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公开(公告)号：CN113337539A
公开(公告)日：2021-09-03
申请号：CN202110583896.0
申请日：2021-05-27
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明涉及植物基因工程技术领域，且公开了一种适用于陆地棉的基因精准高效编辑的方法，所述该载体的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。该适用于陆地棉的基因精准高效编辑的方法，通过对含有棉花内源启动子pGhU6‑7的pRGEB32‑GhU6.7‑NPTⅡ载体进行改造，以BeYDV双生病毒中复制子元件为载体，将sgRNA序列构建在复制环内，构建了在棉花中具有基因编辑功能的载体BeYDV‑Cas9，选取GhCLA为目标基因验证BeYDV‑Cas9在棉花中的应用，并且设计1个靶标，利用农杆菌介导的遗传转化将BeYDV‑Cas9基因编辑系统导入棉花基因组，对转基因植株进行Sanger测序，检测本发明在异源四倍体棉花基因组中的编辑效率类型，从而有效的解决了传统的CRISPR‑Cas9系统在对陆地棉进行基因编辑时无能为力，且并无可行有效编辑工具的问题。
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公开(公告)号：CN113073112A
公开(公告)日：2021-07-06
申请号：CN202110487854.7
申请日：2021-04-30
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/82 , C12N15/113 , A01H4/00 , A01H5/12 , A01H6/82
Abstract: 本发明涉及植物基因工程技术领域，且公开了一种用植物介导CRISPR技术挖掘烟草青枯病抗性基因的方法，包括以下步骤：1)、2)和3)。该用植物介导CRISPR技术挖掘烟草青枯病抗性基因的方法，以NtTOGT基因序列作为靶序列构建了CRISPR载体，利用农杆菌介导的遗传转化方法将所述的NtTOGT基因靶标序列成功导入烟草品种岩烟97中，得到了NtTOGT基因编辑突变体材料，将该转基因烟草于温室中，用高通量的检测方法对突变体材料进行检测获得基因编辑情况，针对编辑率较高的株系进行接菌试验，通过接菌实验结果，表明经过基因编辑的烟草可以导致NtTOGT基因的表达量下调，进而影响烟草植株抗青枯病的能力，导致植株抗病性降低，说明NtTOGT基因可能与烟草抗青枯病相关。
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公开(公告)号：CN110283840B
公开(公告)日：2021-04-13
申请号：CN201910290886.0
申请日：2019-04-11
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及陆地棉基因组的精确高效编辑方法。本发明对含有棉花内源启动子pGhU6‑7的pRGEB32‑GhU6.7‑NPTⅡ载体进行改造，以LbCpf1蛋白取代原有的Cas9蛋白，构建在棉花中具有编辑能力的载体GhRBE3。选取GhCLA为目标基因验证GhRBE3在棉花中的应用。设计1个靶标，利用农杆菌介导的遗传转化将Cpf1基因编辑系统导入棉花基因组，对转基因植株进行Sanger测序和高通量测序，检测本发明在异源四倍体棉花基因组中的编辑效率及脱靶效应。本发明具有良好的编辑效率和特异性。
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公开(公告)号：CN107815457B
公开(公告)日：2020-09-29
申请号：CN201610820459.5
申请日：2016-09-13
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于昆虫基因工程技术领域，具体涉及一种分离的中黑盲蝽△9‑desaturase基因及其编码的蛋白。本发明分离的中黑盲蝽△9‑desaturase基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，其编码的蛋白质序列如SEQ ID NO：2所示。本发明还包括中黑盲蝽△9‑desaturase基因作为RNA干扰序列的应用，所述的序列对中黑盲蝽△9‑desaturase基因具有良好的沉默效果。注射该干扰序列，显著增加了其信息素组分4‑氧代‑反‑2‑己烯醛的含量，改变了信息素的混合比，显著抑制了雌虫对雄虫的引诱能力。进一步，本发明的蛋白可作为生物信息素开发，或可用于转基因抗虫植物的开发以及用于中黑盲蝽的生物防治中。
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公开(公告)号：CN111378684A
公开(公告)日：2020-07-07
申请号：CN202010179130.1
申请日：2020-03-15
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种热诱导的基因编辑系统CRISPR-Cas12b首次在陆地棉中的应用。对含有棉花内源启动子pGhU6-7的pRGEB32-GhU6.7-NPT Ⅱ载体进行改造，以密码子优化合成的AaCas12b蛋白取代原Cas9蛋白，构建棉花中具有编辑能力的载体。选取GhCLA为目标基因验证载体在棉花中的应用。设计2个靶标，利用农杆菌介导的转化将Cas12b编辑系统导入棉花基因组，使用三种温度不同时间处理下胚轴，转基因植株进行相关测序，检测异源四倍体棉花基因组中的编辑效率和全基因组检测脱靶效应。本发明使用特定的温度和处理时间得到良好的编辑效率和特异性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111286515A
公开(公告)日：2020-06-16
申请号：CN201910011587.9
申请日：2019-01-05
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及利用植物介导的RNAi创造棉花抗绿盲蝽种质的方法。本发明以绿盲蝽LIM基因的保守序列作为靶序列构建了RNAi载体，利用农杆菌介导的遗传转化方法将所述的绿盲蝽LIM基因成功导入棉花宿主，得到了表达绿盲蝽LIM基因双链RNA的转基因棉花。将该转基因棉花种植于室外网室中，接虫实验表明该转基因棉花可以导致绿盲蝽LIM基因的表达量下调,进而导致其无法完成正常羽化而死亡，最终导致绿盲蝽种群数量减少，从而达到抗虫的效果。本发明的转基因棉花对绿盲蝽具有抵抗能力。且转基因棉花可以与BT棉杂交生产多抗虫棉花的新种质。
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公开(公告)号：CN107815457A
公开(公告)日：2018-03-20
申请号：CN201610820459.5
申请日：2016-09-13
Applicant: 华中农业大学
CPC classification number: C12N9/0071 , A01N57/16 , C12N15/113 , C12N15/8286 , C12Y114/19001
Abstract: 本发明属于昆虫基因工程技术领域，具体涉及一种分离的中黑盲蝽△9-desaturase基因及其编码的蛋白。本发明分离的中黑盲蝽△9-desaturase基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，其编码的蛋白质序列如SEQ ID NO：2所示。本发明还包括中黑盲蝽△9-desaturase基因作为RNA干扰序列的应用，所述的序列对中黑盲蝽△9-desaturase基因具有良好的沉默效果。注射该干扰序列，显著增加了其信息素组分4-氧代-反-2-己烯醛的含量，改变了信息素的混合比，显著抑制了雌虫对雄虫的引诱能力。进一步，本发明的蛋白可作为生物信息素开发，或可用于转基因抗虫植物的开发以及用于中黑盲蝽的生物防治中。
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公开(公告)号：CN106801065A
公开(公告)日：2017-06-06
申请号：CN201510833618.0
申请日：2015-11-25
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种提高棉花再生及转化效率的方法及应用。通过再生能力比较筛选获得农艺性状优良的棉花转基因受体材料Y668，以Y668为受体转GFP基因获得的分离群体T1代中的阴性单株Null为组织培养受体材料，经过连续两次的体细胞再生获得R2群体，最后经过典型单株选择、自交获得再生能力比亲本提高3倍的转化受体材料Jin 668。本发明还公开了Jin 668在棉花转基因中的应用。以本发明培育的Jin668作为转基因受体材料,将多个抗虫、提高油份的基因导入棉花宿主细胞，得到表达外源基因的转基因棉花植株。
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公开(公告)号：CN103421812A
公开(公告)日：2013-12-04
申请号：CN201310160491.1
申请日：2013-05-03
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12N15/82 , C12N15/84 , A01H5/00
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种从花花柴(Karelinia caspia)植物中鉴定的基因KcNHX1的分离克隆、功能验证和应用。本发明获得的编码基因的cDNA序列如SEQ ID NO：1所示；其编码基因的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明还公开了基因KcNHX1在拟南芥转基因中的应用，本发明克隆的基因可提高拟南芥对高温的耐受性及在高温条件下的产量，验证其具有提高拟南芥花器官中生长素含量的功能。
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公开(公告)号：CN101117634A
公开(公告)日：2008-02-06
申请号：CN200710052665.7
申请日：2007-07-09
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于棉花基因工程技术领域，具体涉及一种分离棉花叶绿体DNA的新方法。包括：以幼嫩的叶片为材料，用普通家用榨汁机将叶片充分匀浆，利用A、B、C、D四种缓冲溶液，常规速度离心，依次通过完整叶绿体的分离，裂解及叶绿体DNA(cpDNA)分离纯化三个连续步骤，最终获得棉花叶绿体DNA纯品。本发明制备分离的叶绿体DNA质量较高，紫外分光光度计检测表明，本发明制备的DNA样品的D260nm/D280nm在1.6－1.8之间；产率高达1－10μg cpDNA/g叶片样品。经过验证，以分离的cpDNA为模板完全能够满足特异性酶切、RAPD、PCR和目标基因序列的克隆等常规分子生物学操作的需要。与现有技术相比，本发明不需要超高速离心机，也不需要通过蔗糖密度梯度离心分离等设备和步骤。
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