公开(公告)号：CN1281763C

公开(公告)日：2006-10-25

申请号：CN200410072852.8

申请日：2004-11-22

Applicant: 中华人民共和国天津出入境检验检疫局 ,  南开大学

Inventor： 高旗利 ,  黄熙泰 ,  罗茂凰 ,  刘寅 ,  张霞 ,  郑泽军

IPC: C12Q1/68

CPC classification number: Y02A50/451

Abstract: 本发明公开了一种运用荧光PCR技术检测坂崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)的方法，属于细菌检验技术。其技术方案是利用坂崎肠杆菌种特异性DNA序列，设计特异性寡核苷酸引物和探针，分别应用外切酶探针荧光PCR和荧光染料嵌合PCR技术直接从样本中扩增细菌靶基因。本发明包括设计的坂崎肠杆菌种特异性6条寡核苷酸序列，作为对照的两条报告质粒扩增序列，以及与之配套的荧光PCR反应条件。本发明解决了从食品和临床样本中检测坂崎肠杆菌的标准方法，其有益效果是：省略了细菌的反复培养，不需电泳观察，从而节约时间；此外，此法灵敏度更高，检测速度更快，可进行定量分析。

公开(公告)号：CN1766122A

公开(公告)日：2006-05-03

申请号：CN200510014860.1

申请日：2005-08-25

Applicant: 南开大学

Inventor： 黄熙泰 ,  刘寅 ,  李永君 ,  郑泽军 ,  魏晓娜

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明公开了一种利用正反义探针共杂交技术提高基因芯片检测效率的方法，属于核酸分子杂交技术领域。其技术方案是通过设计两条能够和目的基因的核酸双链分别杂交的探针，形成稳定的探针—目的基因杂交产物，促进杂交反应向形成产物的方向进行，大幅度提高杂交信号的强度。应用该方法设计的正反义探针所制备的杂交膜，可以大大提高探针与目的基因的结合效率。在相同条件下，与常规的单探针杂交相比，检测目的基因的灵敏度提高50倍。该方法可应用于高灵敏度基因检测芯片的制备和所有核酸杂交实验。

公开(公告)号：CN1664112A

公开(公告)日：2005-09-07

申请号：CN200410072707.X

申请日：2004-11-11

Applicant: 南开大学 ,  中华人民共和国天津出入境检验检疫局

Inventor： 黄熙泰 ,  高旗立 ,  刘寅 ,  张霞 ,  侯艳梅

IPC: C12Q1/68

CPC classification number: Y02A50/451

Abstract: 本发明公开了一种运用PCR技术检测坂崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)的方法，属于细菌检验技术，特别是运用PCR反应来检测致病细菌的技术。其技术方案是利用新发现的坂崎肠杆菌种特异性DNA序列，用生物信息学方法设计特异性引物，用PCR方法直接从样本中扩增细菌靶基因。本发明包括新发现的坂崎肠杆菌种特异性DNA序列和由此设计筛选的PCR引物的四条寡核苷酸序列以及与之配套的PCR反应条件。本发明解决了从食品和临床样本中检测坂崎肠杆菌的标准方法的问题。它用PCR的方法扩增细菌靶基因，省去了细菌培养筛选环节，节约时间；而且不受培养条件和细菌生理状态的影响，较生理生化鉴定方法更为准确。

公开(公告)号：CN1635155A

公开(公告)日：2005-07-06

申请号：CN200410072705.0

申请日：2004-11-11

Applicant: 南开大学

Inventor： 黄熙泰 ,  刘寅 ,  蔡小宁 ,  杨晓川

IPC: C12Q1/68 ,  G01N33/569 ,  G01N33/535

CPC classification number: Y02A50/451

Abstract: 本发明公开了一种运用分子杂交－酶联免疫显色技术检测坂崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)的方法，属于细菌检测技术，特别是运用分子杂交方法检测致病细菌的技术。其技术方案是，用PCR方法扩增待测细菌的16s和23s rRNA基因间区序列，并用地高辛标记PCR产物，然后与设计的一组特异性寡核苷酸探针杂交，经酶联免疫显色后，可以精确地判断待测样品中是否含有坂崎肠杆菌。该方法的优点是，省去了重复的细菌培养筛选环节，节约时间；分子杂交鉴定方法不受培养条件和细菌生理状态的影响，较生理生化鉴定方法更为准确。

公开(公告)号：CN1396272A

公开(公告)日：2003-02-12

申请号：CN02129315.5

申请日：2002-08-30

Applicant: 南开大学 ,  天津南开基因工程有限公司

Inventor： 黄熙泰 ,  侯亭

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明涉及菌血症检验用基因芯片的检验方法，特别是对血液中病原菌DNA的分离、靶基因DNA顺序扩增和鉴定的技术。以基因芯片为基础，建立一种简便快捷、准确的方法，对血液中的病原菌DNA进行有效的分离，PCR(多聚酶链式反应)扩增和标记靶DNA顺序，通过与基因芯片上的探针阵列的杂交、酶联免疫吸附检测，实现对病原菌的分类、鉴定，从而彻底的摒弃冗长、繁杂的血液中病原菌的检验方法。本发明简便快捷、准确，并且由此可延伸到以基因芯片为基础的人体、牲畜其它器官感染病菌检测、环境、卫生检测及海关检疫技术。