公开(公告)号：CN117625564A

公开(公告)日：2024-03-01

申请号：CN202311537001.5

申请日：2023-11-17

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  王文佳 ,  黄良刚 ,  年璐 ,  王凯凯 ,  周俊平 ,  张博 ,  郑裕国

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/81 ,  C12N15/53 ,  C12N1/19 ,  C12P7/18 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明提供了一种赤藓糖还原酶突变体，与来源于解脂耶氏酵母Yarrowia lipolytica的YALI0F18590g基因编码的赤藓糖还原酶相比，其进行了以下位点的单点突变或组合突变：(1)26号位点的赖氨酸突变成天冬酰胺；(2)215号位点的甘氨酸突变成天冬酰胺；(3)216号位点的苯丙氨酸突变成酪氨酸；(4)295号位点的缬氨酸突变成蛋氨酸。与解脂耶氏酵母来源的野生型赤藓糖还原酶相比，本发明提供的赤藓糖还原酶突变体酶活提高了26％～44％。将赤藓糖还原酶突变体基因定点插入底盘菌株解脂耶氏酵母Yarrowia lipolytica Po1g基因组上后得到的高产赤藓糖醇基因工程菌的赤藓糖醇产量较单过表达赤藓糖还原酶野生型的菌株有明显的提升，对赤藓糖醇的工业生产具有重要意义。

公开(公告)号：CN117535330A

公开(公告)日：2024-02-09

申请号：CN202311617947.2

申请日：2023-11-30

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  陈媛媛 ,  黄良刚 ,  赵明明 ,  周俊平 ,  张博 ,  郑裕国

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12N1/21 ,  C12P13/06 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及微生物代谢工程技术领域，尤其涉及一种高效生产L‑高丝氨酸的重组大肠杆菌、其构建方法及应用。本发明提供了一种高效生产L‑高丝氨酸的重组大肠杆菌的构建方法，其特征在于，以Escherichia coli HSC9为底盘菌株，至少包括以下构建步骤中的一步：(1)在菌株Escherichia coli HSC9的基因组中敲除乳酸脱氢酶编码基因ldhA并过表达天冬氨酸激酶编码基因lysCpa；(2)在菌株Escherichia coli HSC9的基因组中组合回补Met抑制因子编码基因metJ、胱硫醚‑γ‑合酶编码基因metB、双功能天冬氨酸激酶/高丝氨酸脱氢酶编码基因metL，以及O‑琥珀酰高丝氨酸转移酶编码基因metA；(3)在菌株Escherichia coli HSC9的基因组中回补二氨基庚二酸脱羧酶编码基因lysA；(4)在菌株Escherichia coli HSC9的基因组中弱化柠檬酸合酶编码基因gltA的表达。

公开(公告)号：CN117431199A

公开(公告)日：2024-01-23

申请号：CN202311388355.8

申请日：2023-10-25

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  王屹竑 ,  周俊平 ,  方雪莲 ,  张博 ,  黄良刚 ,  郑裕国

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P13/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，公开了基于糖摄取调节高产D‑泛酸的基因工程菌、构建方法及应用。本发明通过：(1)弱化PTS系统，减少磷酸烯醇式丙酮酸的消耗、(2)并过表达glk基因，强化非PTS系统、(3)过表达galP基因，进一步强化非PTS系统，得到D‑泛酸高产的大肠杆菌基因工程菌株。本发明运用代谢工程改造大肠杆菌磷酸烯醇丙酮酸(phosphoenolpyruvate，PEP)‑磷酸转移酶系统，使D‑泛酸达到1.81g/L，通过强化glk和galP对非PTS途径进行强化得到一株无质粒高产D‑泛酸工程菌，D‑泛酸最终效价提高到4.05g/L，OD600提升到了8.14。

公开(公告)号：CN113832089B

公开(公告)日：2023-08-25

申请号：CN202111060491.5

申请日：2021-09-10

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 张博 ,  柳志强 ,  黄良刚 ,  周俊平 ,  郑裕国

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/54 ,  C12N15/53 ,  C12N15/61 ,  C12N15/113 ,  C12N15/76 ,  C12P19/26 ,  C12R1/465

Abstract: 本发明涉及一种消除副产物AmA且高产两性霉素B的重组结节链霉菌，由如下方法构建获得：以结节链霉菌CCTCC NO：M 2017426为底盘菌，突变其聚酮合酶ER5结构域关键氨基酸位点，再导入SEQ ID NO.1～5所示基因的串联基因获得。本发明有益效果主要体现在：(1)本发明获得的突变菌株具有完全不产副产物AmA的特性，便于工业化生产分离纯化，同时AmB产量进一步提高；(2)过表达中心碳代谢及脂肪酸代谢途径关键基因，加强菌株对碳源的摄取，提高碳源转化率，进一步提高了AmB产量。

公开(公告)号：CN116622755A

公开(公告)日：2023-08-22

申请号：CN202310632032.2

申请日：2023-05-31

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  赵明明 ,  黄良刚 ,  黄婷 ,  年璐 ,  王屹竑 ,  张博 ,  周俊平 ,  郑裕国

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12N1/21 ,  C12N15/55 ,  C12N15/10 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种辅助大肠杆菌自适应进化的基因编辑质粒载体、构建方法、工程菌及应用，包括大肠杆菌质粒载体骨架，所述质粒载体骨架上组装连接有大鼠来源的胞嘧啶脱氨酶rAPOBEC1核苷酸片段和大肠杆菌内源DNA解旋酶DnaB核苷酸片段，所述rAPOBEC1核苷酸片段和DnaB核苷酸片段之间通过柔性连接肽linker核苷酸片段连接。本发明提供的基因编辑质粒载体能够高效的辅助大肠杆菌自适应进化，可以将大肠杆菌基因组上的任意位点的胞嘧啶突变成胸腺嘧啶，实现基因组高频率随机突变，帮助菌株在逆境环境中耐受进化。

公开(公告)号：CN114107235B

公开(公告)日：2023-07-14

申请号：CN202111263602.2

申请日：2021-10-28

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 张博 ,  柳志强 ,  周登峰 ,  倪叶雯 ,  黄良刚 ,  周俊平 ,  郑裕国

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12P33/02

Abstract: 本发明公开了一种3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体、编码基因、载体及应用，属于酶工程技术领域。本发明的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体，由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体的第214位和/或第499位经定点突变获得。本发明通过多序列氨基酸比对，进行定点突变，提高了3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶的催化效率，进一步提高了3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶产量。本发明构建的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶的重组大肠杆菌可将3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶酶活较出发菌株提高1.5倍，改造后的基因工程菌产酶能力显著提高，更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。