液相色谱串联质谱法定量检测血液中Hsa_circ_0091579含量方法

    公开(公告)号:CN115248264A

    公开(公告)日:2022-10-28

    申请号:CN202111494984.X

    申请日:2021-12-04

    Abstract: 本发明公开了液相色谱串联质谱法定量检测血液中Hsa_circ_0091579含量方法,主要包括如下步骤:步骤一、合成包含环状RNA Hsa_circ_0091579环化位点的核酸单链并配成系列浓度溶液;步骤二、合成氨基DNA肽探针并配成溶液;步骤三、合成同位素标记的多肽并配成溶液;步骤四、分离出单个核细胞;步骤五、提取总RNA;步骤六、固定氨基DNA肽探针;步骤七、反应,形成复合物;步骤八、磁性分离,获得纯净复合物;步骤九、萃取酶解产物、复溶;步骤十、建立标准曲线;步骤十一、计算样本中Hsa_circ_0091579含量;该法特异性高、灵敏度高、定量结果准确可靠、具有较宽的动态测量范围且定量结果具有较高的溯源性等优点,在生物医学领域应用越来越广泛。

    一种同位素稀释质谱法测定血清miR-224含量的方法

    公开(公告)号:CN110220994A

    公开(公告)日:2019-09-10

    申请号:CN201910599052.8

    申请日:2019-07-04

    Abstract: 本发明公开了一种同位素稀释质谱法测定血清miR-224含量的方法,包括如下步骤:(1)合成miR-224核酸单链并配成溶液,建立标准曲线;(2)合成核酸肽探针并配成溶液,用以捕获miR-224;(3)合成同位素标记的多肽并配成溶液作为内标;(4)在血清样本中提取miRNA;(5)将提取出的miRNA生物素化;(6)将上述miRNA与链霉素琼脂糖球反应,形成miRNA-生物素-链霉亲和素琼脂糖球复合物;(7)加入核酸肽探针捕获miR-224-生物素-链霉亲和素琼脂糖球复合物;(8)将上述复合物清洗干净后加入胰蛋白酶酶解,然后将酶解产物固相萃取,将萃取出的多肽吹干并复溶;(9)将复溶后的多肽和同位素标记的多肽样品进行质谱分析;(10)计算血清样本中miR-224含量。本发明准确度高,结果可靠。

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