公开(公告)号：CN105543200B

公开(公告)日：2020-02-07

申请号：CN201610064273.1

申请日：2016-01-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘松 ,  陈坚 ,  堵国成 ,  毕洁

IPC: C12N9/80 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A23K20/189

Abstract: 本发明公开了一种稳定性提高的胆盐水解酶突变体，属于酶工程领域。本发明通过定点突变的方式，将来源于唾液乳酸杆菌的胆盐水解酶BSH2分子中位于疏水腔入口处的氨基酸谷氨酰胺突变成丙氨酸，改变了分子内部疏水性，提高了胆盐水解酶的热稳定性及氧化稳定性。改造后的酶蛋白，稳定性提高，更适合工业生产应用。

公开(公告)号：CN105505905B

公开(公告)日：2018-08-28

申请号：CN201511032048.1

申请日：2015-12-31

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘松 ,  方芳 ,  陈坚 ,  堵国成 ,  毕洁

IPC: C12N9/80 ,  C12N15/55 ,  C12N15/74 ,  C12N1/21 ,  A23K20/189 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种乳酸乳球菌胆汁耐受能力提高的胆盐水解酶变异体，属于酶工程领域。本发明采用基因改组技术将胆盐水解酶进行定向进化，改变了胆盐水解酶的活力及底物特异性，进化的酶蛋白表达菌株胆汁耐受能力比野生酶蛋白的表达菌株提高了1.3倍。本发明获得的乳酸乳球菌菌株和胆盐水解酶变异体可用于食品、医药、农业等领域，如用作微生态制剂、药物表达载体、饲料添加剂等，胆盐水解酶变异体可用于开发为重组蛋白产品，亦可用作基因工程表达系统的筛选标记及菌种的分子改造。

公开(公告)号：CN105524907A

公开(公告)日：2016-04-27

申请号：CN201610070608.0

申请日：2016-02-01

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘松 ,  堵国成 ,  陈坚 ,  毕洁

IPC: C12N9/80 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12N9/80 ,  C12Y305/01024

Abstract: 本发明公开了一种底物专一性提高的胆盐水解酶突变体，属于酶工程领域。本发明通过定点突变的方式，将来源于唾液乳酸杆菌的胆盐水解酶BSH1位于底物结合口袋中的氨基酸位点酪氨酸(Tyr24)、丙氨酸(Ala58)、苯丙氨酸(Phe65)分别突变成丙氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸，改变酶分子与底物之间的疏水相互作用和结合方式，提高了胆盐水解酶的底物专一性。改造后的酶蛋白，有利于减少结合胆盐水解反应中胆酸的生成量，提高乳酸菌的胆盐耐受性，有助于胆盐水解酶在调节宿主胆汁组成及流量中的应用研究。

公开(公告)号：CN101703179A

公开(公告)日：2010-05-12

申请号：CN200910250615.9

申请日：2009-12-11

Applicant: 江南大学

Inventor： 王淼 ,  王松 ,  陈坚 ,  堵国成 ,  张娟 ,  毕洁 ,  张茜

IPC: A23L1/015

Abstract: 本发明涉及一种清除食品中微囊藻毒素的方法，属于食品生物技术领域。本发明采用益生菌作为生物催化剂，通过液体深层发酵制备富含益生菌的发酵液或将发酵液精制得到菌泥，将所得益生菌发酵液或菌泥投入水制品、水产品中，或将其用于发酵食品的生产过程，得到营养成分丰富、健康安全的产品。

公开(公告)号：CN105524907B

公开(公告)日：2018-12-04

申请号：CN201610070608.0

申请日：2016-02-01

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘松 ,  堵国成 ,  陈坚 ,  毕洁

IPC: C12N9/80 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种底物专一性提高的胆盐水解酶突变体，属于酶工程领域。本发明通过定点突变的方式，将来源于唾液乳酸杆菌的胆盐水解酶BSH1位于底物结合口袋中的氨基酸位点酪氨酸(Tyr24)、丙氨酸(Ala58)、苯丙氨酸(Phe65)分别突变成丙氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸，改变酶分子与底物之间的疏水相互作用和结合方式，提高了胆盐水解酶的底物专一性。改造后的酶蛋白，有利于减少结合胆盐水解反应中胆酸的生成量，提高乳酸菌的胆盐耐受性，有助于胆盐水解酶在调节宿主胆汁组成及流量中的应用研究。

公开(公告)号：CN102021127B

公开(公告)日：2012-05-30

申请号：CN201010238671.3

申请日：2010-07-28

Applicant: 江南大学

Inventor： 陈坚 ,  张娟 ,  堵国成 ,  王淼 ,  张茜 ,  吴重德 ,  王松 ,  毕洁 ,  顾磊

IPC: C12N1/20 ,  A23L1/015 ,  C12R1/225

Abstract: 本发明公开了一株副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)BBE10-215，已于2010年7月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M2010169。该菌株具有较高的藻毒素清除效率，将该菌株用于保健食品领域，具有提高人体免疫力、协助营养消化等诸多方面的功效。

公开(公告)号：CN105567619A

公开(公告)日：2016-05-11

申请号：CN201610027472.5

申请日：2016-01-15

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘松 ,  陈坚 ,  堵国成 ,  毕洁

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  A23K20/189 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12N9/80 ,  C12N15/70 ,  C12N2800/101 ,  C12Y305/01024

Abstract: 本发明公开了一种产胆盐水解酶变异体的基因工程菌及其制备方法，属于基因工程技术领域。本发明将胆盐水解酶变异体基因克隆连接到大肠杆菌表达载体pET-20b(+)，转化至Escherichia coli BL21(DE3)，经筛选鉴定得到一株过量表达胆盐水解酶变异体的重组大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)-pET20b(+)-bsh1v；蛋白纯化步骤为分步超滤结合分子筛，获得了单一重组蛋白。本发明制备的重组蛋白底物专一性提高，能够改善作为信号物质的胆汁组成，应用于医药、食品领域。