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公开(公告)号：CN107475445A
公开(公告)日：2017-12-15
申请号：CN201710703618.8
申请日：2017-08-16
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于RT-PCR和RFLP技术鉴别鸡传染性法氏囊病病毒强弱毒株的试剂盒及其应用。所述的试剂盒含有用于扩增鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的引物对以及SpeI、SacI和StuI限制性内切酶。本发明所建立的基于RT-PCR和RFLP技术的鉴别诊断方法能够区分IBDV的超强毒株和弱毒株，且步骤简单便于操作，本发明的提出为IBDV强弱毒株的快速鉴别诊断提供了一种新的有效技术手段。
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公开(公告)号：CN103409558A
公开(公告)日：2013-11-27
申请号：CN201310317342.1
申请日：2013-07-25
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一套用于同时检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒的多重PCR引物组，属于病毒检测领域。本发明的引物组由三对引物组成，其中，用于猪流行性腹泻病毒检测的引物序列分别为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；用于猪传染性胃肠炎病毒检测的引物序列分别为SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；用于猪轮状病毒检测的引物序列分别为SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示。应用本发明引物序列通过多重PCR方法可同时对猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒的不同毒株进行检测，结果均为阳性，而对其他常见猪源病毒检测结果均为阴性，说明本发明的引物组特异性强、重复性好；对病毒cDNA梯度稀释后进行PCR检测，说明该引物灵敏度高。
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公开(公告)号：CN1311073C
公开(公告)日：2007-04-18
申请号：CN200510009883.3
申请日：2005-04-08
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N5/18
Abstract: 本发明提供的是一种抗猪传染性胃肠炎重组N蛋白杂交瘤细胞株。以纯化的重组TGEV N蛋白免疫BALB/c小鼠制备诊断用单克隆抗体。取免疫脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，用间接ELISA方法进行筛选，经过3次克隆筛选，最终获得一株分泌抗重组TGEV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为E10F10D5，其染色体平均计数为87±10对，间接ELISA检测制备的腹水抗体效价达1∶12800。本发明以生物技术手段纯化重组TGEV N蛋白，制备诊断抗原，建立检测抗体的Dot-ELISA检测方法，制备快诊膜，缩短检测时间；建立间接ELISA检测方法，检测TGEV感染和抗体效价测定，为建立标准化诊断试剂盒奠定基础；为建立快速检测病毒抗原的诊断方法奠定物质基础。
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公开(公告)号：CN1677106A
公开(公告)日：2005-10-05
申请号：CN200510009701.2
申请日：2005-02-02
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/531 , G01N1/28
Abstract: 本发明提供的是取发病猪的粪便与裂解液以1∶8－12的比例进行混合，室温静置10分钟，2000g离心2分钟后，上清液即为含有高滴度病毒的抗原试剂，其中所用的裂解液是含有500mmol/L Tris－HCl，pH8.3，20％PVP－40，1％PEG 6000，140mmol/L NaCl和0.05％Tween 20的溶液。本发明的方法对猪传染性胃肠炎发病猪粪便使用特异的裂解液进行裂解，使病毒从细胞中释放出来从而为诊断本病提供了一种特异性强的诊断抗原，大大缩短了疾病诊断的时间，为猪传染性胃肠炎的及早发现及预防争得了宝贵的时间和经济效益。
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公开(公告)号：CN118853524A
公开(公告)日：2024-10-29
申请号：CN202411328287.0
申请日：2024-09-24
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/12 , C12N15/50 , C12N15/74 , A61K39/385 , A61K39/215 , A61K38/17 , A61P31/14 , C12R1/225
Abstract: 本发明公开了一种共表达猪β‑防御素2与PEDV S1蛋白的重组猪源干酪乳杆菌及其构建方法和应用，属于生物技术领域。本发明以前期构建的表达PEDV S1基因的猪源营养缺陷型副干酪乳杆菌作为口服黏膜传递载体，并通过串联提高pBD2蛋白的外源表达量，构建重组乳杆菌n×pBD2/S1‑ΔHLJ‑27。针对PEDV的肠道黏膜感染，通过该重组乳杆菌对S1蛋白的组成型表达，刺激黏膜特异性免疫应答，从而建立阻断PEDV感染的第一道防线；与此同时，为了增强口服疫苗诱导的黏膜免疫效果，利用该重组乳杆菌进行分泌表达串联的pBD2蛋白，通过外源增加pBD2表达量来增强肠道免疫应答，提高机体获得性免疫水平，进而将口服黏膜疫苗的优势发挥更佳。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111073859B
公开(公告)日：2021-09-28
申请号：CN201911280787.0
申请日：2019-12-09
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/08 , G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种检测牛细小病毒的双抗体夹心ELISA试剂盒及其应用。本发明使用纯化后的兔抗BPV VP2蛋白多克隆抗体作为捕获抗体，使用由保藏号为:CGMCC No.18896的杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体作为检测抗体，建立了双抗体夹心ELISA方法。特异性试验结果表明该方法特异性良好，与BRV、PRV、PEDV和TGEV均不发生反应。灵敏性试验表明该方法对病毒的最低检出量为3.125×102.8TCID50/mL。重复性试验表明该方法变异系数均小于10％，确定该方法具有良好的重复性。通过对临床样品的检测发现，双抗体夹心ELISA方法与PCR方法的检测结果一致，符合率为100％。本发明的提出可用于牛细小病毒的诊断，并为牛细小病毒感染的防控提供了一种快速检测方法和监测手段。
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公开(公告)号：CN107475445B
公开(公告)日：2021-01-12
申请号：CN201710703618.8
申请日：2017-08-16
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于RT‑PCR和RFLP技术鉴别鸡传染性法氏囊病病毒强弱毒株的试剂盒及其应用。所述的试剂盒含有用于扩增鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的引物对以及SpeI、SacI和StuI限制性内切酶。本发明所建立的基于RT‑PCR和RFLP技术的鉴别诊断方法能够区分IBDV的超强毒株和弱毒株，且步骤简单便于操作，本发明的提出为IBDV强弱毒株的快速鉴别诊断提供了一种新的有效技术手段。
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公开(公告)号：CN106190986B
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201610533234.1
申请日：2016-07-07
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种抗蓝舌病病毒血清4型VP2蛋白的单克隆抗体，分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株及用途。本发明以pET‑28a为载体构建表达的VP2‑4B蛋白作为免疫原免疫小鼠，以pMAL‑c5x为载体构建表达的VP2‑4B蛋白作为抗原，筛选阳性杂交瘤细胞，最终筛选得到一株能够稳定分泌抗BTV4‑VP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，实验证明，该杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体BTV4‑VP2‑1B6能够与BTV4‑VP2蛋白发生特异性反应，而与其他血清型VP2蛋白不发生反应。本发明的单克隆抗体BTV4‑VP2‑1B6为建立BTV4与其他血清型的血清学鉴别诊断方法奠定了基础。
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公开(公告)号：CN107179408B
公开(公告)日：2019-01-22
申请号：CN201710318544.6
申请日：2017-05-08
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/68
Abstract: 本发明公开了一种用于蓝舌病病毒型特异性检测的竞争ELISA检测试剂盒及其应用。所述试剂盒包括以下两组组分：组分I中包括包被蓝舌病病毒抗原I的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体I，所述的单克隆抗体I由杂交瘤细胞株1B6分泌产生；组分II中包括包被蓝舌病病毒抗原II的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体II，所述的单克隆抗体II由杂交瘤细胞株4A‑1G7分泌产生。本发明利用制备的两株4型BTV VP2单克隆抗体4A‑1G7以及1B6建立了蓝舌病病毒型特异性检测的联合竞争ELISA检测方法，该检测方法短时间内可以用于初步区分不同型蓝舌病感染的动物血清，实验条件要求低，适合于大规模的BTV血清抗体检查。
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公开(公告)号：CN104911152B
公开(公告)日：2018-03-30
申请号：CN201510309061.0
申请日：2015-06-08
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明涉及一株重组传染性造血器官坏死病毒rIHNV HLJ‑09株及其构建方法和应用，属于生物技术领域。所述病毒rIHNV HLJ‑09株的微生物保藏号为CGMCC No.8606，通过感染重组病毒的细胞传代实验证明此病毒能够稳定传代。重组病毒rIHNV HLJ‑09腹腔接种虹鳟幼鱼，结果导致幼鱼发病死亡，致死率可达90％，表明此病毒具有与亲代HLJ‑09株病毒相似的致病特性。进一步，本发明中利用rIHNV HLJ‑09反向遗传系统，将rIHNV HLJ‑09的NV ORF用报告基因EGFP(绿色荧光蛋白)编码基因替换，成功拯救病毒，拯救病毒命名为rIHNV‑EGFP。激光共聚焦显微镜观察rIHNV‑EGFP病毒侵染的细胞可观察到明显的绿色荧光，说明该rIHNV HLJ‑09病毒株可应用于表达外源蛋白。
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