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公开(公告)号：CN106995486A
公开(公告)日：2017-08-01
申请号：CN201710248360.7
申请日：2017-04-17
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种GyV8新型环形病毒VP3可溶性蛋白的制备方法。该方法是用pGEX‑6p‑1线性化载体以及GyV8病毒VP3基因片段的引物，利用重组酶ExnaseTM II不经酶切连接反应，直接在体外快速重组克隆VP3，转化大肠杆菌，经IPTG诱导表达、实现GyV8的VP3蛋白与GST的融合可溶性表达，并获得纯化的VP3可溶性蛋白。本发明不依赖于酶切位点及限制性内切酶的重组酶ExnaseTM II体外重组技术克隆GyV8病毒VP3基因，简化克隆过程，实现VP3基因快速克隆表达。
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公开(公告)号：CN106692964A
公开(公告)日：2017-05-24
申请号：CN201611102065.2
申请日：2016-12-05
Applicant: 扬州大学 , 国药集团扬州威克生物工程有限公司 , 福建圣维生物科技有限公司
IPC: A61K39/235 , A61P31/14 , C12N7/00
CPC classification number: A61K39/12 , A61K2039/5252 , A61K2039/552 , C12N7/00 , C12N2710/10034
Abstract: 本发明属于疫苗制备技术领域，具体涉及血清4型禽腺病毒灭活苗及其制备方法。所述血清4型禽腺病毒灭活苗，其抗原为通过悬浮培养方法获得的效价不低于109TCID50/ml的灭活后的血清4型禽腺病毒。本发明的利用鸡肝细胞，通过激流式生物反应器悬浮培养技术高效扩增血清4型禽腺病毒，并研制出高效价血清4型禽腺病毒灭活苗。该疫苗效价可达109TCID50/ml，是传统鸡胚疫苗效价的100倍。高效价血清4型禽腺病毒灭活苗的制备可大大降低疫苗的成本，提供疫苗免疫效果，具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN105037504B
公开(公告)日：2016-11-30
申请号：CN201510359309.4
申请日：2015-06-25
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明提供了一种AGV2型环形病毒VP2可溶性蛋白及其制备方法。是利用pGEX‑6p‑1线性化载体以及AGV2病毒VP2基因片段的引物，利用重组酶ExnaseTM II不经酶切连接反应，直接在体外快速重组克隆VP2，转化大肠杆菌，经IPTG诱导表达、实现AGV2的VP2蛋白与GST的融合可溶性表达，并获得纯化的VP2可溶性蛋白。本发明获得的AGV2病毒VP2可溶性表达及纯化的蛋白，可直接提供VP2可容性蛋白作为AGV2诊断抗原；作为免疫原获得抗VP2多克隆抗体；为开展AGV2血清学流行病学调查及VP2功能研究提供有效免疫学试剂，填补国内外空白；并为进一步探究VP2生物学功能具有重要意义。
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公开(公告)号：CN103773891B
公开(公告)日：2016-05-04
申请号：CN201410067290.1
申请日：2014-02-26
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种用环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测耐药基因TetK的试剂盒及检测方法。本发明含有10X等温反应缓冲液、Bst DNA聚合酶8Μ/μL、l0mM dNTP、100mM硫酸镁、10μM内引物1、10μM内引物2、l0μM外引物1、10μM外引物2和4M甜菜碱的反应液A、反应液B（50mM MgCl2）和反应液C（100X的荧光染料SYBR GreenⅠ）。通过对细菌基因组DNA提取、耐药基因TetK的环介导等温扩增、扩增产物的显色检测，从而检测出耐药基因TetK。解决了现有技术时间长、工作量大、交叉污染、操作复杂等缺陷。本发明具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低、操作方法更简单，适于现场快速检测。
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公开(公告)号：CN105274089A
公开(公告)日：2016-01-27
申请号：CN201510802359.5
申请日：2015-11-19
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种表达绿色荧光囊膜融合蛋白的REV病毒传染性克隆的构建方法，是将特定PCR引物扩增出的绿色荧光EGFP基因片段，插入到线性化的REV病毒基因组Env基因的N端，利用商品化的重组酶ExnaseTM II不经酶切连接反应，直接在体外快速重组克隆，随后转化到大肠杆菌进行质粒扩增与鉴定；并将阳性克隆转染DF1细胞，拯救获得表达绿色荧光囊膜融合蛋白的REV病毒。
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公开(公告)号：CN104726498A
公开(公告)日：2015-06-24
申请号：CN201510153415.7
申请日：2015-04-02
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/867
Abstract: 本发明涉及一种基于J亚群禽白血病病毒LTR的线性化真核表达载体的构建及应用。本发明是SEQ ID NO.1和2的序列为引物，以JSNT毒株为模板，进行PCR扩增得ALV-J病毒LTR线性化载体；本发明不仅可用于研究ALV-J或其它反转录病毒的复制、转译、致病等机制；而且能实现对外源基因的快速克隆、高效表达。
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公开(公告)号：CN104450695A
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201410704520.0
申请日：2014-11-26
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种流感病毒基因克隆方法，具体涉及A型流感病毒基因PCR扩增引物及A型流感病毒基因快速克隆方法。本发明提供了A型流感病毒8个基因片段的PCR扩增引物和流感病毒反向遗传线性化载体的引物。本发明还提供了A型流感病毒基因快速克隆方法，用上述引物通过PCR反应即聚合酶链式反应扩增出流感病毒基因片段以及线性化的流感病毒反向遗传载体，然后利用重组酶将上述线流感病毒各基因片段以及线性化的流感病毒反向遗传载体在体外重组克隆，并转化到大肠杆菌进行克隆。本发明的大大简化了传统的流感病毒反向遗传技术中的基因克隆过程，解决传统的流感病毒反向遗传技术中流感病毒基因的克隆过程复杂、效率不高的问题。
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公开(公告)号：CN104330560A
公开(公告)日：2015-02-04
申请号：CN201410629638.1
申请日：2014-11-11
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569
CPC classification number: G01N33/56983
Abstract: 双夹心ELISA检测禽网状内皮组织增生病病毒（REV）抗原的试剂盒，属于生物技术检测领域，该试剂盒用于REVP30蛋白抗原检测，最低可以检测到101.82个TCID50的REVHA1101或SNV病毒株所携带的P30抗原。本发明为临床REV抗原的快速检测提供了可靠手段。该试剂盒操作简便、快速，可以用于REV的检测，适用于基层各级兽医部门、出入境检验检疫、疫苗生产企业等REV快速大量检测。该方法所需成本低廉，经济效益显著、应用前景广泛。
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公开(公告)号：CN102924577A
公开(公告)日：2013-02-13
申请号：CN201210494560.8
申请日：2012-11-28
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了鸡高迁移率族蛋白B1（chHMGB1）抗原多肽和抗chHMGB1的单克隆抗体。该chHMGB1抗原多肽序列为VDAGKKVVAKAEKSKK。以该抗原多肽为免疫原免疫Balb/c小鼠，筛选得到一株杂交瘤细胞株2G1，保藏编号为CGMCCNo.6708。该细胞株能够持续稳定地分泌抗chHMGB1的单克隆抗体。该单克隆抗体不仅能够与融合蛋白表达的chHMGB1反应，而且能够与禽类巨噬细胞系HD11和CEF、DF1细胞中天然的chHMGB1特异性反应；该抗体还可以用于细胞刺激后培养上清中chHMGB1的分析，因此可用于对chHMGB1分子生物学功能的深入研究。
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公开(公告)号：CN102808037A
公开(公告)日：2012-12-05
申请号：CN201210341354.3
申请日：2012-09-14
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明属生物技术领域，涉及定量RT-PCR检测试剂盒，具体是一种实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测的鸡高迁移率族蛋白B1的试剂盒。该试剂盒含有逆转录反应液、莫洛尼氏鼠白血病病毒逆转录酶、RNA酶抑制剂、聚合酶链反应液、耐热DNA聚合酶、标准品、对照品。本发明试剂盒通过逆转录(RT)mRNA样品得到cDNA，再结合实时荧光定量PCR检测技术，可以精确定量检测标本中鸡高迁移率族蛋白B1的mRNA表达量。该试剂盒可以用于鸡体内各组织脏器中HMGB1的表达分析，也可以用于检测不同状态下细胞中鸡HMGB1表达水平的变化。该发明为研究鸡HMGB1表达水平提供了一种快速、准确、可重复的检测方法。
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