一种β-酪蛋白位点定点整合Lys基因的打靶载体及其构建的细胞

    公开(公告)号:CN103215295B

    公开(公告)日:2015-04-22

    申请号:CN201310126017.7

    申请日:2013-04-11

    Abstract: 本发明公开了一种β-酪蛋白位点定点整合Lys基因的打靶载体及其构建的细胞,包括目的基因Lys,在的基因Lys的上游和下游分别设有5’同源臂和3’同源臂,以牛β-酪蛋白位点第二内含子锌指核酸酶识别位点的上下游各延伸700~850bp的同源序列作为5’同源臂和3’同源臂。本发明使用电穿孔的方法将打靶载体pCSN2-Lys-Neo-EGFP和锌指核酸酶表达载体共转染牛胎儿成纤维细胞,经过G418药物筛选和PCR分析后获得了打靶的阳性克隆细胞,以打靶的阳性克隆细胞为核供体移入牛去核卵母细胞,获得转基因克隆胚胎,为研制抗乳房炎的转基因奶牛提供坚实的基础。

    一种β-酪蛋白位点定点整合Lys基因的打靶载体及其构建的细胞

    公开(公告)号:CN103215295A

    公开(公告)日:2013-07-24

    申请号:CN201310126017.7

    申请日:2013-04-11

    Abstract: 本发明公开了一种β-酪蛋白位点定点整合Lys基因的打靶载体及其构建的细胞,包括目的基因Lys,在的基因Lys的上游和下游分别设有5’同源臂和3’同源臂,以牛β-酪蛋白位点第二内含子锌指核酸酶识别位点的上下游各延伸700~850bp的同源序列作为5’同源臂和3’同源臂。本发明使用电穿孔的方法将打靶载体pCSN2-Lys-Neo-EGFP和锌指核酸酶表达载体共转染牛胎儿成纤维细胞,经过G418药物筛选和PCR分析后获得了打靶的阳性克隆细胞,以打靶的阳性克隆细胞为核供体移入牛去核卵母细胞,获得转基因克隆胚胎,为研制抗乳房炎的转基因奶牛提供坚实的基础。

    一种通过胚胎杂交进行纯合孤雌生殖的方法

    公开(公告)号:CN119955862A

    公开(公告)日:2025-05-09

    申请号:CN202510022867.5

    申请日:2025-01-07

    Abstract: 本申请公开了一种通过胚胎杂交进行纯合孤雌生殖的方法,涉及孤雌生殖领域,其包括以下步骤:取卵母细胞,分为极体受体卵母细胞和极体供体卵母细胞,使用极体供体卵母细胞中的极体替换极体受体卵母细胞的染色体‑纺锤体复合物,得到去极体卵母细胞和重组卵母细胞,对去极体卵母细胞进行基因编辑限制/阻止其印记基因的表达得到基因编辑卵母细胞,对基因编辑卵母细胞和重组卵母细胞进行孤雌激活得到基因编辑二细胞卵裂球和重组二细胞卵裂球,将基因编辑二细胞卵裂球和重组二细胞卵裂球分别沿卵裂沟分离并交叉组合,然后融合得到杂交胚胎,将杂交胚胎培养至囊胚阶段后移植至母体内。本申请培育的后代基因纯合且避免了端粒变短引起的早衰问题。

    一种基于石英晶体微天平的动态气体检测装置

    公开(公告)号:CN115015018A

    公开(公告)日:2022-09-06

    申请号:CN202110237075.1

    申请日:2021-03-03

    Abstract: 本发明公开了一种基于石英晶体微天平的动态气体检测装置,包括空气过滤器、吹扫气体进气管道、电磁三通阀、样气进气管道、锥形橡胶堵头、驱动器、微型气泵、连接气管、石英晶体微天平气体检测室、单向排气阀、石英晶体微天平气体检测电路底板、气室连接板和控制器,进气、进样管道内设有空气过滤器,非工作状态下进气、进样管道口设有锥形橡胶堵头;电磁三通阀、微型气泵通过连接气管连接并配合工作,微型气泵通过驱动器与控制器连接,使用时通过控制器控制驱动器使微型气泵可按设定速度抽取气体送至石英晶体微天平气体检测室,实现先抽取吹扫气体清扫气体检测室,后抽取样本气体进行检测的功能,同时,气体通过检测室的单向排气阀排出。本发明不仅解决了气源不便供应的问题,而且该检测装置体积小、易携带、送气速度可调,可实时实地动态检测。

    一种三七利口酒及其制备方法
    15.
    发明公开

    公开(公告)号:CN113388464A

    公开(公告)日:2021-09-14

    申请号:CN202110777819.9

    申请日:2021-07-09

    Abstract: 本发明公开了一种三七利口酒及其制备方法,该方法包含:将含糖量为220~222g/L、含酸量为4~6g/L、成熟系数为42~44的梅洛葡萄的葡萄醪加入发酵罐中,加入二氧化硫,二氧化硫的加入量为40~60mg/L,8~10h后加入200mg/L活化的酵母,加入三七粉药包,三七粉的用量为20g/L;每日进行三次压帽,动态监测发酵状况,葡萄醪发酵温度控制在12~22℃。本发明通过选用成熟度良好的优质葡萄原料、采用小药包装载药材、控制发酵温度、合理的药材与葡萄共发酵时长、保留有一定量糖分时终止发酵、调整葡萄酒呈味物质比例等措施,保证生产出的三七利口酒感官质量佳,消费者易于接受。

    一种提高蜡样芽孢杆菌解磷能力的发酵培养基及发酵方法

    公开(公告)号:CN103789240A

    公开(公告)日:2014-05-14

    申请号:CN201410040439.7

    申请日:2014-01-25

    Inventor: 余旋 刘旭

    Abstract: 本发明公开了一种提高蜡样芽孢杆菌解磷能力的发酵培养基及发酵方法,培养基配方为:蔗糖25~35g/L,NH4Cl0.8~1.2g/L,NaCl0.3g,KCl0.3g,FeSO4·7H2O0.03g,MnSO4·H2O0.03g,MgSO4·7H2O0.3g,KH2PO42.0g,蒸馏水1000mL,pH7.0~7.5。本发明还提供了该提高蜡样芽孢杆菌解磷能力的发酵培养基的发酵方法。本发明使蜡样芽孢杆菌处于最佳生长状态,能有效提高解磷细菌菌剂制备的效率和解磷效果,降低菌剂生产成本,促进植物生长。

    一种同时定点整合FAD3和FABP4基因的载体及重组细胞

    公开(公告)号:CN110283847A

    公开(公告)日:2019-09-27

    申请号:CN201910482661.5

    申请日:2019-06-04

    Abstract: 本发明公开了一种同时定点整合FAD3和FABP4基因的载体及重组细胞,利用电穿孔的方法将靶向Rosa26基因的Cas9切割载体和打靶载体共转染鲁西黄牛胎儿成纤维细胞,实现将FAD3和FABP4基因同时定点插入到鲁西黄牛胎儿成纤维细胞基因组中;通过Junction PCR筛选和验证获得了打靶阳性克隆细胞;以本发明定点插入外源基因的阳性细胞为供核细胞移入去核的牛成熟卵母细胞中,获得转基因克隆胚胎,进一步将克隆胚胎移植到受体牛体内,可获得所期望的转基因牛。本发明为快速、高效研制优质转基因肉牛育种新材料提供了供核细胞和技术方法。

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