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公开(公告)号：CN111944887A
公开(公告)日：2020-11-17
申请号：CN202010868373.6
申请日：2020-08-26
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6879 , C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , G01N33/74 , G01N1/28 , G01N1/30 , G01N1/38 , C12N15/867 , C12N15/12 , A01K67/027
Abstract: 本发明提供了一种鸡雌性性别决定基因的筛选和验证方法，旨在明确JUN基因在鸡雌性分化中的作用，为探明鸡的性别分化及性别控制技术奠定理论和实践基础。本方法适用于鸡性别基因的筛选和验证，验证结果合理准确，实验过程严密周谨。本发明可以证明JUN基因是鸡雌性性别决定的关键调控因子，在雌性分化过程中发挥重要作用。可用于禽类性别决定基因的筛选和验证，本研究为鸡性别控制技术提供了理论支撑，在鸡的养殖业最大化经济效益中奠定基础。此外，本发明中的性别基因筛选和验证方法也可以应用于其他禽类及动物研究中，具有很好的生产和科学研究意义。
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公开(公告)号：CN111925981A
公开(公告)日：2020-11-13
申请号：CN202010868114.3
申请日：2020-08-26
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/0735 , C12Q1/6879 , C12Q1/6888
Abstract: 本发明提供了一种分离鸡雌雄原始生殖细胞的方法，旨在鸡胚孵化至4.5天时,取下生殖嵴，通过血液进行性别鉴定后分离出雌雄鸡胚的PGCs，将为早期干细胞的进一步应用奠定基础。本方法适用于家禽雌雄原始生殖细胞的分离，方法新颖科学，结果准确可靠。本发明可以准确的分离鸡雌雄原始生殖细胞，为PGCs在医学以及发育生物学、禽类嵌合体制备、转基因禽类的方面研究提供准确的原材料。此外，本发明中的细胞分离方法也可以应用于其他禽类研究中，具有很好的推广应用价值。
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公开(公告)号：CN111856033A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010724879.X
申请日：2020-07-24
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/68
Abstract: 一种研究鸡lncRNA互作蛋白的方法，属于生物技术领域。通过设计并合成了LncPGCR的sense和antisense链来进行RNA-pull down，筛选出互作蛋白。进一步结合RIP实验技术，对互作蛋白表达变化进行了探究，丰富了lncRNA与蛋白质互作的研究。本发明的方法简单易行，思路清晰，操作可行性高，在普通研究室就能完成。实验者两个月就能完成。本发明将lncRNA与蛋白质互作的研究扩展到家禽领域，并准确定位到LncPGCR上，刷新了不同物种中lncRNA通过与蛋白质互作发挥功能的范畴。
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公开(公告)号：CN111849873A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010748573.8
申请日：2020-07-30
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/0735 , C12Q1/02 , C12Q1/6888 , G01N33/68
Abstract: 一种诱导鸡的胚胎干细胞自噬的方法，属于生物技术领域。首先通过EdU检测添加了不同浓度雷帕霉素的细胞的增殖能力，其次荧光定量PCR检测自噬相关基因的表达量，最后蛋白免疫印迹检测LC3蛋白的表达量，结合雷帕霉素对细胞增殖效率的影响和诱导自噬发生的效果综合评价从而确定最佳诱导浓度和时间。探讨雷帕霉素对家禽生殖细胞的诱导条件将为自噬在胚胎干细胞向原始生殖细胞的诱导分化中的作用研究奠定基础。
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公开(公告)号：CN110484493A
公开(公告)日：2019-11-22
申请号：CN201910810444.4
申请日：2019-08-29
Applicant: 扬州大学
Abstract: 小分子化合物诱导鸡胚成纤维细胞CEFs成iPSCs的体系建立方法，其特征是，设置不同浓度的小分子化合物组合体系，细胞形态学观察、毒性试验及qRT-PCR检测相关基因的表达，验证小分子化合物在鸡CEFs诱导重编程中是否适用及其适宜诱导浓度；然后利用剔除法结合qRT-PCR、间接免疫荧光、细胞流式分析技术、AKP染色、EDU细胞增值技术手段优化诱导体系，建立适宜鸡CEFs重编程诱导体系。本发明解决了器官来源及免疫排斥问题，同时为个体发育及遗传修饰与保存的研究提供了新方法；为后续诱导多能干细胞的使用奠定理论和技术基础，也为其他物种的化学诱导重编程研究提供参考。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107779428A
公开(公告)日：2018-03-09
申请号：CN201711034939.X
申请日：2017-10-30
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/0735
CPC classification number: C12N5/0611 , C12N2509/00
Abstract: 本发明公开了一种分离鸡胚生殖嵴来源的原始生殖干细胞方法，属于生物技术领域，包括以下步骤：（1）无菌取出21-24HH早期胚胎，使用PBS浸洗3次；（2）在解剖显微镜下去头尾，剥离出生殖嵴，获取早期生殖嵴组织，使用PBS浸洗3次；（3）加入预热的胰蛋白酶进行消化，室温消化5mins，消化时轻轻吹打使生殖嵴组织分散；（4）加入含有小牛血清的培养基终止消化，100目网筛过滤后300转离心5mins，弃上清后使用PGCs培养基进行重悬，重悬后进行差速贴壁培养，培养45mins后吸上清，连续差速贴壁培养3次后即可得到纯度较高的PGCs。本发明提取简便快速，旨在从早期生殖嵴（21-24HH）中分离大量纯净且全能性高的PGCs，为PGCs的应用奠定基础。
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公开(公告)号：CN107043764A
公开(公告)日：2017-08-15
申请号：CN201611215943.1
申请日：2016-12-26
Applicant: 扬州大学
CPC classification number: C12N15/1055 , G01N33/6848
Abstract: 本发明公开了一种基于GST‑Pull Down以及质谱分析技术寻找如皋黄鸡基因互作蛋白的方法：（1）目的基因克隆以及原核表达载体构建；（2）Pet‑49(b)‑GST‑目的基因的原核融合表达载体构建；（3）Pet‑49(b)‑GST‑目的基因进行原核表达；（4）对蛋白进行大量表达和破菌检测；（5）明确蛋白的表达位置后对表达的蛋白进行纯化和浓缩并进行GST‑Pull Down试验；（6）GST‑Pull Down后的蛋白进行蛋白质还原烷基化和胶内酶解并通过LC‑MS/MS鉴定获取目的基因的互作蛋白的序列。本发明能够较快的获得相关基因的互作蛋白；方法简单易行，可重复性强，在普通实验室即可进行。
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公开(公告)号：CN104805118A
公开(公告)日：2015-07-29
申请号：CN201510195632.2
申请日：2015-04-22
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种苏禽黄鸡胚胎干细胞特定基因进行靶向敲除的方法：首先查询出基因的外显子序列，克隆出基因，测序，获得完整的外显子序列，并在此序列上设计CRISPR/Cas9敲除靶位点作为gRNA，构建CRISPR/Cas9双启动子敲除载体；构建完成的Cas9载体进行SSA活性检测，对照组转染空载体，检测luciferase信号，luciferase活性相对于对照组增长的越多，则证明gRNA剪切活性越高；将具有高SSA活性的CRISPR/Cas9载体转染ESCs，流式细胞术筛选出GFP阳性细胞，提取基因组DNA，设计引物。
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公开(公告)号：CN102690890A
公开(公告)日：2012-09-26
申请号：CN201210203445.0
申请日：2012-06-19
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了湖羊母性行为分子标记辅助选择方法及引物。该方法是检测湖羊PRLR基因外显子10的第284位和第339位核苷酸为C还是突变为T，确定湖羊的基因型，再通过基因型对湖羊母性行为进行选择；若第284位和339位均为C时，其纯合体的基因型为AA；若均为T时，其纯合体基因型为BB；它们的杂合体基因型为AB；对于舔舐、哺乳行为AA基因型的多于AB基因型，AB基因型的多于BB基因型；对于踩踏行为和拒绝哺乳则AA基因型的低于AB基因型，AB基因型的低于BB基因型。本发明的方法利用遗传标记多态性评价湖羊母性行为，可简便、迅速地检测湖羊母性，为评价湖羊母性行为提供了一个简便准确的方法。
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公开(公告)号：CN101864427A
公开(公告)日：2010-10-20
申请号：CN201010187618.5
申请日：2010-05-28
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种徐淮山羊体外重组过氧化氢酶体激活增殖受体的细胞定位方法。该方法是先构建含过氧化氢酶体激活增殖受体基因的载体pMD19-T-PPAR，再构建含有增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-C1-PPAR：最后通过聚乙烯亚胺介导pEGFP-C1-PPAR转染NIH-3T3细胞，48h后于荧光倒置显微镜下观察细胞的发荧光部位，以确定过氧化氢酶体激活增殖受体蛋白的细胞亚定位情况。
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