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公开(公告)号：CN111073859B
公开(公告)日：2021-09-28
申请号：CN201911280787.0
申请日：2019-12-09
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/08 , G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种检测牛细小病毒的双抗体夹心ELISA试剂盒及其应用。本发明使用纯化后的兔抗BPV VP2蛋白多克隆抗体作为捕获抗体，使用由保藏号为:CGMCC No.18896的杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体作为检测抗体，建立了双抗体夹心ELISA方法。特异性试验结果表明该方法特异性良好，与BRV、PRV、PEDV和TGEV均不发生反应。灵敏性试验表明该方法对病毒的最低检出量为3.125×102.8TCID50/mL。重复性试验表明该方法变异系数均小于10％，确定该方法具有良好的重复性。通过对临床样品的检测发现，双抗体夹心ELISA方法与PCR方法的检测结果一致，符合率为100％。本发明的提出可用于牛细小病毒的诊断，并为牛细小病毒感染的防控提供了一种快速检测方法和监测手段。
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公开(公告)号：CN107475445B
公开(公告)日：2021-01-12
申请号：CN201710703618.8
申请日：2017-08-16
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于RT‑PCR和RFLP技术鉴别鸡传染性法氏囊病病毒强弱毒株的试剂盒及其应用。所述的试剂盒含有用于扩增鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的引物对以及SpeI、SacI和StuI限制性内切酶。本发明所建立的基于RT‑PCR和RFLP技术的鉴别诊断方法能够区分IBDV的超强毒株和弱毒株，且步骤简单便于操作，本发明的提出为IBDV强弱毒株的快速鉴别诊断提供了一种新的有效技术手段。
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公开(公告)号：CN106190986B
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201610533234.1
申请日：2016-07-07
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种抗蓝舌病病毒血清4型VP2蛋白的单克隆抗体，分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株及用途。本发明以pET‑28a为载体构建表达的VP2‑4B蛋白作为免疫原免疫小鼠，以pMAL‑c5x为载体构建表达的VP2‑4B蛋白作为抗原，筛选阳性杂交瘤细胞，最终筛选得到一株能够稳定分泌抗BTV4‑VP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，实验证明，该杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体BTV4‑VP2‑1B6能够与BTV4‑VP2蛋白发生特异性反应，而与其他血清型VP2蛋白不发生反应。本发明的单克隆抗体BTV4‑VP2‑1B6为建立BTV4与其他血清型的血清学鉴别诊断方法奠定了基础。
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公开(公告)号：CN107179408B
公开(公告)日：2019-01-22
申请号：CN201710318544.6
申请日：2017-05-08
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/68
Abstract: 本发明公开了一种用于蓝舌病病毒型特异性检测的竞争ELISA检测试剂盒及其应用。所述试剂盒包括以下两组组分：组分I中包括包被蓝舌病病毒抗原I的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体I，所述的单克隆抗体I由杂交瘤细胞株1B6分泌产生；组分II中包括包被蓝舌病病毒抗原II的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体II，所述的单克隆抗体II由杂交瘤细胞株4A‑1G7分泌产生。本发明利用制备的两株4型BTV VP2单克隆抗体4A‑1G7以及1B6建立了蓝舌病病毒型特异性检测的联合竞争ELISA检测方法，该检测方法短时间内可以用于初步区分不同型蓝舌病感染的动物血清，实验条件要求低，适合于大规模的BTV血清抗体检查。
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公开(公告)号：CN104911152B
公开(公告)日：2018-03-30
申请号：CN201510309061.0
申请日：2015-06-08
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明涉及一株重组传染性造血器官坏死病毒rIHNV HLJ‑09株及其构建方法和应用，属于生物技术领域。所述病毒rIHNV HLJ‑09株的微生物保藏号为CGMCC No.8606，通过感染重组病毒的细胞传代实验证明此病毒能够稳定传代。重组病毒rIHNV HLJ‑09腹腔接种虹鳟幼鱼，结果导致幼鱼发病死亡，致死率可达90％，表明此病毒具有与亲代HLJ‑09株病毒相似的致病特性。进一步，本发明中利用rIHNV HLJ‑09反向遗传系统，将rIHNV HLJ‑09的NV ORF用报告基因EGFP(绿色荧光蛋白)编码基因替换，成功拯救病毒，拯救病毒命名为rIHNV‑EGFP。激光共聚焦显微镜观察rIHNV‑EGFP病毒侵染的细胞可观察到明显的绿色荧光，说明该rIHNV HLJ‑09病毒株可应用于表达外源蛋白。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107446872A
公开(公告)日：2017-12-08
申请号：CN201710756881.3
申请日：2017-08-29
Applicant: 东北农业大学
CPC classification number: C07K14/005 , A61K39/12 , A61K2039/552 , C12N15/65 , C12N15/66 , C12N15/74 , C12N2750/14322 , C12N2750/14334
Abstract: 本发明公开一种组成型表达兔病毒性出血症病毒VP60蛋白的重组乳酸菌疫苗株及其制备方法和用途。所述的重组乳酸菌疫苗株含有EGFP标记的组成型表达兔病毒性出血症病毒VP60蛋白的乳酸菌表达质粒。本发明利用乳酸菌为疫苗抗原传递载体，以兔病毒性出血症病毒VP60蛋白为免疫原制备重组乳酸菌口服疫苗诱导动物机体产生免疫应答，能够有效地刺激机体产生局部黏膜免疫应答，又能刺激机体的体液免疫应答，以达到预防兔病毒性出血症病毒的感染的目的。此外，本发明以增强型绿色荧光蛋白EGFP作为筛选标记，构建非抗生素抗性筛选标记的基因工程乳酸菌，符合绿色、环保的发展理念。
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公开(公告)号：CN107271667A
公开(公告)日：2017-10-20
申请号：CN201710415171.4
申请日：2017-06-05
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/558 , G01N33/577
CPC classification number: G01N33/56983 , G01N33/558 , G01N33/577
Abstract: 本发明公开了一种蓝舌病病毒型特异性竞争ELISA检测试剂盒及其应用。所述试剂盒包括以下两组组分：组分I中包括包被蓝舌病病毒抗原I的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体I，所述的单克隆抗体I由杂交瘤细胞株8B3G11分泌产生；组分II中包括包被蓝舌病病毒抗原II的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体II，所述的单克隆抗体II由杂交瘤细胞株8B5D4分泌产生。本发明利用制备的两株8型BTV VP2单克隆抗体8B5D4以及8B3G11建立了蓝舌病病毒型特异性检测的联合竞争ELISA检测方法，该检测方法短时间内可以用于初步区分不同型蓝舌病感染的动物血清，实验条件要求低，适合于大规模的BTV血清抗体检查。
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公开(公告)号：CN107179408A
公开(公告)日：2017-09-19
申请号：CN201710318544.6
申请日：2017-05-08
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/68
CPC classification number: G01N33/68
Abstract: 本发明公开了一种用于蓝舌病病毒型特异性检测的竞争ELISA检测试剂盒及其应用。所述试剂盒包括以下两组组分：组分I中包括包被蓝舌病病毒抗原I的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体I，所述的单克隆抗体I由杂交瘤细胞株1B6分泌产生；组分II中包括包被蓝舌病病毒抗原II的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体II，所述的单克隆抗体II由杂交瘤细胞株4A‑1G7分泌产生。本发明利用制备的两株4型BTV VP2单克隆抗体4A‑1G7以及1B6建立了蓝舌病病毒型特异性检测的联合竞争ELISA检测方法，该检测方法短时间内可以用于初步区分不同型蓝舌病感染的动物血清，实验条件要求低，适合于大规模的BTV血清抗体检查。
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公开(公告)号：CN106987548A
公开(公告)日：2017-07-28
申请号：CN201710229189.5
申请日：2017-04-10
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种同时表达产气荚膜梭菌α、β2、ε、β1外毒素的重组乳酸杆菌及其构建方法和应用。本发明以从基因水平去毒性化改造的产气荚膜梭菌α、β1、β2和ε外毒素为免疫原，改造后的外毒素完全失去致病性，但仍保留其免疫原性，同时以乳酸杆菌作为传递与表达免疫抗原的安全级活菌载体，构建得到了一株能够同时表达产气荚膜梭菌α、β2、ε、β1外毒素的重组乳酸杆菌，并且创制了能够有效预防5个血清型产气荚膜梭菌感染的基因工程乳酸杆菌多价亚单位类毒素口服免疫制剂。本发明的提出为预防产气荚膜梭菌感染提供了有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN106676201A
公开(公告)日：2017-05-17
申请号：CN201710093483.8
申请日：2017-02-21
Applicant: 东北农业大学
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/6851 , C12Q2563/107 , C12Q2545/113
Abstract: 本发明公开了一种检测鲑鱼甲病毒的引物对、SYBR GreenⅠ荧光定量PCR试剂盒及其应用。本发明首先提供了用于检测鲑鱼甲病毒的实时荧光定量PCR引物对，其序列分别如SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.3所示。本发明还提供了含有上述引物对的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR试剂盒及其检测鲑鱼甲病毒的方法。研究表明，使用本发明的引物或试剂盒检测鲑鱼甲病毒，具有简便、快速、准确、灵敏度高、特异性好等优点，可用于鲑鱼甲病毒六个基因型的检测，本发明的提出为鲑鱼甲病毒的检测提供了一种有效的技术手段。
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