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公开(公告)号：CN119286745A
公开(公告)日：2025-01-10
申请号：CN202411405705.1
申请日：2024-10-10
Applicant: 浙江工业大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/52 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12N9/88 , C12N9/02 , C12N9/10 , C12N9/00 , C12N9/04 , C12P13/04 , C12R1/15
Abstract: 本发明涉及微生物代谢工程技术领域，尤其涉及一种高效生产D‑泛酸的谷氨酸棒杆菌生产菌、构建方法及应用。所述构建方法具体包括如下步骤：（1）以野生型谷氨酸棒杆菌ATCC 13032为底盘，弱化ilvA，突变表达构建DPA1；（2）敲除丙酮酸醌氧化还原酶并在其插入一个panBCE基因表达框，构建DPA2；（3）在DPA2中导入使用pEC‑xk99E过表达质粒筛选表达Escherichia coli W3110、Bacillus subtilis 168、以及内源性的乙酰羟酸合酶、乙酰乳酸异构还原异构酶和2‑羟酸脱水酶；（4）对筛选出的ilvBNCD基因在强启动子控制下，由pEC‑xk99E进行串联过表达，构建DPA3，加强泛酸主合成途径以及上游途径拉动力，即得所述高效生产D‑泛酸的谷氨酸棒杆菌。本发明提供的菌株能够利用碳源高产量和高转化率的生产D‑泛酸，具有重要的工业应用价值。
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公开(公告)号：CN117660391A
公开(公告)日：2024-03-08
申请号：CN202311695741.1
申请日：2023-12-12
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明提供一种鼠李糖基转移酶突变体、重组工程菌及其应用，所述鼠李糖基转移酶突变体是通过对rhlA的氨基酸序列第43位和第130位进行单突变或多突变获得的。本发明有益效果主要体现在：增强其rhlA酶活性与催化功能，由此造成鼠李糖脂产量提升；与对照rhlAB‑pBB相比，突变点F43W使产量提高了51％，突变点G130D提高了27％，突变点G130N使产量提高了17％，突变点F43W‑G130D提高了24％，突变点F43W‑G130N使产量提高了64％。
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公开(公告)号：CN117603894A
公开(公告)日：2024-02-27
申请号：CN202311370175.7
申请日：2023-10-20
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种基于甲醇同化高产D‑泛酸的基因工程菌、构建方法及应用。本发明通过在底盘菌基因组中插入Mdh基因、AOX1基因或AOX2基因，强化底盘菌甲醇同化途径，可以使得底盘菌发酵生产D‑泛酸的产量得以提高。frmA基因是甲醛脱氢酶编码基因，并进一步地，通过敲除底盘菌的frmA基因，抑制底盘菌的甲醛消耗途径，进而进一步提高底盘菌发酵生产D‑泛酸的产量。基于此，本发明构建得到了一种高产D‑泛酸的基因工程菌。
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公开(公告)号：CN114350585B
公开(公告)日：2023-08-18
申请号：CN202210078036.6
申请日：2022-01-24
Applicant: 浙江工业大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/113 , C12N15/75 , C12N15/52 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N9/00 , C12N9/02 , C12N9/04 , C12N9/10 , C12N9/12 , C12P13/02 , C12R1/125
Abstract: 本发明涉及一种高产D‑泛酸的基因工程菌株及其构建方法，以及其在微生物发酵制备D‑泛酸中的应用。本发明通过(1)利用起始密码子TTG替换coaA基因原始起始密码子GTG的同时，敲除了coaX基因，弱化了D‑泛酸降解途径，减少了CoA的合成；(2)使用弱启动子PresD表达ilvE的同时，运用Cre/loxP基因编辑技术敲除了原有ilvK基因，在减少竞争支路代谢流的基础上进一步弱化了支链氨基酸合成途径代谢流；(3)运用Cre/loxP基因编辑技术敲除了poxB和lctE，为D‑泛酸合成提供了充分的代谢流。最后通过异源表达来源于谷氨酸棒杆菌的panB及panC，强化了D‑泛酸合成途径中关键酶的表达，最终使得D‑泛酸产量相较于出发菌株从几乎检测不到提高到了67.4 g/L。
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公开(公告)号：CN116355972A
公开(公告)日：2023-06-30
申请号：CN202310208931.X
申请日：2023-03-07
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及生物发酵技术领域，公开了一种重组大肠杆菌生产L‑高丝氨酸的发酵工艺。本发明提供的重组大肠杆菌生产L‑高丝氨酸的发酵工艺主要针对现有重组大肠杆菌生产L‑高丝氨酸发酵工艺过程中存在的发酵进程中菌体生长难以控制、进而高产量难以重现的问题。本发明通过使发酵过程中的pH、温度、葡萄糖含量、OD600值及DO值控制在一定范围内，最终使菌体生长的各个阶段都可以保持最佳生产状态，实现发酵进程中菌体生长的控制，最终提升L‑高丝氨酸的产量,且该高产量重现性好。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116103215A
公开(公告)日：2023-05-12
申请号：CN202310210617.5
申请日：2023-03-07
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种高产L‑2‑氨基丁酸的无质粒基因工程菌及其应用。本发明提供的产L‑2‑氨基丁酸的无质粒基因工程菌，以Escherichia coli THR为底盘细胞经代谢工程和基因编辑技术改造得到，该基因工程菌菌株能以葡萄糖为原料，通过发酵培养得到L‑2‑氨基丁酸，在无质粒增加外源酶活的情况下，5L发酵罐分批补料发酵产量达到13.81g/L，发酵成本低，产物浓度高，没有副产物影响，产物易于纯化，适用于工业应用。
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公开(公告)号：CN114350585A
公开(公告)日：2022-04-15
申请号：CN202210078036.6
申请日：2022-01-24
Applicant: 浙江工业大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/113 , C12N15/75 , C12N15/52 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N9/00 , C12N9/02 , C12N9/04 , C12N9/10 , C12N9/12 , C12P13/02 , C12R1/125
Abstract: 本发明涉及一种高产D‑泛酸的基因工程菌株及其构建方法，以及其在微生物发酵制备D‑泛酸中的应用。本发明通过(1)利用起始密码子TTG替换coaA基因原始起始密码子GTG的同时，敲除了coaX基因，弱化了D‑泛酸降解途径，减少了CoA的合成；(2)使用弱启动子PresD表达ilvE的同时，运用Cre/loxP基因编辑技术敲除了原有ilvK基因，在减少竞争支路代谢流的基础上进一步弱化了支链氨基酸合成途径代谢流；(3)运用Cre/loxP基因编辑技术敲除了poxB和lctE，为D‑泛酸合成提供了充分的代谢流。最后通过异源表达来源于谷氨酸棒杆菌的panB及panC，强化了D‑泛酸合成途径中关键酶的表达，最终使得D‑泛酸产量相较于出发菌株从几乎检测不到提高到了67.4 g/L。
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公开(公告)号：CN119570827A
公开(公告)日：2025-03-07
申请号：CN202411797399.0
申请日：2024-12-09
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明提供了一种基于细胞分裂辅助工程构建高产D‑泛酸的基因工程菌、构建方法及应用。本发明通过：(1)敲除大肠杆菌分裂负调节系统minC、minD；(2)敲除控制细胞壁上的酰胺酶调控因子nlpD；(3)敲除DNA复制影响因子rstA；(4)过表达来自铜绿假单胞菌的GTP水解促进因子sulA；(5)利用动态启动子控制ftsQAZ，在不影响菌株生长的情况下改变菌株细胞分裂的模式，减少菌株繁殖消耗的能量，从而更多的能量流向D‑泛酸的生产，使菌株D‑泛酸的产量达到了8.88g/L。
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公开(公告)号：CN119351477A
公开(公告)日：2025-01-24
申请号：CN202411269724.6
申请日：2024-09-11
Applicant: 浙江工业大学
IPC: C12N15/90 , C12N15/80 , C12N1/15 , C12N15/55 , C12N15/31 , C12N9/22 , C12N15/113 , C12P27/00 , C12R1/77
Abstract: 本发明提供了一种高产赤霉素GA3的基因工程菌、构建方法及应用。本发明通过增强表达藤仓赤霉菌中关键的磷脂合成调控因子ino2，并采用CRISPR‑Cas9基因编辑技术敲除转录抑制因子opi1以及编码磷脂酸磷酸酶的pah1基因，刺激内质网膜面积扩增，增强了内质网蛋白的合成和折叠能力，并缓解了酶丰度有限的代谢限制，进而提高了GA3的产量。经改造后的重组藤仓赤霉菌相比于野生型扩增了内质网膜面积，从而刺激重组萜类生物合成酶在内质网中的富集，并最终提高GA3的积累，性能最优的菌株产赤霉素GA3的水平相比于出发菌株提升了31.5％，显著提升赤霉素GA3生产能力，为高产GA3工程菌株的构建提供了可行的路线。
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公开(公告)号：CN119307430A
公开(公告)日：2025-01-14
申请号：CN202411459170.6
申请日：2024-10-18
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及微生物代谢工程技术领域，尤其涉及一种高效生产O‑乙酰‑L‑高丝氨酸的基因工程菌的构建方法及其应用。所述构建方法具体如下步骤：（1）以菌株Escherichia coli W3110为底盘，敲除高丝氨酸O‑琥珀酰转移酶编码基因metA；（2）敲除γ‑胱硫醚合成酶编码基因metB；（3）敲除半胱硫氨酸裂解酶编码基因metC；（4）弱化表达来自海洋环杆菌的O‑乙酰‑L‑高丝氨酸硫解酶编码基因metYcm；（5）过表达来自细长聚球藻的核酮糖二磷酸羧化酶编码基因rbcLSse；（6）过表达来自细长聚球藻的磷酸核酮糖激酶编码基因prkse；（7）弱化柠檬酸合酶编码基因gltA的表达，即得所述高效生产O‑乙酰‑L‑高丝氨酸的基因工程菌。本发明提供的菌株进行O‑乙酰‑L‑高丝氨酸生产，具有高产量、产率、糖酸转化率。
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