公开(公告)号：CN101886075B

公开(公告)日：2011-12-21

申请号：CN201010215527.8

申请日：2010-07-02

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 孔庆然 ,  武美玲 ,  刘忠华

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/09

Abstract: 本发明公布了猪ROSA26启动子序列及其应用，根据鼠，牛，人中ROSA26位点的序列比对得到保守序列，根据保守序列设计引物扩增得到猪内源ROSA26启动子；得到的ROSA26启动子用于外源基因的GFP的表达，GFP蛋白在猪中得到广泛稳定的表达，可解决转基因猪外源基因表达的不稳定性以及位置效应的不可预知性，为工业化生产提供了可能。

公开(公告)号：CN114081953B

公开(公告)日：2023-10-17

申请号：CN202111217352.9

申请日：2021-10-19

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 颜廷胜 ,  刘忠华 ,  许淼 ,  胡岚馨

IPC: A61K45/06 ,  A61K47/60 ,  A61K47/69 ,  A61K49/00 ,  A61K31/69 ,  A61K31/704 ,  A61K38/05 ,  A61P35/00 ,  C08G81/00

Abstract: 一种前药树状聚合物纳米载体及其制备方法与应用，属于纳米药物载体材料领域，所述纳米载体由逐级缩氨酸法、疏水自组装和交联化反应制备。该系统具有多功能化的靶向分子配体，这些靶向配体既可以作为靶向元件，提高载体的主动靶向能力，又可作为尺寸转换元件，提高药物肿瘤的渗透能力。该药物传递系统可通过初级药物释放，改变肿瘤局部微环境，从而引发次级药物释放，实现肿瘤的级联治疗。本发明针对药物传递过程中面临的多重生物屏障和复杂动态微环境，采用多重靶向、尺寸转换和药物分级释放的方法，有望实现图像引导的精准、高效的肿瘤级联放大治疗。

公开(公告)号：CN108853484A

公开(公告)日：2018-11-23

申请号：CN201810813305.2

申请日：2018-07-23

Applicant: 东北农业大学 ,  哈尔滨奥普科农生物技术有限责任公司

Inventor： 刘忠华 ,  翁晓刚 ,  张宇霆 ,  刘龑

IPC: A61K38/24 ,  A61K31/566 ,  A61P15/08

Abstract: 一种诱导后备母猪同期发情的方法，属于动物诱导发情和人工授精领域，本发明针对后备母猪发情难以同步的问题，提供了一种诱导后备母猪同期发情的方法，通过给后备母猪在规定的时间内喂食烯丙孕素，再结合在固定时间静脉注射eCG和hCG，使得后备母猪可在预定的时间内同期发情。本发明有利于规模化母猪生产。

公开(公告)号：CN103589682B

公开(公告)日：2018-06-26

申请号：CN201310608158.2

申请日：2013-11-26

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 刘忠华 ,  郇延军 ,  牟彦双 ,  孔庆然 ,  朱江 ,  吕明

IPC: C12N5/075 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明提供了一种提高体外受精胚胎发育率的方法，在确定卵母细胞成熟培养时间范围的基础上，检测成熟卵母细胞中谷胱甘肽含量，将卵母细胞体外成熟培养至谷胱甘肽含量下降前进行体外受精。本发明为今后体外受精胚胎的生产和相关科学研究奠定了基础。

公开(公告)号：CN103602682B

公开(公告)日：2015-09-09

申请号：CN201310562507.1

申请日：2013-11-13

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 尹智 ,  孔庆然 ,  刘忠华

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种抑制IRS2基因表达的shRNA及应用，属于基因工程技术领域。本发明提供的shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1。本发明还提供了一种抑制IRS2基因表达的shRNA干扰载体。根据克隆经对比分析后的猪源IRS2基因保守序列，合成带有BamH Ⅰ和HindⅢ酶切位点干扰片段，并将干扰片段连接到经过BamH Ⅰ和HindⅢ线性化的质粒载体上，经筛选后获得有效干扰载体。本发明提供的shRNA及其干扰载体，能够有效抑制IRS2基因的表达，影响细胞的糖脂代谢，为2型糖尿病模型猪的构建奠定基础。

公开(公告)号：CN104357483A

公开(公告)日：2015-02-18

申请号：CN201410613163.7

申请日：2014-11-04

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 孔庆然 ,  解炳腾 ,  刘忠华

IPC: C12N15/877

Abstract: 本发明公开了一种提高猪细胞重编程能力的方法及应用，属于细胞移植和胚胎发育技术领域。本发明所提供的方法是在获取并培养猪卵母细胞和猪胎儿成纤维细胞后，进行体细胞核移植，最后进行iPS诱导并进行碱性磷酸酶染色。方法中利用小分子药物GSK126进行了处理，其使用方式有以下三种：1)猪胎儿成纤维细胞在核移植前利用小分子药物GSK126进行处理；2)在猪胎儿成纤维细胞体细胞核移植后，利用小分子药物GSK126处理融合胚胎；3)用于iPS诱导的猪胎儿成纤维细胞，在培养成熟后接种前利用小分子药物GSK126进行处理。本发明所提供的方法可以显著提高克隆胚胎的发育率和iPS诱导效率，提高幅度分别达到44.7％和111.3％。

公开(公告)号：CN103602682A

公开(公告)日：2014-02-26

申请号：CN201310562507.1

申请日：2013-11-13

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 孔庆然 ,  黄天晴 ,  刘忠华

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种抑制IRS2基因表达的shRNA及应用，属于基因工程技术领域。本发明提供的shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1。本发明还提供了一种抑制IRS2基因表达的shRNA干扰载体。根据克隆经对比分析后的猪源IRS2基因保守序列，合成带有BamH Ⅰ和HindⅢ酶切位点干扰片段，并将干扰片段连接到经过BamH Ⅰ和HindⅢ线性化的质粒载体上，经筛选后获得有效干扰载体。本发明提供的shRNA及其干扰载体，能够有效抑制IRS2基因的表达，影响细胞的糖脂代谢，为2型糖尿病模型猪的构建奠定基础。

公开(公告)号：CN101956003A

公开(公告)日：2011-01-26

申请号：CN201010251752.7

申请日：2010-08-12

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 刘忠华 ,  牟彦双 ,  孔庆然

IPC: C12Q1/68

Abstract: 猪基因组中外源基因整合位点的检测方法，本发明涉及外源基因整合位点的检测方法。本发明解决了现有外源基因整合位点的检测方法操作复杂，误差较大的问题。方法：一、分别针对TgInS1、TgInS2和TgInS3外源基因插入基因组中的位点进行PCR扩增；二、电泳检测，即实现了猪基因组中外源基因整合位点的检测。本发明的方法操作简单，且与现有的外源基因整合位点的检测方法相比较，人为误差小，检测结果准确。

公开(公告)号：CN118995709A

公开(公告)日：2024-11-22

申请号：CN202411165770.1

申请日：2024-08-23

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 牟彦双 ,  刘忠华 ,  徐小康 ,  韩静鑫 ,  张晓

IPC: C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/85

Abstract: 本发明公开一种提高基因编辑效率的重组型pegRNA及其应用，属于生物技术领域。本发明的目的是为了提高基因的编辑效率，提供一种基因编辑的工具。一种提高基因编辑效率的重组型pegRNA，以pegRNA序列为出发序列，将53位至56位碱基替换为锁状序列。为基因的编辑提供更有效的工具。

公开(公告)号：CN117925804A

公开(公告)日：2024-04-26

申请号：CN202410048332.0

申请日：2024-01-12

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 尹智 ,  翁晓刚 ,  芦春雪 ,  王璐瑶 ,  张宇霆 ,  刘忠华

IPC: C12Q1/6879 ,  C12Q1/6888 ,  C12Q1/6848 ,  C12N15/11

Abstract: 一种基于两步巢式PCR技术鉴定猪胚胎单细胞性别的方法，属于生物工程技术领域。本发明为解决现有技术中的胚胎细胞性别鉴定技术存在操作繁琐、操作时间长、技术要求较高，准确性、稳定性和灵敏性较低的技术问题，提供了一种基于两步巢式PCR技术鉴定猪胚胎单细胞性别的方法，通过对巢式PCR鉴定体系进行优化，将常规PCR酶替换为KOD酶，发现其扩增效果较好；提供的鉴定方法可以实现10个以上细胞样本的性别鉴定，确定AMEL引物对扩增效率较高，灵敏度更强；本发明提供的巢式PCR技术极大地提高了PCR的灵敏性，获得的电泳条带清晰无非特异性扩增，具有操作简单、鉴定周期短的优点，适合产业应用。