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公开(公告)号：CN102533857B
公开(公告)日：2014-05-07
申请号：CN201210039495.X
申请日：2012-02-21
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873
Abstract: 本发明公开了一种包含HBD3气管上皮细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞，构建了一种包含HBD3气管上皮细胞异性表达载体Muc1-loxp-EGFP-HBD3，以及基于该载体的包含HBD3气管上皮细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞系，利用该细胞系作为核供体细胞，为解决奶牛结核病的转基因奶牛提供坚实的基础。本发明通过电转染法将外源性表达载体Muc1-loxp-EGFP-HBD3导入牛胎儿成纤维细胞，荧光显微镜观察标记基因EGFP的表达情况，并经G418筛选获得阳性细胞，经PCR鉴定，证实目的基因HBD3整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组；最后，将转染HBD3基因的牛胎儿成纤维细胞作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚。
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公开(公告)号：CN102296090B
公开(公告)日：2013-04-24
申请号：CN201110249842.7
申请日：2011-08-29
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/877
Abstract: 本发明公开了一种基于体细胞核移植构建的牛体细胞克隆胚的处理方法，将待移植的牛体细胞注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，在电融合之后1h，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚用1μM的Oxamflatin处理牛体细胞克隆胚胎12h，可以显著提高牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量，可高效体外生产牛体细胞克隆胚胎。
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公开(公告)号：CN101851638A
公开(公告)日：2010-10-06
申请号：CN201010142997.6
申请日：2010-04-09
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/877 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种包含Ipr1巨噬细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞，构建了一种包含Ipr1巨噬细胞异性表达载体Psp-EGFP-Ipr1，以及基于该载体的包含包含Ipr1巨噬细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞系，利用该细胞系作为核供体细胞，为解决奶牛结核病的转基因奶牛提供坚实的基础。本发明通过电转染法将外源性表达载体Psp-EGFP-Ipr1导入牛胎儿成纤维细胞，荧光显微镜观察标记基因EGFP的表达情况，并经G418筛选获得阳性细胞，经PCR鉴定，证实目的基因Ipr1整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组；最后，将转染Ipr1基因的牛胎儿成纤维细胞作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚。
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公开(公告)号：CN101851602A
公开(公告)日：2010-10-06
申请号：CN200910021760.X
申请日：2009-03-31
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 一种牛体细胞克隆胚胎培养液及其培养方法，该培养液包括市售牛体细胞克隆胚胎输卵管培养液(mSOF)，还包括激活素A，该激活素A的浓度是20～80ng/mL；其培养方法是用常规条件培养牛体细胞颗粒细胞单层3天，从第4天开始，向市售牛体细胞克隆胚胎输卵管培养液(mSOF)加入浓度为20～80ng/mL的激活素A，得到牛体细胞克隆胚胎培养液，再用该牛体细胞克隆胚胎培养液5天既得牛体细胞克隆胚胎。本发明提高了胚胎的8/16细胞率、囊胚率、孵化率，使得Na/K-ATPase、Glut-1、ActR II、Smad2等基因表达水平显著提高。特别适用于牛体细胞克隆领域的应用。
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公开(公告)号：CN112795667B
公开(公告)日：2023-05-26
申请号：CN202110302857.9
申请日：2021-03-22
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6858
Abstract: 本发明公开了一种牛FRAS1基因插入/缺失突变的检测方法及其应用。以牛全基因组DNA为模板，通过PCR扩增牛FRAS1基因部分片段，应用琼脂糖凝胶电泳鉴定个体FRAS1基因15‑bp缺失突变位点的基因型。根据性状关联分析结果，FRAS1基因15‑bp缺失突变位点的基因型与母牛繁殖性状显著相关。因此，FRAS1基因15‑bp缺失突变位点可用于母牛繁殖性状的早期标记辅助选择，以加快建立遗传资源优良的牛群体。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111157710A
公开(公告)日：2020-05-15
申请号：CN202010047929.5
申请日：2020-01-16
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: G01N33/48
Abstract: 本发明公开了一种挑选牛体外可移植胚胎的方法，属于家畜胚胎工程技术领域。本发明公开的一种挑选牛体外可移植胚胎的方法，从胚胎化学激活完毕或受精完毕开始计为第零天，在胚胎培养至第六天和第七天时进行挑选；挑选时第六天选择致密化桑葚胚及早期囊胚，挑选时第七天选择有腔囊胚及腔扩张囊胚。本发明公开的一种挑选牛体外可移植胚胎的方法，在进行体外胚胎移植之前进行挑选，能提高体外胚胎质量，从而保障移植后的怀孕率，以减少未怀孕牛的出现率并降低生产成本。
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公开(公告)号：CN109679998B
公开(公告)日：2020-04-28
申请号：CN201910023959.X
申请日：2019-01-10
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种通过miRNA靶向定点突变MSTN基因并同时定点整合PPARγ基因的载体及重组细胞，载体包括Cas9切割表达载体和打靶载体。本发明将Cas9切割表达载体和打靶载体共同转染宿主细胞，构建重组细胞株，可以作为生产转基因克隆胚胎的核移植供体细胞，抑制MSTN的功能发挥，同时实现PPARγ在骨骼肌细胞中特异性表达，进而为快速、高效研制优质转基因肉牛新品种提供支撑。
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公开(公告)号：CN105524940B
公开(公告)日：2019-04-05
申请号：CN201511025413.6
申请日：2015-12-31
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873
Abstract: 本发明公开了一种基于组蛋白甲基化水平的修饰提高牛克隆效率的载体、细胞及方法。本发明提供的载体包括阻遏物表达载体和含有阻遏操纵子的表达载体，在转染时将两者共转染到供体细胞中；所述的含有阻遏操纵子的表达载体中插入有牛KDM4B或牛KDM4C基因。将阳性转染的细胞作为供体细胞，再将其注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚培养至36h时，诱导表达牛KDM4B和KDM4C。本发明可以有效减弱体细胞克隆胚在合子激活时期的组蛋白H3K9me3表观遗传修饰水平，从而显著提高后期牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量，可高效体外生产牛体细胞克隆胚胎，胚胎移植后克隆牛的出生率也显著提高。
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公开(公告)号：CN102827873A
公开(公告)日：2012-12-19
申请号：CN201210271661.9
申请日：2012-07-31
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种Cre融合蛋白功能检测细胞及修饰后的Cre融合蛋白。Cre融合蛋白功能检测细胞，宿主细胞为HEK293细胞，将pAcmv-stop-EGFP载体和phiC31整合酶共转染宿主细胞。通过phiC31整合酶的作用，使得携带检测Cre重组酶功能的LoxP元件的载体以单拷贝的形式整合到HEK293细胞系的假attP位点，为研究Cre融合蛋白穿膜效率和生物活性提供稳定可靠的细胞模型。经TAT和NLS多肽修饰的Cre融合蛋白HNTC，其穿膜效率高、生物活性好，可有效地作为哺乳动物细胞染色体水平上基因操作的工具。
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公开(公告)号：CN102628061A
公开(公告)日：2012-08-08
申请号：CN201210100590.6
申请日：2012-04-09
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873
Abstract: 本发明公开了一种HBD3乳腺特异性表达载体及构建的重组细胞，该载体包含带有信号转导肽的HBD3基因，分别在HBD3基因的上游和下游设有CSN5和CSN3作为调控元件。所述的重组细胞其宿主细胞为牛胎儿成纤维细胞，将外源性表达载体pARNG-HBD3在φC31整合酶的作用下整合到假attP位点，通过药物筛选取得阳性克隆，再经过Cre重组酶的处理，去除载体上两个同向LoxP序列之间的抗生素筛选标记。以去除抗生素筛选标记的包含HBD3的牛胎儿成纤维细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞，通过SCNT获得基因克隆胚，将这些胚胎移入受体牛的子宫有望生产出无抗生素筛选标记的转HBD3基因的奶牛。
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