公开(公告)号：CN116334106A

公开(公告)日：2023-06-27

申请号：CN202211121519.6

申请日：2022-09-15

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 杨生超 ,  郭兆宽 ,  张广辉 ,  王益娜 ,  陈庚 ,  舒彦宇 ,  李志远 ,  冯孝林

IPC: C12N15/53 ,  C12N15/81 ,  C12P33/00 ,  C12P33/06

Abstract: 本发明公开了一种雪胆细胞色素氧化酶HcCYP87D20和HcCYP81Q59基因及其转基因工程菌在制备葫芦素中间体中的应用。鉴别获得雪胆细胞色素氧化酶HcCYP87D20和HcCYP81Q59基因，极大地推进了雪胆素(葫芦素IIa和葫芦素IIb)生物合成路径关键酶基因的挖掘，不仅能够帮助育种家进行分子标记辅助育种，而且还可以借助代谢工程和合成生物学方法对葫芦素进行工业化生产，也将为新药开发提供新的思路。提供了含有雪胆细胞色素氧化酶HcCYP87D20和HcCYP81Q59的重组质粒、转基因工程菌和酿酒酵母重组菌Cuol04，为通过生物工程方法合成11‑羰基‑20β‑羟基‑Cuol、11‑羰基‑Cuol以及11‑羰基‑2β,20β‑二羟基‑Cuol，进一步为雪胆素生物合成调控研究奠定基础。

公开(公告)号：CN115336532B

公开(公告)日：2023-06-23

申请号：CN202210827180.5

申请日：2022-07-13

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 赵艳 ,  白红娟 ,  高青青 ,  李霞 ,  翟晨曦 ,  杨生超 ,  张广辉 ,  龙光强 ,  陈庚 ,  冯垒

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明涉及一种可抑制雪胆块茎愈伤组织褐变的诱导方法，属于组织培养领域，本发明包括配制培养基：按照MS培养基2.37g/L、琼脂3.5g/L、蔗糖15g/L、6‑BA 0.2‑1.8mg/L、NAA 0.1‑1.5mg/L配制，调PH至5.6‑6，灭菌、超净工作台倒平板后标记备用；将洗净、消毒后的雪胆块茎在无菌条件下接种于培养基上，然后置于20℃的组培室内培养。本发明通过在培养基内添加6‑BA和NAA，可在有效诱导愈伤组织分化的同时抑制愈伤组织的褐化。

公开(公告)号：CN116083519A

公开(公告)日：2023-05-09

申请号：CN202211648260.0

申请日：2022-12-21

Applicant: 云南农业大学 ,  云南云科特色植物提取实验室有限公司

Inventor： 杨生超 ,  舒彦宇 ,  张广辉 ,  和四梅 ,  陈庚 ,  冯孝林 ,  李志远 ,  郭振宇 ,  马骁 ,  王飞飞

IPC: C12Q1/32 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明属于酶活性检测技术领域，具体涉及一种基于荧光检测的短链脱氢还原酶(SDR酶)活性的高通量测定方法及其应用。所述高通量测定方法包括以下步骤：(1)SDR粗酶的表达；(2)SDR粗酶中SDR目标蛋白的提取；(3)NADH的荧光信号检测，以确定所述SDR酶活性；其中，优选地，所述测定方法是在96孔板中进行的。本发明提供的基于荧光检测的SDR酶活性的高通量测定方法通量高、灵敏度高、操作方便、成本低廉，为快速、高效筛选SDR酶突变体的催化活性，提高SDR酶筛选过程中的定向进化效率提供了新方法，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN115896136A

公开(公告)日：2023-04-04

申请号：CN202211655229.X

申请日：2022-12-22

Applicant: 云南农业大学 ,  云南云科特色植物提取实验室有限公司

Inventor： 杨生超 ,  舒彦宇 ,  张广辉 ,  郝冰 ,  陈庚 ,  冯孝林 ,  李志远 ,  郭振宇 ,  马骁 ,  王飞飞

IPC: C12N15/53 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P33/06

Abstract: 本发明涉及一种与葫芦二烯醇羟化相关的细胞色素P450基因及其编码产物，属于基因工程领域。所述基因其核苷酸分别如SEQ ID NO：1‑5所示。本发明还提供了与基因相关的编码蛋白、载体、工程菌以及应用。

公开(公告)号：CN112285239A

公开(公告)日：2021-01-29

申请号：CN202011150157.4

申请日：2020-10-24

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 张广辉 ,  贾兵 ,  范伟 ,  陈庚 ,  李晓波 ,  李莹 ,  宋婉玲 ,  杨生超 ,  卢迎春 ,  刘冠泽 ,  张双艳 ,  林源

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/06 ,  G01N30/14 ,  G01N30/34 ,  G01N30/60

Abstract: 本发明涉及一种检测三七叶片皂苷的HPLC方法，属于医学技术领域。该方法包括供试样品溶液的制备、对照品溶液的制备、色谱条件、色谱峰测定等几大步骤。本发明的HPLC方法可在短时间准确测出三七叶中人参皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rb3，三七皂苷Fa、Fe及七叶胆苷XⅦ7种皂苷单体含量，且该方法在精密度、稳定性、重复性、最低检测限、加样回收率上均符合《中华人民共和国药典》相关标准，快速简便，稳定可靠，易于推广应用。

公开(公告)号：CN110346494A

公开(公告)日：2019-10-18

申请号：CN201910478273.X

申请日：2019-06-03

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 张广辉 ,  陈庚 ,  杨生超 ,  刘冠泽 ,  赵艳 ,  段绍凤 ,  李莹 ,  闫静 ,  龚建溪 ,  郭兆宽

IPC: G01N30/88

Abstract: 本发明公开了一种同时测定灯盏花中4种有效成分含量的方法，所述4种有效成分为灯盏乙素、灯盏甲素、野黄芩素和芹菜素，所述的方法采用如下色谱条件：色谱柱：C18液相色谱柱；流速：0.8～1.2ml/min；柱温：25℃～35℃；检测波长：335nm；进样量：2μl；流动相A：水；流动相B：乙腈；流动相C：0.3％磷酸水溶液；采用梯度洗脱。本发明的优点是：测定方法准确可靠，科学合理。

公开(公告)号：CN110343678A

公开(公告)日：2019-10-18

申请号：CN201910508188.3

申请日：2019-06-12

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 杨生超 ,  唐军荣 ,  张广辉 ,  陈庚 ,  林源 ,  闫静 ,  李莹

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12N15/11 ,  C12P33/20 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种珠子参糖基转移酶UGTPjm1基因及在制备人参皂苷Ro上的应用，珠子参糖基转移酶UGTPjm1基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示。以竹节参皂苷IVa和糖基供体UDP-葡萄糖为原料，在由珠子参糖基转移酶UGTPjm1基因编码得到的珠子参糖基转移酶的催化下，在竹节参皂苷IVa的C3位上的葡萄糖醛酸基团上再一次糖基化，生成人参皂苷Ro。本发明中人参皂苷Ro的生物合成调控基因UGTPjm1，是首次鉴定并成功验证。通过体外合成人参皂苷Ro，管理更加方便，可控性强，可以减少对原料种植的需求，节约农业用地，生产产物单一，便于后期人参皂苷Ro的分离和纯化。珠子参糖基转移酶UGTPjm1基因作为人参皂苷Ro生物合成的关键基因，还可用于珠子参等植物育种研究。