公开(公告)号：CN101851638A

公开(公告)日：2010-10-06

申请号：CN201010142997.6

申请日：2010-04-09

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌科元克隆股份有限公司

Inventor： 宋永利 ,  张涌 ,  华松 ,  何小宁 ,  兰杰 ,  王勇胜 ,  刘军 ,  贺小英

IPC: C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种包含Ipr1巨噬细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞，构建了一种包含Ipr1巨噬细胞异性表达载体Psp-EGFP-Ipr1，以及基于该载体的包含包含Ipr1巨噬细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞系，利用该细胞系作为核供体细胞，为解决奶牛结核病的转基因奶牛提供坚实的基础。本发明通过电转染法将外源性表达载体Psp-EGFP-Ipr1导入牛胎儿成纤维细胞，荧光显微镜观察标记基因EGFP的表达情况，并经G418筛选获得阳性细胞，经PCR鉴定，证实目的基因Ipr1整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组；最后，将转染Ipr1基因的牛胎儿成纤维细胞作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚。

公开(公告)号：CN101851602A

公开(公告)日：2010-10-06

申请号：CN200910021760.X

申请日：2009-03-31

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 华松 ,  张涌 ,  兰杰 ,  刘永刚 ,  宋永利 ,  王勇胜 ,  刘军

IPC: C12N5/06 ,  A01K67/02

Abstract: 一种牛体细胞克隆胚胎培养液及其培养方法，该培养液包括市售牛体细胞克隆胚胎输卵管培养液(mSOF)，还包括激活素A，该激活素A的浓度是20～80ng/mL；其培养方法是用常规条件培养牛体细胞颗粒细胞单层3天，从第4天开始，向市售牛体细胞克隆胚胎输卵管培养液(mSOF)加入浓度为20～80ng/mL的激活素A，得到牛体细胞克隆胚胎培养液，再用该牛体细胞克隆胚胎培养液5天既得牛体细胞克隆胚胎。本发明提高了胚胎的8/16细胞率、囊胚率、孵化率，使得Na/K-ATPase、Glut-1、ActR II、Smad2等基因表达水平显著提高。特别适用于牛体细胞克隆领域的应用。