公开(公告)号：CN115960879B

公开(公告)日：2025-01-21

申请号：CN202310086878.0

申请日：2023-01-30

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  陈佳俊 ,  徐炜 ,  朱莺莺 ,  倪大伟

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/24 ,  C12P19/02 ,  C12Q1/533 ,  G01N21/35 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体文库的高通量筛选方法及获得的突变体，属于酶工程技术领域。本发明所提供的高通量筛选方法是基于在酸性Si(IV)–Mo(Ⅵ)显色液中，D‑果糖可将黄色钼酸盐Mo(Ⅵ)还原，生成蓝色钼酸盐Mo(V/Ⅵ)，其颜色深浅在一定范围内与D‑果糖的含量成正比，且在相同浓度水平下，D‑阿洛酮糖不会干扰D‑果糖的测定。同时，本发明还提供了D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶四点突变体，与该酶野生型相比，其在60℃下孵育1h后的残余酶活提升69.8％，最适温度提高5℃，在60℃下的半衰期值由0.64h增加到7.30h，因此其工业应用潜力得到明显提升。

公开(公告)号：CN118834922A

公开(公告)日：2024-10-25

申请号：CN202410898690.0

申请日：2024-07-05

Applicant: 江南大学

Inventor： 倪大伟 ,  沐万孟 ,  杜智慧 ,  张书琦 ,  张文立 ,  徐炜 ,  光翠娥

IPC: C12P19/04 ,  C12P19/18 ,  C12P19/00 ,  C12N9/10 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种特异性合成低分子量菊糖的菊糖蔗糖酶及其应用，其将氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的蛋白质作为菊糖蔗糖酶应用在合成菊粉中，其通过潜在的“非延续性”糖链延伸机制，特异性地合成了聚合度为3～40、平均分子量为2.1×103g/mol的菊糖，而不积累高分子量的菊糖。本发明实现了低分子量菊糖的高效生物合成，产率达50.6％，且生产成本低，所用设备少，具备工业规模化生产的潜力。

公开(公告)号：CN118773169A

公开(公告)日：2024-10-15

申请号：CN202410935114.9

申请日：2024-07-12

Applicant: 江南大学

Inventor： 倪大伟 ,  沐万孟 ,  杜智慧 ,  张书琦 ,  张文立 ,  徐炜 ,  光翠娥

IPC: C12N9/24 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70 ,  C12P19/04

Abstract: 本发明涉及一种菊糖蔗糖酶突变体及其应用，本发明将来源于微生物Neobacillus bataviensis的菊糖蔗糖酶作为亲本，利用基因突变技术，将其149位的苏氨酸Thr替换成丝氨酸Ser，获得菊糖蔗糖酶的突变体酶，其氨基酸序列如SEQ ID No:1所示；本发明获得的菊糖蔗糖酶的突变体酶在最适催化条件下催化底物蔗糖合成菊糖过程中，相对总酶活相较于未突变前提升了57％，极大的加快了菊糖酶法合成的工业化进程。

公开(公告)号：CN113201512A

公开(公告)日：2021-08-03

申请号：CN202110613892.2

申请日：2021-06-02

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  倪大伟 ,  徐炜

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/18 ,  C12P19/00

Abstract: 本发明公开了一种高产蔗果三糖的菊糖蔗糖酶突变体，属于酶的基因工程技术领域。本发明将来源于微生物Lactobacillus reuteri 121的部分序列截断的菊糖蔗糖酶作为亲本，构建了单点突变体酶R425W。R425W显著改变了产物链长，使菊糖蔗糖酶失去合成多糖的能力，大量积累低聚果糖，尤其是蔗果三糖。经反应条件优化，R425W生产蔗果三糖的产量最高可达206g/L。生产条件为pH 6.5的磷酸盐缓冲液，45℃，700g/L的蔗糖，15μg/mL的加酶量，反应时间为36h。这一发现对于工业化制备蔗果三糖，以及菊糖蔗糖酶的工业化应用有重要的研究价值。