.49g/L提高到3.17g/L，整合宿主因子(ihfAB)经过优化的质粒摇瓶发酵较于未经过改造的质粒摇瓶发酵水平从3.46g/L提高至3.78g/L；随后将优化后cra和IhfAB导入到Dpan16S基因组中，经过摇瓶发酵验证后进一步的将D‑泛酸产量由3.82g/L提升至4.13g/L和4.05g/L，证明本发明提供的重组大肠杆菌具有重要的工业应用价值。

公开(公告)号：CN117535327A

公开(公告)日：2024-02-09

申请号：CN202311388069.1

申请日：2023-10-25

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  王屹竑 ,  周俊平 ,  张博 ,  黄良刚 ,  郑裕国

IPC: C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种以温控元件改变中心碳流的高产D‑泛酸载体及其应用。为了解决上述现有生物发酵合成D‑泛酸产量不高的技术问题，本发明以pTrc99A为通用骨架，然后用烯酰ACP还原酶基因FabV替换氨苄青霉素抗生素筛选标记，融合表达由四环素诱导调节元件PLtetO‑1驱动的异源D‑泛解酸途径基因alsS、ilvD、panB、panC基因，同时融合表达由温敏启动子回路cIts‑pR‑pL元件驱动的tetR抑制子基因和降解标签ssrA，由此得到一种以温控元件改变中心碳流的高产D‑泛酸载体，通过该载体，能够人为地切换菌株的生长与生产模式，使在必要时细胞生长处于优势或细胞生产处于优势，最终使得在显著提升其在相应培养条件下的生长性能的同时，D‑泛酸最终效价提高到7.22g/L。

公开(公告)号：CN117402864A

公开(公告)日：2024-01-16

申请号：CN202311382954.9

申请日：2023-10-24

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  周俊平 ,  王屹竑 ,  冯雪云 ,  张博 ,  黄良刚 ,  郑裕国

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种天冬氨酸‑α‑脱羧酶突变体及其应用。为了解决上述现有生物发酵合成D‑泛酸产量不高的技术问题，本发明通过对来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的panD基因进行定点突变，得到一种天冬氨酸‑α‑脱羧酶突变体，扩大了底物与酶的结合口袋，同时提高了对底物的亲和能力，在加强天冬氨酸脱羧的同时，将代谢流拉至β‑丙氨酸途径，基于该突变体及其编码基因构建的工程菌，在加强β‑丙氨酸生成的同时，促进了D‑泛酸的合成。

公开(公告)号：CN117402845A

公开(公告)日：2024-01-16

申请号：CN202311361504.1

申请日：2023-10-20

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  高慧 ,  周俊平 ,  张博 ,  黄良刚 ,  郑裕国

IPC: C12N9/06 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种亮氨酸脱氢酶突变体及其应用。本发明通过对来源于中间型嗜热放线菌(Thermoactinomyces intermedius)的亮氨酸脱氢酶LeuDH，经过184位组氨酸突变成丙氨酸或260位丝氨酸突变成丙氨酸，获得一种亮氨酸脱氢酶突变体，以2‑酮丁酸为底物，催化生产L‑2‑氨基丁酸的过程中，该突变体显示出较高的催化活性，且对酮酸底物的耐受性大大提升，在较高浓度的2‑酮丁酸存在下仍具有较高酶活。

公开(公告)号：CN116622607A

公开(公告)日：2023-08-22

申请号：CN202310632061.9

申请日：2023-05-31

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  陈媛媛 ,  黄良刚 ,  高峰 ,  赵明明 ,  张博 ,  周俊平 ,  郑裕国

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/53 ,  C12N15/31 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12N15/52 ,  C12N15/70 ,  C12P13/06 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及微生物代谢工程技术领域，尤其涉及一种高产L‑高丝氨酸的重组大肠杆菌及其构建方法和应用，在底盘菌株Escherichia coli HS33的基因组中原位回补L‑蛋氨酸运输蛋白的编码基因metI，敲除甲基乙二醛合成酶的编码基因mgsA、(p)ppGpp合成酶基因relA以及丙酮酸激酶的编码基因pykA，过表达葡萄糖特异性PTS酶IIBC组分编码基因ptsG、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶编码基因ppc、丙酮酸羧化酶编码基因pyc、天冬氨酸转氨酶编码基因aspB和解反馈抑制的天冬氨酸激酶/高丝氨酸脱氢酶I编码基因thrAG1297A即得所述高产L‑高丝氨酸的重组大肠杆菌并将其应用于发酵生产L‑高丝氨酸。该重组大肠杆菌相比于野生型能够更好地利用葡萄糖等碳源物质进行L‑高丝氨酸的生产，并且能力更强，转化率更高。

公开(公告)号：CN113789307B

公开(公告)日：2023-08-18

申请号：CN202111060492.X

申请日：2021-09-10

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  张博 ,  周俊平 ,  黄良刚 ,  郑裕国

IPC: C12N9/00 ,  C12N15/52 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种泛酸合成酶突变体、编码基因、载体及应用，属于酶工程技术领域。本发明的泛酸合成酶突变体泛酸合成酶突变体，由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的泛酸合成酶的第5位和/或第176位氨基酸经定点突变获得。本发明通过多序列氨基酸比对，进行定点突变，提高泛酸合成酶的催化效率，进一步提高泛酸合成酶产量。本发明构建的泛酸合成酶的重组大肠杆菌可将泛酸合成酶酶活较出发菌株提高1.25倍。改造后的基因工程菌产酶能力显著提高，摇瓶发酵生产泛酸合成酶酶活达到144.266U/mL，更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。

公开(公告)号：CN116355942A

公开(公告)日：2023-06-30

申请号：CN202310156721.0

申请日：2023-02-23

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  王云 ,  逄爱萍 ,  张博 ,  黄良刚 ,  周俊平 ,  郑裕国

IPC: C12N15/78 ,  C12N15/67 ,  C12N15/64 ,  C12N15/65

Abstract: 本发明涉及生物技术领域，公开了一种恶臭假单胞菌自杀载体的构建方法及其应用。本发明提供的恶臭假单胞菌自杀载体的构建方法以pK18mobsacB载体为模板，扩增得到载体骨架，然后将以恶臭假单胞菌KT2440菌液为模板扩增得到强启动子Prib、待敲除基因x的上、下游同源臂连接于载体骨架上得到恶臭假单胞菌自杀载体。强启动子Prib可以使sacB蔗糖酶在恶臭假单胞菌中的表达量增多，增强蔗糖致死效应。将得到的恶臭假单胞菌自杀载体导入恶臭假单胞菌中后，即可以通过卡那霉素正向筛选和蔗糖负向筛选，高效准确地获得待敲除靶基因缺失的菌株。

公开(公告)号：CN116179382A

公开(公告)日：2023-05-30

申请号：CN202211301011.4

申请日：2022-10-24

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  肖博文 ,  黄良刚 ,  张博 ,  周俊平 ,  郑裕国

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/31 ,  C12P7/18 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明涉及一种赤藓糖醇的基因工程菌株及其构建方法，以及其在微生物发酵制备赤藓糖醇中的应用。本发明在解脂耶氏酵母中引入木糖还原酶、木糖醇脱氢酶以及木糖醇激酶重塑了木糖代谢途径，强化赤藓糖醇生物生成途径中转酮酶TKL1、转醛酶TAL、赤藓糖还原酶ER的表达，通过敲除甘露糖醇脱氢酶MDH和阿拉伯糖醇脱氢酶ArDH来减少副产物甘露糖醇和阿拉伯糖醇的生成，通过敲除赤藓糖醇脱氢酶EYD减少赤藓糖醇转化为其他物质削弱赤藓糖醇的积累，通过强化糖摄取途径基因己糖激酶HK、转运蛋白Stp1和Stp2的表达，最后可利用葡萄糖和木糖混合碳源的赤藓糖醇高产菌，产量从50.17g/L提高到195.56g/L，为以木糖为底物合成赤藓糖醇工业化生产提供了优良菌株来源，具有很好的工业应用潜力。