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公开(公告)号：CN109295005B
公开(公告)日：2022-03-04
申请号：CN201811126187.4
申请日：2018-09-26
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12N5/20 , G01N33/68 , G01N33/577 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了分泌口蹄疫病毒非结构蛋白单克隆抗体2H1的杂交瘤细胞系及其应用。本发明用口蹄疫非结构蛋白为抗原免疫鼠通过细胞融合技术筛选最终筛选获得一株微生物保藏编号是CGMCC NO.16212的稳定分泌口蹄疫病毒非结构蛋白单抗的杂交瘤细胞系，其分泌的单抗广谱性好、保守性高、亲和力强,与血清竞争性强，可作为阻断ELISA检测方法中的检测抗体准确区分口蹄疫自然感染动物与免疫接种动物。本发明进一步提供了采用该单抗为检测抗体所建立的阻断ELISA检测试剂盒，采用一种该检测试剂盒即可检测任何动物种属的血清，跨越了种间屏障，具有可靠性高、应用性宽、广谱性好、竞争性强、检测更为快捷方便等优点。
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公开(公告)号：CN110358733B
公开(公告)日：2022-02-15
申请号：CN201910439753.5
申请日：2019-05-24
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一株稳定表达A亚群禽白血病病毒(ALV‑A)gp85蛋白的细胞系及应用。所述的稳定表达A亚群禽白血病病毒gp85蛋白的细胞系，命名为293F‑Agp85，该细胞系保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为CGMCC NO.17420。实验证明，该细胞系可以高效稳定表达A亚群禽白血病病毒gp85蛋白，其表达量高达25mg/L。此外，通过与细胞受体Tva互作和结合试验结果表明，由本发明细胞系表达获得的ALV‑A gp85蛋白具有正常的生物学活性，能够与细胞受体正常结合，并没有影响其生物学活性，且由于其表达量高，不需要转染，成本低，在体外研究ALV‑A感染细胞的机制和建立抗体检测方法等防控技术领域将具有良好的应用前景和意义。
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公开(公告)号：CN113801854A
公开(公告)日：2021-12-17
申请号：CN202110995235.9
申请日：2021-08-27
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/543 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了分泌欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(European type Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,EU‑type PRRSV)特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系及其应用，还公开了由该杂交瘤细胞系分泌的抗欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的特异性单克隆抗体及竞争ELISA方法的建立。该杂交瘤细胞系命名为EU1，其微生物保藏号是：CGMCC NO.23019。本发明的杂交瘤细胞系能够稳定分泌特异性识别EU‑type PRRSV的单克隆抗体，可用于特异性针对EU‑type PRRSV的竞争ELISA方法的建立。本发明的EU1杂交瘤细胞系及其分泌的单克隆抗体可以用于制备竞争法抗体诊断试剂盒，基于EU1建立的抗体鉴别诊断试剂盒可以区分EU‑type PRRSV和其它类型PRRSV的感染。
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公开(公告)号：CN113621717A
公开(公告)日：2021-11-09
申请号：CN202110863649.6
申请日：2021-07-29
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/04 , C12R1/46
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas12a的猪链球菌快速可视化RPA检测试剂盒及其应用。所述试剂盒中包含一对用于扩增猪链球菌cps2j基因的特异性引物对、gRNA和荧光报告探针，其中，所述的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:6和7或SEQ ID NO:8和9所示，与所述的gRNA互补的DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:2或3所示。本发明根据猪链球菌的特异性基因Cps2j设计特异性重组酶聚合酶扩增(RPA)引物及CRISPR/Cas12a系统探针，实现了RPA特异性靶基因扩增，以及CRISPR/Cas12a系统对报告基因的切割，建立了猪链球菌的快速可视化检测方法。该方法快速，可视，且特异性好，敏感度高，特别适用于资源贫乏地区猪链球菌的检测。
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公开(公告)号：CN108410785B
公开(公告)日：2021-11-02
申请号：CN201810139232.3
申请日：2018-02-09
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术开发公司
Abstract: 本发明涉及一种制备细菌菌影以及基因工程亚单位疫苗的方法，包括将INP信号序列和外源基因以及裂解盒基因E‑lysis克隆到同一个表达载体，转化细菌，其中INP的信号序列为SEQ ID NO：1表示的序列，裂解盒基因E‑lysis的序列为SEQ ID NO：2表示的序列，以及表达外源基因的重组细菌菌影在制备疫苗中的应用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113528682A
公开(公告)日：2021-10-22
申请号：CN202110731289.4
申请日：2021-06-29
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6851 , C12Q1/06 , C12N15/11 , C12R1/32
Abstract: 本发明公开了一种同时检测三种分枝杆菌的多重TaqMan荧光定量PCR试剂盒及其应用。所述的三种分枝杆菌包括结核分枝杆菌复合群(MTBC)、禽分枝杆菌副结核亚种(MAP)和禽分枝杆菌禽亚种(MAA)。所述的试剂盒中含有分别用于检测MTBC、MAP和MAA的引物以及探针。进一步的，本发明还建立了使用上述试剂盒检测三种分枝杆菌的多重TaqMan荧光定量PCR方法，实验证明，本发明建立的多重TaqMan荧光定量方法与常规PCR的阳性符合率为100.0％(175/175)、阴性符合率为87.0％(220/253)，与分枝杆菌培养的阳性符合率为100.0％(116/116)、阴性符合率为69.6％(220/316)。因此，本发明所建立的多重TaqMan荧光定量方法可用于MTBC、MAP和MAA的定性和定量检测，为有效防控牛结核病和副结核病提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN111057145B
公开(公告)日：2021-10-08
申请号：CN201911157547.1
申请日：2019-11-22
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2蛋白纳米抗体及其应用。所述的纳米抗体命名为Nb12，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明将截短表达的Nsp2重组蛋白免疫骆驼后分离骆驼外周血淋巴细胞利用RT‑PCR扩增经过免疫的双峰驼VHH基因，将其连入pCANTAB 5E噬菌体载体，构建双峰驼重链抗体可变区文库，利用噬菌体展示技术经过3轮淘选，共筛选到44株Nsp2特异性纳米抗体，试验证明这些纳米抗体能够与Nsp2蛋白特异性反应，其中Nb12有较强的结合力。抗病毒试验结果表明在接毒量为0.01个MOI时，纳米抗体Nb12在PAM细胞和Marc‑145细胞上均显示出对病毒复制的抑制作用。因此，本发明的提出为后续PRRSV Nsp2的研究以及PRRSV的防控和诊断提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN113462712A
公开(公告)日：2021-10-01
申请号：CN202110796924.7
申请日：2021-07-14
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种温控自剪切单质粒同源重组系统及其在基因编辑中的应用。所述的系统包括用于进行基因编辑的单质粒pKID220，所述的pKID220质粒中含有温控元件、Red重组酶基因、I‑SceI核酸内切酶基因和含有筛选标记的打靶片段区，其中，所述的筛选标记的两侧均带有I‑SceI识别位点和FRT位点。实验证明，本发明的同源重组系统的重组效率优于传统λ‑Red系统的双质粒和阿拉伯糖诱导方法，无需任何化学诱导剂，仅通过改变培养温度，即可实现染色体的高效编辑。而且避免了多次电穿孔过程，极大降低了操作复杂度并节省了时间和成本。本发明的提出为基因编辑提供了一种更加快速、简便、经济的技术手段。
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公开(公告)号：CN113416714A
公开(公告)日：2021-09-21
申请号：CN202110704819.6
申请日：2021-06-24
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12N7/01 , C12N15/85 , C12N15/66 , C12N15/40 , A61K39/12 , A61P31/14 , C07K16/10 , C07K16/06 , G01N33/569 , C12R1/93
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域。具体涉及一种表达埃博拉GP蛋白的重组病毒、该重组病毒的构建、制备方法及其在抗埃博拉病毒中的应用。所述的重组病毒为可以表达埃博拉GP蛋白的重组水泡型口炎病毒rVSVΔG‑Makona‑GP；该病毒含有Makona GP蛋白基因的重组全基因组克隆质粒pCI‑RzVSVΔG‑Makona‑GP。本发明的优点：(1)重组病毒易于增殖、致病性极低、无基因漂移风险、安全性更高。(2)重组病毒的构建方法简单，易行，易于大规模生产。(3)重组病毒对EBOV具有交叉保护能力。(4)疫苗一次免疫食蟹猴就可以快速激发体液免疫反应，产生特异性EBOV中和抗体。
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公开(公告)号：CN108623663B
公开(公告)日：2021-09-21
申请号：CN201810454383.8
申请日：2018-05-14
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Inventor： 刘恒贵
Abstract: 本发明涉及医药生物技术领域，具体涉及猪肺炎支原体P97蛋白的免疫原性功能多肽及其编码基因和应用。所述免疫原性功能多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.2、SEQ ID No.3或SEQ ID No.4所示。通过确定P97蛋白可以在体内诱导抗体反应的免疫原性功能区，在应用时可以去除P97上的非功能区，提高该蛋白表达效率和应用范围。因此对该蛋白应用于早期诊断和将来的疫苗开发均具有重要意。
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