公开(公告)号：CN102517294A

公开(公告)日：2012-06-27

申请号：CN201110402670.2

申请日：2011-12-07

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌科元克隆股份有限公司

Inventor： 何小宁 ,  张涌 ,  权富生 ,  王勇胜

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877

Abstract: 本发明公开了一种基于Ipr1基因构建的巨噬细胞异性打靶载体和重组细胞，通过在Ipr1基因5′端连接MSR1启动子使Ipr1基因在牛的巨噬细胞中特异的高效表达；并进一步构建重组基因LA-MSR1-Ipr1-SA，使目的基因定点整合在牛28号染色体SP-A与MAT1A基因之间。构建了Ipr1巨噬细胞特异性打靶载体pLMIS，将其转染到新生牛耳成纤维细胞，通过G418和GCV正负筛选，构建转基因的新生牛耳成纤维细胞系，作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚；胚胎移植后，生产出定点插入Ipr1基因的转基因牛5头，其中4头存活，转基因牛对M.bovis有抗性。

公开(公告)号：CN102517294B

公开(公告)日：2013-08-07

申请号：CN201110402670.2

申请日：2011-12-07

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌科元克隆股份有限公司

Inventor： 张涌 ,  何小宁 ,  权富生 ,  王勇胜

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877

Abstract: 本发明公开了一种基于Ipr1基因构建的巨噬细胞异性打靶载体和重组细胞，通过在Ipr1基因5′端连接MSR1启动子使Ipr1基因在牛的巨噬细胞中特异的高效表达；并进一步构建重组基因LA-MSR1-Ipr1-SA，使目的基因定点整合在牛28号染色体SP-A与MAT1A基因之间。构建了Ipr1巨噬细胞特异性打靶载体pLMIS，将其转染到新生牛耳成纤维细胞，通过G418和GCV正负筛选，构建转基因的新生牛耳成纤维细胞系，作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚；胚胎移植后，生产出定点插入Ipr1基因的转基因牛5头，其中4头存活，转基因牛对M.bovis有抗性。

公开(公告)号：CN101851638A

公开(公告)日：2010-10-06

申请号：CN201010142997.6

申请日：2010-04-09

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌科元克隆股份有限公司

Inventor： 宋永利 ,  张涌 ,  华松 ,  何小宁 ,  兰杰 ,  王勇胜 ,  刘军 ,  贺小英

IPC: C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种包含Ipr1巨噬细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞，构建了一种包含Ipr1巨噬细胞异性表达载体Psp-EGFP-Ipr1，以及基于该载体的包含包含Ipr1巨噬细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞系，利用该细胞系作为核供体细胞，为解决奶牛结核病的转基因奶牛提供坚实的基础。本发明通过电转染法将外源性表达载体Psp-EGFP-Ipr1导入牛胎儿成纤维细胞，荧光显微镜观察标记基因EGFP的表达情况，并经G418筛选获得阳性细胞，经PCR鉴定，证实目的基因Ipr1整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组；最后，将转染Ipr1基因的牛胎儿成纤维细胞作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚。