公开(公告)号：CN114410628A

公开(公告)日：2022-04-29

申请号：CN202111585143.X

申请日：2021-12-20

Applicant: 华南理工大学

Inventor： 林章凛 ,  杨晓锋 ,  姚栩荣 ,  刘鹏

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12N15/53 ,  C12P13/08 ,  C12P13/14 ,  C12P13/22 ,  C12P7/46 ,  C12P7/48 ,  C12P7/56 ,  C12Q1/10 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开抗酸表达盒与应用以及高通量筛选用于微生物发酵的抗胁迫表达盒的方法。所述一种抗酸表达盒，由一个以上的启动子、一个以上的抗胁迫基因和一个以上的终止子组成，所述抗胁迫基因选自gadE基因、sodB基因、katE基因和hdeB基因，构建的酸响应asr启动子库。本发明还提供高通量筛选用于微生物发酵的抗胁迫表达盒的方法。该方法关联了生长率和发酵性能，避免了单纯通过生长评估而忽视生长与发酵性能平衡关系的影响，在两步筛选后，采用高通量的微型发酵评估抗胁迫和发酵性能，最终筛选获得的少量最具利用前景的抗胁迫表达盒在工业发酵罐进行后续评估，从而避免直接大量发酵评估所有抗酸表达盒，提高筛选的效果和效率。

公开(公告)号：CN113549144A

公开(公告)日：2021-10-26

申请号：CN202110745090.7

申请日：2021-06-30

Applicant: 华南理工大学

Inventor： 林章凛 ,  任堂梅 ,  杨晓锋 ,  景艳芸

IPC: C07K14/635 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种特立帕肽hPTH(1‑34)的生产和纯化方法，属于基因工程领域。该方法包括：将聚集肽的基因序列、切割标签的基因序列及人特立帕肽hPTH(1‑34)的基因序列依次连接，形成融合蛋白的基因，将所述融合蛋白的基因导入宿主细胞，得到工程菌；培养工程菌表达所述融合蛋白，然后裂解工程菌，离心取沉淀，得到融合蛋白的聚集体；将融合蛋白的聚集体进行切割，得到所述人特立帕肽hPTH(1‑34)。本发明纯化得到的特立帕肽hPTH(1‑34)的产量和纯度都很高，而且该纯化方法对设备要求低，步骤少，操作简便，生产效率高，成本低，可应用于特立帕肽hPTH(1‑34)的高效制备中。

公开(公告)号：CN106520733B

公开(公告)日：2020-09-22

申请号：CN201610910450.3

申请日：2016-10-19

Applicant: 华南理工大学

Inventor： 李爽 ,  徐天旺 ,  杨晓锋

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明公开了一种β‑木糖苷酶体内酶聚集体的制备方法，包括如下步骤：(1)将连接肽与双亲短肽拼接，构建得到表达载体；所述双亲短肽为ELK16；(2)将β‑木糖苷酶编码基因与上述表达载体连接，转化入受体菌，获得能表达β‑木糖苷酶–短肽融合蛋白的工程菌；(3)将上述工程菌诱导表达，并对细胞进行破壁处理，离心和/或过滤获得沉淀，即获得β‑木糖苷酶体内酶聚集体。相比于常规表达获得的ThXylC，本发明所得ThXylC‑ELK16活性酶聚集体，比酶活和催化效率得到了提高，且其热耐受性也明显提高。体现出该方法具有在生产中推广应用的巨大潜力。

公开(公告)号：CN109627290A

公开(公告)日：2019-04-16

申请号：CN201811557416.8

申请日：2018-12-19

Applicant: 华南理工大学

Inventor： 林章凛 ,  仙丹华 ,  杨晓锋 ,  赵镭 ,  王胥 ,  周碧红

IPC: C07K14/00 ,  C12N15/70 ,  C12N15/62 ,  C12N9/20 ,  C07K14/435

CPC classification number: C07K14/001 ,  C07K14/43595 ,  C07K2319/735 ,  C07K2319/92 ,  C12N9/20 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12Y301/01003

Abstract: 本发明公开了α螺旋自组装短肽及其在蛋白质纯化中的应用，属于基因工程领域。该α螺旋自组装短肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示。将该α螺旋自组装短肽与目的蛋白形成的融合蛋白在宿主细胞内表达后形成有活性的聚集体，通过表达所述融合蛋白来生产和纯化目的蛋白。本发明的α螺旋自组装短肽可以诱导融合蛋白形成大量的有活性的蛋白聚集体，纯化得到的目的蛋白产量和纯度都很高，而且该纯化方法对设备要求低，不需要纯化柱，生产成本低，操作简便，可应用于蛋白质的生产和纯化中。

公开(公告)号：CN108949599A

公开(公告)日：2018-12-07

申请号：CN201810695855.9

申请日：2018-06-29

Applicant: 华南理工大学

Inventor： 林章凛 ,  王婷婷 ,  杨晓锋 ,  卢彦坪 ,  张兴 ,  杨晴玉

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12P7/26 ,  C12R1/645

CPC classification number: C07K14/37 ,  C07K14/415 ,  C12N15/815 ,  C12P7/26

Abstract: 本发明公开一种产β‑紫罗兰酮基因工程菌及其构建方法与应用。本发明以解脂耶氏酵母为底盘细胞，将β‑紫罗兰酮表达模块(约14.5kb)线性化后转入解脂耶氏酵母体内并利用CRISPR/cas9技术介导整合到设计的染色体位置，具有简单快速高效的优点，2～3周即可获得大片段整合工程菌株，明显缩短工程菌构建周期。按照本发明的方法获得的基因工程菌的β‑紫罗兰酮的摇瓶发酵初产量可达到约6.3mg/L。本发明可利用简单培养基发酵生产香料β‑紫罗兰酮，可实现多基因一次性高效转化与整合，可明显缩短工程菌构建时间，所得工程菌可利用葡萄糖、甘油等简单碳源进行香料β‑紫罗兰酮的发酵生产，具有良好的工业应用前景。

公开(公告)号：CN103757042A

公开(公告)日：2014-04-30

申请号：CN201410019182.7

申请日：2014-01-15

Applicant: 华南理工大学 ,  清华大学

Inventor： 李爽 ,  杨晓锋 ,  林章凛 ,  王菊芳 ,  王小宁

IPC: C12N15/70 ,  C12N9/78 ,  C12N11/10 ,  C12P7/42

CPC classification number: Y02P20/588

Abstract: 本发明公开了一种基于自聚集短肽诱导的固定化腈水解酶及制备方法和应用，制备方法如下：（1）将连接肽与自聚集短肽拼接，构建得到表达载体；（2）将腈水解酶基因与上述表达载体连接，转化入受体菌，获得工程菌；（3）上述工程菌诱导表达后，对细胞进行破壁处理，离心和/或过滤获得沉淀，即腈水解酶体内酶聚集体；（4）将得到的腈水解酶体内酶聚集体在海藻酸盐中固定化，得到固定化腈水解酶。本发明固定化所得腈水解酶聚集体，固定化酶颗粒直径约1mm。该固定化该颗粒可以冻干保存，在37℃情况下保存20天，酶活保留90%，而且固定化的腈水解酶酶活性高，操作流程简单。